Болезни и вредители пчел - часть 40

10 мин для устранения антибактериальных свойств меда. После

остывания содержимого пробирок вносят по 0,1 мл в 2 луночки от

каждой навески (для исследования одной пробы используют одну

чашку). Чашки переносят в термостат, где выдерживают

 ч

при 37 °С. По истечении указанного времени чашки просматрива-

ют. Наличие зоны угнетения вокруг луночек указывает на при-

сутствие в меде антибиотика. Такой мед не допускают в продажу,

а направляют в кондитерскую промышленность, где его обраба-

тывают в течение

 ч температурами от 60 до 100 °С, которые

разрушают антибиотики.

П р и г о т о в л е н и е

 Ампулу с высу-

шенным штаммом вскрывают и в нее стерильно добавляют 0,5 мл

дистиллированной воды. После полного растворения содержимое

переносят пастеровской пипеткой в чашки Петри с 2

 мясо-

пептонным агаром с рН

 и выращивают

 ч в термо-

стате при температуре 37

 Берут колонии с характерными

признаками для необходимой культуры, высевают на скошенный

в пробирках 2

 мясо-пептонный агар и инкубируют

20 ч. Выращенную культуру смывают с поверхности агара

и высевают в матрицы со средой, состоящей из 2,5 % агара,

приготовленного на бульоне Хоттингера, содержащего 33 мг %

аминного азота. Споры выращивают

 сут при температуре

37 °С. После обнаружения в мазках в поле зрения микроскопа

 % спор проводят смыв дистиллированной водой. Взвесь

спор прогревают при температуре

 °С в течение 30 мин

и центрифугируют. Отмывание спор с последующим прогревани-

ем проводят не менее 3 раз. Из основной взвеси готовят рабочую

взвесь по стандарту мутности 10.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ

БОЛЕЗНЕЙ ПЧЕЛ. При реализации меда внутри страны и при

вывозе его в зарубежные страны ветеринарные лаборатории

обязаны исследовать мед, чтобы определить, есть ли в нем возбу-

дители инфекционных болезней пчел и человека. Контаминирова-

ние меда микроорганизмами может происходить во время выра-

ботки его пчелами, при откачивании из сотов и в процессе реали-

зации. В мед могут попадать сальмонеллы, энтеротоксический

стафилококк, туберкулезная палочка; микробы, патогенные для

пчел и их расплода; микробы и грибы, вызывающие порчу меда

вследствие их ферментативной деятельности.

Пчелы в поисках корма посещают любой источник сахара,

в том числе и хозяйственные отбросы вблизи ларьков (оберточ-

ная бумага мороженого, вода), столовых, ресторанов, кондитер-

ских предприятий и пр. Мед может быть сильно контаминирован

туберкулезной палочкой, если пасека расположена вблизи скот-

ных дворов, где содержатся больные животные. Микобактерии

туберкулеза сохраняют свою жизнеспособность и патогенность

в меде при хранении его в комнатных условиях

 °С) в

течение

 дней, а при температуре

 °С —

день.

314

Кишечные и дизентерийные палочки тоже могут заноситься

пчелами в мед, где сохраняются до 2 сут.

 При непосредственном высеве растворов меда на питатель-

ные среды рост микроорганизмов наблюдается не всегда из-за

малой концентрации их в меде. Поэтому лучше предварительно

произвести концентрацию микробов. Для этого 15—20 г меда

растворяют в стерильной водопроводной воде и 2 раза центрифу-

гируют в течение 15 мин при 2000 об/мин. В результате этого

происходит концентрация микробов во взятой пробе и отмывание

их от Сахаров меда. Полученный осадок высевают на питательные

среды. Для выделения возбудителей американского гнильца ис-

пользуют среду Томашеца (МПСА) и мясо-пептонный сыворо-

точный бульон (МПСБ) с добавлением 10 % свежей лошадиной

сыворотки; европейского гнильца — обычные МПА и МПБ, для

Strept.

 — среду Бейли или Черепова и картофельный

бульон; парагнильца (Вас. paraalvei) — мясо-пептонный сыво-

роточный агар с добавлением экстракта эритроцитов (среда

Тошкова) и мясо-пептонный сывороточный бульон; септицемии

 гафниоза и сальмонеллеза — МПА

 МПБ; аспергиллеза (Aspergillus flavus) и аскосфероза (Ascos-

phera apis) — агар Сабуро или Чапека.

Культуры выращивают в термостате при 37 °С в аэробных

условиях в течение

 дней. Идентификацию выросших культур

проводят в соответствии с существующими бактериологическими

и серологическими методами.

Э к с п р е с с - м е т о д ы  о б н а р у ж е н и я  в о з б у д и -

т е л е й

 ых  б о л е з н е й в  м е д е . Для исследо-

ваний проб на наличие возбудителей необходимы следующие

аппаратура и материалы:

люминесцентный микроскоп МЛ-2 с набором прилагаемых

к нему фильтров или обычный биологический микроскоп
МБИ-3, МБИ-4), оборудованный специальным люминесцентным
устройством;

осветитель для возбуждения люминесценции препарата

(источником света служит ртутная лампа СВД-250);

светофильтры СС-4, СС-8;

опак-иллюминатор

 или

предметные и покровные обезжиренные стекла;

флуоресцирующие антиларвейные и антиальвейные сыво-

ротки и контрольная кроличья люминесцирующая сыворотка;

спирт этиловый и метиловый;
забуференный физиологический раствор (фосфатный бу-

фер);

забуференный глицериновый раствор (глицериновый бу-

фер);

нефлуоресцирующее иммерсионное масло;

иммерсионные

 работы с иммерсионными

объективами пользуются специальными нефлуоресцирующими

315

жидкостями, которые прилагаются к люминесцентному микроско-

пу; при отсутствии их можно взять диметилфталат.

Глицериновый буфер готовят смешиванием девяти частей

нейтрального глицерина и одной части фосфатного буфера (рН

8,0). Препараты фиксируют этиловым или метиловым спиртом;

промывают препараты фосфатным буфером (рН 7,4), который

готовят путем смешивания 30 мл

 раствора однозамешенно-

го фосфорнокислого натрия или калия, 120 мл

 раствора

двузамещенного фосфорно-кислого натрия и 8,78 г хлористого

натрия с 1 л дистиллированной воды.

Жидкий мед предварительно тщательно перемешивают и бе-

рут нужное количество. Пробы из засахаренного меда берут

с разной глубины щупом. Сотовый мед берут в количестве 30 г и,

удалив забрус, погружают в

 мл стерильного физраствора

для полного растворения меда в ячейках сотов.

Навеску меда

 г помещают в стерильную колбочку

и добавляют

 мл физраствора (температура

 °С).

Растворенный мед центрифугируют в течение 15 мин при

2000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, к цен-

трифугату снова добавляют

 мл физраствора, взбалтыва-

ют и еще раз центрифугируют. Из полученного центрифугата

параллельно делают два мазка, один из которых окрашивают по

Граму, другой, на споры,— 2

 раствором карболового

фуксина и производят посевы на питательные среды. Выросшую

культуру возбудителя идентифицируют.

В тех случаях, когда из-за низкой плотности инфицирования

меда бактериологическим методом выделить возбудителей не-

льзя, можно применять метод флуоресцирующих антител с ис-

пользованием антиларвейной и антиальвейной сывороток. Для

этой цели используют следующую методику.

 г меда

растворяют в

 мл физраствора и центрифугируют. Из

центрифугатов делают мазки, фиксируют этиловым спиртом в те-

чение 15 мин, высушивают на воздухе, затем увлажняют фосфат-

ным буфером (рН 7,4) и опять высушивают. Препараты окраши-

вают прямым способом. Наносят на мазок каплю соответствую-

щей флуоресцирующей сыворотки, помещают в чашку Петри

с влажным тампоном ваты и выдерживают при температуре 37

в течение

 мин. Окрашенные мазки промывают тем же

буферным раствором, дважды сменяя раствор через 20 мин,

и ополаскивают дистиллированной водой. На высушенные мазки

помещают каплю буферного глицерина, покрывают тонким по-

кровным стеклом, на которое наносят нефлуоресцирующее им-

мерсионное масло, и просматривают под люминесцентным микро-

скопом

 по общепринятой методике.

Степень свечения микробных клеток оценивают по четы-

рехбалльной системе:

 сияющее золотисто-зеленоватое свечение палочек

и спор Вас. larvae с ярко выраженными контурами микробных

клеток;

316

яркое зеленоватое свечение палочек и спор с четко

выраженными контурами;

 умеренное зеленовато-желтоватое свечение клеток и

спор с отчетливыми контурами;

 слабое сероватое свечение микробных клеток и спор

с неясными контурами;

— клетки незаметны или в виде серых теней.

Оценивают степень свечения большинства клеток. В контро-

ле с чистой культурой Вас. larvae, окрашенной флуоресцирующей

антиларвейной сывороткой, свечение должно быть как при четы-

рех баллах; при окраске препаратов, приготовленных из центри-

фугатов меда антиальвейной флуоресцирующей сывороткой,

свечение должно быть как при двух и одном баллах.

САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА МЕДА. Физико-химические пока-

затели доброкачественного цветочного и падевого меда должны

соответствовать требованиям, указанным в таблице

 Физико-химические показатели цветочного и падевого медов

(в норме)

В продажу не допускается мед: а) находящийся в грязной,

ржавой, оцинкованной, медной и крашеной посуде; б) с отстоем

и признаками брожения; в) имеющий неудовлетворительные

органолептические показатели (ненормальный цвет); г) с нали-

чием посторонних запахов (в том числе лекарственных препара-

тов, применявшихся для лечения пчелиных семей); д) с непри-

ятным привкусом (горький, кислый и др.); е) с ненормальной

консистенцией (слизистая, нетягучая, водянистая и др.); ж) име-

ющий повышенную влажность; и) перегретый, имеющий кара-

мельный привкус; к) фальсифицированный (свекловичный и

317

искусственный инвертированный сахара, картофельная патока,

мука, крахмал, желатин и другие вещества); л) загрязненный

механическими примесями (песок, земля, камни и др.) (при

поверхностном загрязнении меда делают зачистку); м) с повы-

шенной общей кислотностью; н) содержащий антибиотики,

пестициды, возбудители болезней; о) ядовитый.

 ЭКСПЕРТИЗА ВОСКА

И ВОЩИНЫ.

 это продукт восковых желез пчел. При

комнатной температуре он представляет собой твердое, мелко-

зернистое на изломе вещество, окраска которого колеблется от

бесцветной до темно-желтой, светло-коричневой или коричневой.

Воск широко применяется в разных отраслях народного

хозяйства. В большом количестве он требуется для изготовления

вощины, используемой в пчелиных семьях.

По своему составу воск сложное органическое соединение.

В его состав входит около 300 различных веществ, в том числе:

сложные эфиры —

 свободные жирные кислоты —

15 %, углеводороды —

 %,

 до 2,5 %, ароматиче-

ские, красящие и минеральные вещества, смолы и др.

При температуре 30 °С воск твердый, при 35 °С пластичный,

при

 плавится и становится жидким. Он кипит при темпе-

ратуре 100 °С, горит при 300 °С. Воск хорошо растворяется при

нагревании в сероуглероде, ацетоне, бензоле, бензине, скипидаре,

петролейном эфире, четыреххлористом углероде, ди- и трихлорэ-

тилене, хлороформе и др.; плохо растворяется в спирте и совсем

не растворяется в воде и глицерине. Плотность его

В зависимости от технологии переработки воскового сырья

натуральный пчелиный воск подразделяют на воск пасечный,

получаемый на пасеках при перетапливании сотов, и воск про-

изводственный, изготовляемый на воскозаводах при переработке

мервы, пасечных вытопок. Для исследования от каждой единицы

упаковки продукции берут пробы воска общей массой 150 г.

ОРГАНОЛЕПТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ.  Ц в е т и

с т р у к т у р у воска в изломе определяют визуально,

 органолептически. Воск пасечный должен быть белого,

светло-желтого, желтого, темно-желтого или серого цвета, а воск

производственный — светло-коричневый с естественным воско-

вым запахом. Воск с добавлением канифоли, парафина и стеари-

на издает характерный для них запах.

Необходимо учитывать, что цвет натурального пчелиного

воска может измениться под влиянием металла оборудования,

используемого для переработки и емкости для хранения восково-

го сырья, так как в жирных кислотах воска они частично раство-

ряются. Так, при соприкосновении с железом воск приобретает

бурую окраску. Оцинкованное железо окрашивает воск в темно-

серый, а медь — в серо-зеленый или сине-зеленый цвета. Поэтому

оборудование для переработки воскового сырья должно быть

изготовлено из нержавеющей стали, никеля, алюминия, дерева.

При длительном хранении, особенно при минусовых темпера-

318

турах, на воске появляется серый налет, который нельзя считать
загрязнением, его легко удалить.

По органолептическим и физико-химическим показателям

воск должен соответствовать требованиям, указанным в таблице

12.

 Фаль-

сификация — это подмешивание к пчелиному воску каких-либо

веществ, чаще двух видов:

а) соединяющиеся или перемешивающиеся с воском механи-

чески (мел, гипс, белила, охра, глина, крахмал, костная и горохо-

вая мука, сера, вода и др.);

б) образующие с воском однородные, трудно разделимые

смеси (парафин, церезин, технический воск нефтяного происхож-

дения, стеарин, различные смолы и др.). Обнаружить их можно

с помощью специальных способов исследования, изложенных

в соответствующих инструкциях.

12. Характеристика нормального воска (ГОСТ

Показатели

Пасечный воск

Производственный

Цвет Белый, светло-жел- Не темнее светло-ко-

тый, темно-желтый, ричневого

серый

Запах Естественный, во- Специфический

Структура на изломе Однородная Мелкозернистая

Содержание воды,

 не 0,5 1,5

более

Содержание механиче- 0,3 0,3

ских примесей,

 не бо-

лее

Глубина проникновения до 6,5
иглы при 20 °С, мм

При фальсификации пчелиного воска качество его заметно

ухудшается, а изготовленная из него вощина непригодна для

использования в пчеловодстве.

ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ ВОЩИНЫ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ АМЕРИ-

КАНСКОГО И ЕВРОПЕЙСКОГО ГНИЛЬЦОВ.

в а н и е

 На складах воскозаводов из разных мест

партии вощины берут 1 % стандартных пачек вощины и маркиру-

ют их. При соблюдении правил стерильности непосредственно на

воскозаводе вскрывают товарную упаковку пачки и из разных

мест берут для исследования 5 листов вощины. С обеих поверхно-

стей листов делают смывы путем тщательного протирания по-

верхностей листа ватно-марлевым тампоном, смоченным 50 мл

стерильного физраствора. Собранную жидкость (смывы) поме-

щают в стерильные флаконы и доставляют в ветеринарную

лабораторию для исследования.

319

В лаборатории смывы разливают в стерильные центри-

фужные пробирки и центрифугируют при 2000 об/мин в течение

15 мин. Одну часть полученного осадка высевают в чашки Петри

с мясо-пептонным сывороточным агаром, другую — в две стек-

лянные баночки Флоринского с 30 мл мясо-пептонного сыворо-

точного бульона.

В некоторых случаях вместо смывов берут непосредственно

вощину (от выбранной пачки) по 10 г от каждого листа. Пробы

вощины помещают в стерильные бумажные пакеты, маркируют

соответственно номеру пачки и доставляют в ветлабораторию, где

каждую пробу отдельно помещают в стерильную колбу с при-

тертой пробкой, заливают 50 мл петролейного эфира, ксилола или

серного эфира (работу проводят в вытяжном шкафу), после чего

колбу выдерживают с закрытой пробкой на водяной бане при

температуре 35—50 °С в течение 6 ч. Растворенные пробы воска

центрифугируют при 2000 об/мин в течение 20 мин. Осадок высе-

вают на твердую и жидкую питательные среды так же, как смывы

с поверхности листов вощины. Идентификацию возбудителей

американского и европейского гнильцов, полученных в посевах,

осуществляют в соответствии с существующими методами бакте-

риологической и серологической диагностики названных возбуди-

телей.

Э к с п р е с с - м е т о д  и с с л е д о в а н и я  в о щ и н ы  н а

наличие возбудителя американского гнильца Вас. larvae и спор

 apis (по

 и соавт., 1975). Для исследования

растворяют 2 г вощины в 20 мл хлороформа. Раствор разливают

в 2 пробирки, добавляют по 0,5 мл дистиллированной воды и цен-

трифугируют 10 мин при 3000—4000 об/мин.

Для микроскопического анализа берут материал из слоя,

находящегося между воском и водой, так как в этом месте сосре-

дотачиваются споры возбудителей. Бакпетлей готовят на пред-

метных стеклах мазки, которые исследуют общепринятыми мик-

роскопическими методами. При посеве спор Вас. larvae на

питательные среды, пригодные для культивирования этого возбу-

дителя, роста не наблюдается.

И с с л е д о в а н и е

 От каждой партии воска

берут в стерильные бумажные пакеты образцы из расчета: от

каждой тонны воска из разных мест партии 10 г. Пробы нумеруют

соответственно партии воска и измельчают, помещая во флаконы,

заливают 100 мл стерильного физраствора, встряхивают на

шюттель-аппарате 5 мин, центрифугируют и осадок высевают на

питательные среды, в 2 пробирки с МПА (рН

 и в одну —

с агаром Черепова. Первые 2 пробирки, предназначенные для

выделения Вас. larvae и Вас.

 нагревают при 98 °С 30 мин

для уничтожения вегетативных форм микробов, третью пробирку

не подогревают, она служит для выделения Strept. pluton. Со-

держимое первой пробирки с МПА после прогревания выливают

в чашку Петри, а во вторую пробирку после охлаждения МПА до

45—50 °С добавляют 10 % стерильной лошадиной сыворотки

320

и после перемешивания сливают в чашку Петри. После застыва-

ния агара чашки переносят в термостат и выдерживают при

37

Выросшие культуры просматривают под микроскопом.

 От каждой тонны мервы из

разных мест берут пробы массой по 25—30 г. Затем их тщательно

измельчают в ступке, добавляют 30 мл стерильного физраствора,

перемешивают, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и полу-

ченную жидкость центрифугируют. Весь осадок от каждой пробы

в отдельности высевают на питательные среды по методикам

исследования вощины и топленого воска, приведенным выше.

Посевы культивируют при температуре 37

 в течение 10 дней.

Полученные культуры возбудителей идентифицируют в соответ-

ствии с Методическими рекомендациями по лабораторной ди-

агностике гнильцовых болезней.

 ЭКСПЕРТИЗА ПРОПО-

ЛИСА. Методы определения качества прополиса остаются пока

несовершенными и не дают возможности достоверно давать

товарную и санитарную оценку этому продукту. При исследова-

нии прополиса прежде всего необходимо учитывать, для каких

целей он предназначается. Высокие требования должны предъ-

являться к прополису, который будет использоваться для ле-

чебных целей.

Нельзя нагревать прополис и подвергать его первичной

обработке, в том числе и водой, подмешивать к нему посторонние

примеси (воск, сушь, мерву, вытопки и пр.). Не допускают к ис-

пользованию для лечебных целей фальсифицированный пропо-

лис, особено с содержанием гудрона, асфальта и прочих вредных

примесей, а также собранный в ульях пчелиных семей, погибших

от отравления ядохимикатами. Такой прополис направляют на

технические цели.

Степень  з а г р я з н е н и я прополиса определяют по мето-

ду В. Д. Чернигова

 Прополис кипятят

 раз с двумя

объемами этилового спирта, затем смесь фильтруют и фильтр

дополнительно промывают горячим спиртом. На фильтре оста-

ются твердые, не растворимые в спирте частички прополиса. По

количеству и качеству этих частиц определяют степень его меха-

нического загрязнения. Профильтрованный спиртовой раствор

прополиса представляет собой в основном раствор смол и воска.

Он прозрачный, коричневого цвета, с приятным смолистым аро-

матом. Если спиртовой раствор не отвечает этим требованиям, то

прополис считают низкого качества или фальсифицированным.

Для определения  к а ч е с т в а прополиса можно использо-

вать реакцию с раствором калия перманганата по Т. В. Вахони-

ной и соавт. (1975). Для этого 200 мг прополиса измельчают

и помещают в колбу емкостью 250 мл, добавляют туда 5 мл этило-

вого спирта-ректификата и выдерживают 1 ч. Затем в колбу

прибавляют 100 мл дистиллированной воды комнатной темпера-

туры и тщательно перемешивают. Раствор фильтруют через