РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1)

154

8.4.2.1 Сохранение образцов,

зараженных вирусами, вироидами
и бактериеподобными
организмами, культуру которых
невозможно выделить, такими
как фитоплазмы и Liberibacter

Во всех возможных случаях необхо-
димо сохранить оригинальную рас-
тительную ткань (например, ткань
растений, зараженных вирусом).

Что касается механически переда-
ваемых вирусов и вироидов, зара-
женные травянистые или древесные
растения могут храниться вместо или
в дополнение к оригинальной расти-
тельной ткани.

Что касается всех вирусов, вироидов и
микроорганизмов, культуру которых
невозможно выделить (например, фи-
топлазмы,

Liberibacter

), то также могут

храниться зараженные растения.

Большинство вирусов, вироидов и
микроорганизмов, культуру которых
невозможно выделить, хорошо со-
храняются. Однако некоторые из этих
организмов могут разрушиться в те-
чение этого процесса по причине их
нестабильной природы – например,
ткани растений, хранящиеся в моро-
зильнике, со временем разрушаются
после многочисленных циклов оттаи-
вания и заморозки.

Таблица 3.

Преимущества, недостатки и типы образцов, подходящих для каждого метода сохранения в гербарии

8. Референтные коллекции

Метод

сохранения

Типы

образцов

Преимущества

Недостатки

Воздушная сушка

Сухие и менее

мясистые образцы

Низкие организационные и

эксплуатационные издержки.

Симптомы хорошо сохраняются

Нуклеиновые кислоты

плохо сохраняются

Сушка при помощи

десикантов

Сухие и менее

мясистые образцы

Низкие организационные и

эксплуатационные издержки.

Нуклеиновые кислоты сохраняются

относительно хорошо

Может понадобиться

заменять десиканты.

Симптомы хорошо

не сохраняются

Сушка под прессом

Сухие, менее

мясистые и менее

объемные образцы

Низкие организационные и

эксплуатационные издержки.

Симптомы хорошо сохраняются

Нуклеиновые кислоты

плохо сохраняются

Лиофильная

сушка

Подходит для

большинства

образцов

Нуклеиновые кислоты

хорошо сохраняются

Ампулы для лиофильной сушки

ограничивают размер образцов.

Организационные и

эксплуатационные расходы выше.

Симптомы не сохраняются хорошо

Заморозка

Подходит для всех

типов образцов

Нуклеиновые кислоты

хорошо сохраняются

Пространство морозильника может

быть ограничено. Организационные

и эксплуатационные расходы выше.

Нуклеиновые кислоты могут

разрушиться в процессе многочисленных

заморозок-оттаиваний

Ламинирование

Сухие и

относительно

плоские образцы

Низкие организационные и

эксплуатационные издержки.

Быстрая и легкая подготовка.

Симптомы хорошо сохраняются

Трудно изучать образцы

под лупой или микроскопом.

Трудно выделять образцы

для дополнительных анализов.

Нуклеиновые кислоты плохо сохраняются

Консервирование

Очень мясистые или

хрупкие образцы

Низкие организационные и

эксплуатационные издержки.

Симптомы хорошо сохраняются

Нуклеиновые кислоты

плохо сохраняются в

некоторых случаях консервирования

155

Наилучший метод сохранения – это

лиофильная сушка растительной тка-

ни; однако хорошим методом также

является сушка растительной ткани

на десикантах (например, хлористый

кальций). Замороженная растительная

ткань также хороша до тех пор, пока

материал слишком часто не подверга-

ется циклам оттаивания и заморозки.

Микроорганизмы, выделение культу-

ры которых невозможно (например,

фитоплазмы,

Liberibacter

), можно со-

хранить только в живых растениях

для проведения биологических ра-

бот (например, заражение привити-

ем или насекомыми).

8.4.3 Методы сохранения

Общее оборудование, расходные ма-

териалы и реактивы:

канцелярские товары;

этикеточная бумага;

тонкая оберточная бумага;

секционный набор (пинцеты, скаль-

пели, ножницы);

разделочная доска;

контейнеры для образцов (например,

большие полиэтиленовые пакеты, бу-

мажные конверты, стеклянные фла-

коны);

десиканты: этиловый спирт, изопро-

пиловый спирт или коммерческий

десикант (например, Trigene, Virkon);

средства индивидуальной защиты

(например, лабораторные халаты,

одноразовые перчатки, маски, очки);

камера, столик для фотографирова-

ния и сканер;

компьютер и принтер;

холодильник.

8.4.3.1 Воздушная сушка

Образцы можно высушить, используя

дегидратор для сушки пищевых продук-

тов, духовку с конвекцией или просто ко-

робку или ящик с вентилятором внутри

для обеспечения циркуляции воздуха,

чтобы облегчить сушку.

Примечание:

При создании некото-

рых референтных коллекций патогенов
растений и гербариев используют ми-
кроволновые печи для сушки образцов;
однако этого делать не рекомендуется,
потому что некоторые части растений
могут взорваться, и процесс нагрева по-
вреждает ДНК образца, которая в буду-
щем может пригодиться для проведения
молекулярных исследований.

В качестве контейнеров для образцов

могут использоваться изготовленные
на заказ конверты для гербария, почто-
вые конверты, воздухонепроницаемые
пластмассовые коробки или герметизи-
руемые пластиковые пакеты.

Процедура воздушной сушки образцов:

Разложите образцы на лотках для об-
легчения сушки.

Поместите лотки в сушилку и включи-
те сушилку.

Соберите образцы, когда они полно-
стью высохнут.

Наклейте на контейнеры для каждого
образца этикетки с уникальным но-
мером образца.

Поместите высушенные образцы в
контейнеры с этикетками.

Поставьте контейнеры в морозиль-
ную камеру на 2 дня при температуре
-18°C, чтобы все вредные организмы
гербария погибли. Примечание: по-
ложите контейнеры из бумаги (напри-
мер, конверты для гербария, конвер-
ты) в герметизируемые пластиковые
пакеты во избежание конденсации
воды.

Удалите весь конденсат воды с по-
верхности контейнеров.

Храните контейнеры с образцами в
системе хранения.

Обновите базу данных по гербарию.

8.4.3.2 Сушка под прессом

Список оборудования, расходных ма-

териалов и реактивов:

156

газетная или фильтровальная бумага;

деревянная доска (существуют ком-

мерчески производимые прессы для

растений);

обхваты;

груз;

бумажная папка;

веревочки (например, зубные нити,

хлопчатобумажная нитка);

ленты (используйте высококаче-

ственные ленты, чтобы не допустить

их отделения от образца через не-

сколько лет).

Процедура сушки образцов под прессом:

Выложите и разместите образцы

между листами газет (или фильтро-

вальной бумаги).

Примечание:

Согни-

те длинные стебли в форме буквы «V»

или «W».

Напишите номер образца на листке

бумаги и положите его вместе с об-

разцом.

Между образцами дополнительно

положите газеты, чтобы они впитыва-

ли влагу.

Положите стопку газет с образцами

между двумя деревянными досками.

Завяжите обхваты вокруг стопки и за-

тяните их.

Поместите тяжелый груз сверху на

стопку для добавления дополнитель-

ного веса.

Держите стопку в теплом и сухом ме-

сте.

Правильно разместите образцы че-

рез несколько часов или дней их на-

хождения под прессом.

Ежедневно меняйте газеты в течение

первых нескольких дней, а затем чуть

реже в зависимости от состояния

образцов и относительной влажно-

сти.

Примечание:

Некоторые виды

растений становятся темно бурыми,

если газеты часто не менялись, что-

бы дать образцам достаточно быстро

высохнуть. Использованные газеты

следует выбросить или тщательно

высушить перед повторным исполь-

зованием.

Регулярно осматривайте образцы,
чтобы предотвратить появление пле-
сени.

Собирайте образцы, которые полно-
стью высохли.

Приклейте на бумажные папки номер
образца.

Положите в бумажные папки образ-
цы и зафиксируйте их веревочками и
лентами.

Обновите базу данных по референт-
ной коллекции фитопатогенов и гер-
бария.

8.4.3.3 Сушка при помощи десикантов

Список оборудования, расходных
материалов и реактивов:

высушивающие средства, например,
хлорид кальция или впитывающие
влагу шарики силикагеля (

примеча-

ние:

смотрите национальные руко-

водства по надлежащей утилизации
этих токсичных химических веществ);

контейнеры для хранения с завинчи-
вающимися крышками (пластмассо-
вые или стеклянные);

хлопковая вата или бумажное поло-
тенце (для недопущения соприкосно-
вения хлорида кальция с раститель-
ной тканью).

Подготовка контейнеров:

Добавьте десикант на дно пластмас-
сового контейнера.

Примечание:

на-

деньте перчатки, маску для лица и
очки для работы с этим химическим
веществом.

Плотно приложите хлопковую вату
или бумажное полотенце ко дну кон-
тейнера для того, чтобы создать ба-
рьер между хлоридом кальция и рас-
тительной тканью.

Вложите этикетку с указанием, как
минимум, уникального идентифика-
ционного номера.

8. Референтные коллекции

157

Подготовка образцов:

Выберите растительную ткань для со-
хранения. Она должна быть настоль-
ко свежей, насколько это возможно,
и должна содержать симптомы.

При-

мечание:

Использования сухой или

сгнившей ткани следует избегать. Ра-
ботайте с зараженными растительны-
ми материалами в перчатках. Образцы
все время должны находиться на льду.

Удалите всю влагу, аккуратно высу-
шив поверхность бумажным поло-
тенцем.

На чистой и продезинфицированной
разделочной доске порежьте расти-
тельную ткань на кусочки, которые
поместятся в контейнер, используя
лезвие скальпеля или бритвы.

При-

мечание:

Работая с растительным

материалом, зараженным разными
организмами, меняйте перчатки, ути-
лизируйте одноразовые лезвия брит-
вы, дезинфицируйте разделочную
доску и лезвие таким дезинфициру-
ющим веществом, как 70%-ный рас-
твор спирта, препарат «Виркон» или
водный раствор гипохлорита натрия,
или такими влажными салфетками,
как «Isowipes», «Mediwipes», «Trigene»
или «V-wipes».

Сушка и хранение образцов:

Поместите кусочки растительной тка-
ни в пластмассовый контейнер.

Плотно закройте пластмассовый кон-
тейнер.

Наклейте на контейнер этикетку с
надписью стойкими чернилами или
карандашом или напрямую на кон-
тейнере сделайте надпись стойки-
ми чернилами.

Примечание:

Мини-

мальное количество информации,
которое должно быть размещено на
этикетке, включает в себя научное
название растительного материала
и уникальный идентификационный
номер.

Храните при комнатной температуре

в сухом прохладном месте.

Обновите базу данных по гербарию.

8.4.3.4 Лиофильная сушка

Список оборудования, расходных

материалов и реактивов:

холодильник с температурой 4°C или

холодильный склад;

лиофильная сушилка;

стеклянные флаконы, резиновые

уплотнители и завинчивающиеся

крышки для лиофильной сушилки;

впитывающие влагу шарики силика-

геля;

хлопковая вата или бумажное поло-

тенце;

лезвия скальпеля или лезвия бритвы;

одноразовые перчатки;

разделочная доска;

дезинфицирующее средства (напри-

мер, 70%-ный раствор этилового

спирта; влажные салфетки, например

Trigene);

бумажные этикетки (чтобы положить

их внутрь стеклянных флаконов);

клейкие этикетки (для приклеивания

на крышки флаконов);

фломастеры, ручка;

компьютерная база данных или лист

бумаги для записей.

Подготовка флаконов:

Положите несколько шариков впиты-

вающего влагу силикагеля в каждый

флакон (3–5 флаконов для каждого

образца).

Плотно ко дну флакона приложите

хлопковую вату или бумажное поло-

тенце для создания барьера между

шариками силикагеля и образцом.

Вложите этикетку с указанием, как

минимум, уникального идентифика-

ционного номера.

Подготовка образца:

Выберите растительную ткань для со-

хранения. Она должна быть настоль-
ко свежей, насколько это возможно,

158

и иметь симптомы.

Примечание:

Ис-

пользования сухой или сгнившей
ткани следует избегать. Работайте с
зараженными растительными мате-
риалами в перчатках. Образцы все
время должны находиться на льду.

Порежьте растительную ткань на ма-
ленькие кусочки, используя лезвие
скальпеля или лезвие бритвы и про-
дезинфицированную разделочную
доску.

Примечание:

Работая с рас-

тительным материалом, заражен-
ным разными организмами, меняйте
перчатки, утилизируйте одноразо-
вые лезвия бритвы, дезинфицируйте
разделочную доску и лезвие таким
дезинфицирующим веществом, как
70%-ный раствор спирта, препарат
«Виркон» или водный раствор ги-
похлорита натрия, или такими влаж-
ными салфетками, как «Isowipes»,
«Mediwipes», «Trigene» или «V-wipes».

Перенесите приблизительно 0,5 г из-
мельченной растительной ткани в
подготовленный стеклянный флакон
с этикеткой.

Сушка и хранение образцов:

Поместите флаконы на металличе-
ский стеллаж лиофильной сушилки.

Неплотно поместите резиновую про-
кладку на горлышко флакона.

Поместите стеллаж с подготовленны-
ми образцами в камеру лиофильной
сушилки.

Оставьте лиофильную сушилку рабо-
тать на ночь.

Примечание:

Цвет си-

ликагеля должен стать темно синим,
когда образец полностью высохнет.

Запечатайте флаконы, закрутив заку-
поривающий механизм.

Прикрутите пластмассовую крышку.

Поставьте инвентарный номер на
верх крышки.

Перенесите флаконы в холодильник
с температурой 4°C для длительного
хранения.

Примечание:

Если силика-

гель превратится из синего в розовый,

это показатель того, что прокладка на
флаконе, возможно, пропускает влагу
и растительную ткань внутри нужно
незамедлительно высушить или вы-
бросить.

Обновите базу данных по референт-
ной коллекции фитопатогенов и гер-
бария.

8.4.3.5 Заморозка

Список оборудования, расходных
материалов и реактивов:

контейнеры для хранения (пластмас-
совые или стеклянные) с завинчиваю-
щимися крышками или герметизиру-
емые пластиковые пакеты;

хлопчатобумажное или бумажное по-
лотенце для отделения хлорида каль-
ция от растительной ткани;

клейкие этикетки, подходящие для
заморозки;

фломастеры или карандаши;

лезвия скальпеля или лезвия бритвы;

одноразовые перчатки;

разделочная доска;

дезинфицирующее средство (на-
пример, 70%-ный раствор этилово-
го спирта, препарат «Виркон», рас-
твор гипохлорита натрия, или такие
влажные салфетки, как, например,
«Trigene»).

компьютер/база данных или лист бу-
маги для записей.

Подготовка контейнера:

Подготовьте клейкую этикетку с ука-
занием, как минимум, уникального
идентификационного номера или на-
пишите его прямо на контейнере или
пластиковом пакете стойкими черни-
лами.

Примечание:

Со временем фло-

мастер снаружи может стереться.

По выбору: Можно внутрь контейне-
ра или пластикового пакета вложить
бумажную этикетку.

8. Референтные коллекции

159

Подготовка образцов:

Выберите растительную ткань для со-
хранения: Она должна быть настоль-
ко свежей, насколько это возможно,
и с симптомами.

Примечание:

Исполь-

зования сухой или сгнившей ткани
следует избегать. Работайте с зара-
женными растительными материала-
ми в перчатках. Образцы все время
должны находиться на льду.

Удаляйте всю влагу, мягко протирая
поверхность бумажным полотенцем.

Расправьте растительный материал,
если это возможно.

Поместите растительную ткань в кон-
тейнер или пластиковый пакет, поме-
ченные этикеткой, и закройте их.

Примечание:

Работая с растительным

материалом, зараженным разными орга-
низмами, меняйте перчатки, утилизируй-
те одноразовые лезвия бритвы, дезин-
фицируйте разделочную доску и лезвие
таким дезинфицирующим веществом,
как 70%-ный раствор спирта, препарат
«Виркон» или водный раствор гипохло-
рита натрия, или такими влажными сал-
фетками, как «Isowipes», «Mediwipes»,
«Trigene» или «V-wipes».

Хранение образцов

Храните образцы в морозильной ка-
мере с температурой -20°C или, же-
лательно, в морозильной камере с
температурой -80°C. Примечание: Не
допускайте многочисленных оттаива-
ний и заморозок, поскольку это раз-
рушит растительную ткань.

Обновите базу данных по референт-
ной коллекции фитопатогенов и гер-
бария.

8.4.3.6 Ламинирование

Список оборудования, расходные

материалы и реактивы:

ламинатор;

листы ламинационной пленки.

Процедура ламинирования сухих образцов:

Положите и разместите образцы меж-

ду листами ламинационной пленки.

Напишите номер образца на листке

бумаги и положите ее с образцом.

Также можно сделать надпись на ли-

сте ламинационной пленки после ла-

минирования.

Включите ламинатор и подождите,

пока он не нагреется и не будет готов

к ламинированию.

Пропустите листы ламинационной

пленки через ламинатор.

Выключите ламинатор.

Обновите базу данных по референт-

ной коллекции фитопатогенов и гер-

бария.

8.4.3.7 Консервирование

Список оборудования, расходных

материалов и реактивов

воздухонепроницаемые стеклянные

контейнеры;

консервирующие вещества (напри-

мер, 70%-ный этиловый спирт).

Процедуры подготовки консервирования

образцов

Слейте лишнюю жидкость, если необ-

ходимо.

Положите образец в стеклянный кон-

тейнер, заполненный консервиру-

ющим веществом.

Примечание:

удо-

стоверьтесь, что образец полностью

погружен в консервирующее веще-

ство и крышка стеклянного контейне-

ра плотно закрыта.

Приклейте на стеклянный контейнер

этикетку с номером образца и типом

использованного консервирующего

вещества.

Меняйте один или несколько раз кон-

сервирующее вещество, в котором

находятся образцы с высоким содер-

жанием воды.

Обновите базу данных по референт-

ной коллекции фитопатогенов и гер-

бария.

160

8.4.3.8 Живые культуры

Живые культуры грибов и бактерий

можно поддерживать посредством часто-
го их переноса на свежую питательную
среду. Хранение культур в холодильнике
(4°C) или погруженными в минеральное
масло могут продлить период времени
между посевами на новую среду. Грибные
культуры, которые формируют споры, мо-
гут сохраняться посредством лиофиль-
ной сушки в герметичных стеклянных
ампулах. Большинство культур могут го-
дами храниться в морозильных камерах
(–20°C или –40°C) и камерах глубокой за-
морозки (–80°C); и десятилетиями в кри-
огенных морозильных камерах (ниже
–135°C) и в парах жидкого азота, при этом
наибольшая сохранность образцов обе-
спечивается последними двумя метода-
ми. Однако оомицеты, такие как

Pythium

Phytophthora

, лучше всего сохраняются в

стеклянных флаконах с водой в холодиль-
нике (4°C). Подробное описание этих ме-
тодов можно найти в приведенных ниже
справочных материалах:

Кирсоп Б.Е. и Дойль А.

1991 г. «Поддер-

жание микроорганизмов и культивируе-
мых клеток: руководство по лаборатор-
ным методам», 2-е издание. Издательство
«Академическая пресса», С. 288 /

Kirsop,

B.E. & Doyle, A.

1991. Maintenance of

microorganisms and cultured cells: a
manual of laboratory methods, 2nd edition.
Academic Press. 288 pp.

Смит Д. и Анйонс А.Х.С.

1994 г. «Со-

хранение и поддержание живых грибов»,
2-е издание. СК, Международный мико-
логический институт. С. 132 /

Smith, D. &

Onions, A.H.S.

1994. The preservation and

maintenance of living fungi, 2nd edition. UK,
International Mycological Institute. 132 pp.

Уоллер Дж.М., Ленне Дж.М. и Уол-

лер С.Дж.

, под ред. 2001 г. «Карманная

книга фитопатолога», 3-е издание. Вал-

лингфорд, СК, Международный центр
сельскохозяйственных исследований
/

Waller, J.M., Lenné, J.M. & Waller, S.J.

eds. 2001. Plant pathologist’s pocketbook,
3rd edn. Wallingford, UK, CAB International.
528 pp.

8.4.4 Маркировка и сбор данных

Каждый образец в референтной кол-

лекции фитопатогенов и в гербарии дол-
жен быть промаркирован уникальным
номером образца. На этикетке или в от-
дельной базе данных можно указать до-
полнительную информацию, такую, как
указана ниже:

научные названия растений;

научные названия патогенов;

часть растения или субстрат;

адрес и GPS-координаты места сбора;

ФИО лица, осуществившего сбор;

дата сбора;

ФИО лица, осуществившего иденти-
фикацию;

дата проведения идентификации;

метод, использованный для иденти-
фикации;

дата сохранения;

изображение;

симптомы, наблюдавшиеся на расте-
ниях;

полевые заметки;

кратковременные свойства (цвет, за-
пах, форма) перед сушкой.

На каждом микроскопическом пре-

парате должны быть наклеены этикетки
с уникальным номером образца, из ко-
торого он был приготовлен. На этикетке
также рекомендуется записать дополни-
тельную информацию, указанную ниже:

название патогена;

название растения-хозяина;

ФИО лица, осуществившего иденти-
фикацию;

дата проведения идентификации.

8. Референтные коллекции

161

8.5 Другие референтные коллекции

8.5.1 Прочие референтные материалы

Экстракты нуклеиновых кислот, полу-

ченные из вредных организмов, патоге-

нов и зараженного растительного мате-

риала могут храниться в морозильной

камере с температурой –80°C в качестве

генетического референтного материала.

ДНК может храниться намного дольше,

поскольку она более стабильна, чем РНК.

В любом случае, не допускайте много-

численных оттаиваний и заморозок, по-

скольку это повлияет на качество нукле-

иновых кислот.

Сетки, используемые в трансмисси-

онной электронной микроскопии для

визуализации патогенов, могут хранить-

ся в качестве референтного материала.

Эти сетки могут храниться много лет в

сухих и прохладных условиях.

8.5.2 Международные референтные

коллекции

Во всех возможных случаях экзем-

пляр сохраненных образцов следует от-

правлять в международные референт-

ные коллекции. В некоторых странах

могут иметься собственные референт-

ные коллекции в музеях или универси-

тетах. Институты, желающие располагать

референтной коллекцией, должны вести

четкую базу данных, легкодоступную для

других исследователей внутри страны и

за ее пределами.

Примеры международных коллекций

членистоногих и их сокращения:

BMNH – Музей естественной истории,

Лондон;

BPBM – Музей Бишопа, Гонолулу, Га-

вайи;

NMNW – Намибийская национальная

коллекция насекомых, Виндхук, На-

мибия (Е. Мараис);

NMSA – Наталский музей, Питерма-

ритцбург, Квазулу-Натал, Южная Аф-

рика (М. Мостовски);

PCV P – Коллекция Черретти, Верона,
Италия;

SMNS – Государственный музей
естествознания, Штутгарт, Герма-
ния Х-П. Тшорсниг);

TAU – Факультет зоологии, Тель-
Авивский университет, Израиль (А.
Фрайдберг);

TZC – Коллекция Тео Зегерса, Суст, Ни-
дерланды;

ZMAN – Зоологический музей, Ам-
стердам, Нидерланды (Б. Бругге);

NZAC – Новозеландская коллекция
членистоногих, Окленд.

Полный список референтных кол-

лекций фитопатогенов и гербариев
можно найти на сайте http://sweetgum.
nybg.org/, который поддерживает Нью-
Йоркский ботанический сад.

Несколько дополнительных приме-

ров международных гербариев для ми-
кроорганизмов на растениях:

Сельскохозяйственный колледж Уни-
верситета Пердью, Гербарии Пердью
– Артуровский микологический гер-
барий (PUR): https://ag.purdue.edu/
btny/Herbaria/Pages/arthur.aspx;

Фитопатологический гербарий Кор-
нельского университета (CUP): http://
www.plantpath.cornell.edu/CUPpages/
index.html;

Фитопатологический гербарий Мини-
стерства сырьевой промышленности
Нового Южного Уэльса (HERB-DAR):
http://www.dpi.nsw.gov.au/aboutus/
services/collections/herbarium;

Нью-Йоркский ботанический сад
(NYBG): http://sciweb.nybg.org/
science2/Mycology.asp;

Научно-исследовательский институт
охраны земельных ресурсов. Ново-
зеландская коллекция грибных бо-
лезней и болезней растений (PDD):
http://www.landcareresearch.co.nz/
resources/collections/pdd;

162

Природные ресурсы Канады. Герба-
рий лесной фитопатологии Тихоо-
кеанского лесного центра (DAVFP):
http://www.nrcan.gc.ca/forests/
research-centres/pfc/13493;

Фитопатологический гербарий и кол-
лекция насекомых Министерства сель-
ского, рыбного и лесного хозяйства,
Австралия (BRIP): http://collections.daff.
qld.gov.au/web/home.html;

Фарр Д.Ф. и Россман, А.Й.

«Базы

данных по грибам». Лаборатория си-
стематической микологии и микро-
биологии, Научно-исследовательская
сельскохозяйственная служба, Мини-
стерство сельского хозяйства США
/

Farr, D.F. & Rossman, A.Y. Fungal

databases. Systematic Mycology and
Microbiology Laboratory, Agricultural
Research Service, United States
Department of Agriculture. http://
nt.ars-grin.gov/fungaldatabases/.

Полный список коллекций культур

доступен на сайте Всемирной федерации
коллекций культур (WFCC) http://www.
wfcc.info. Во Всемирном каталоге микро-
организмов http://wdcm.org/ представ-
лена интернет-база данных по микроб-
ным штаммам, специально отобранным
во многих международных коллекциях.

Некоторые дополнительные приме-

ры международных коллекций культур
микроорганизмов на растениях:

Компания «Agdia»: http://www.agdia.
com/;

Американская коллекция типовых
культур (ATCC): http://www.atcc.org/

Центральное бюро грибных культур
– Коллекции Института грибного раз-
нообразия «CBS-KNAW»: http://www.
cbs.knaw.nl/collections/;

Служба микроорганизмов Между-
народного центра сельскохозяй-
ственных исследований: http://www.
cabi.org/services/microbial-services/
culture-collection/;

Институт им. Лейбница «DSMZ» – Не-

мецкая коллекция микроорганизмов

и клеточных культур: http://www.

dsmz.de/;

Международная коллекция микроор-

ганизмов, выделенных из растений

(ICMP): http://www.landcareresearch.

co.nz/resources/collections/icmp

Японская коллекция микроорганиз-

мов (JCM): http://www.jcm.riken.jp/

LOEWE: http://www.loewe-info.com/

index. php?cp_sid=142506643c4&cp_

tpl=5501;

Международный центр сельскохо-

зяйственных исследований. Нацио-

нальная коллекция культур Соеди-

ненного Королевства (UKNCC): http://

www.ukncc.co.uk/.

8.5.3 Виртуальные референтные

коллекции

Некоторые примеры виртуальных

коллекций:

Справочник CABI по защите сельско-

хозяйственных культур: http:// www.

cabi.org/cpc;

Справочник CABI по лесному хозяй-

ству: http://www.cabi.org/fc/;

PaDIL – Изображения в высоком каче-

стве и информационные инструмен-

ты, разработанные для обеспечения

биобезопасности и биоразнообра-

зия: http://www.padil.gov.au/;

Банк знаний «Plantwise»: http://www.

plantwise.org/KnowledgeBank/home.

aspx;

Изображения, связанные с лесным хо-

зяйством: http://www.forestryimages.

org/;

Изображения болезней растений,

Университет штата Мэн: http: //

extension.umaine.edu/ipm/ipddl/

plant-disease-images/;

AntWeb – самая большая база данных

в мире по муравьям, доступная через

интернет, с изображениями, учетной

информацией по образцам и инфор-

мацией по естественной истории:
http://www.antweb.org/user_guide.jsp.

8. Референтные коллекции

163

8.5.4 Референтная коллекция

последовательностей ДНК

Существует несколько баз данных по

последовательностям.

Все организмы

База данных по последовательностям

«GenBank» НЦБИ (Национального цен-

тра биотехнологической информации):

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/;

База данных «BOLDSYSTEMS» (Систе-

мы данных «Штрих-коды жизни»):

http://www.boldsystems.org/;

База данных «Q-Bank» – Всеобъем-

лющие базы данных по карантинным

вредителям и болезням растений:

http://www.q-bank.eu/.

Грибы

База данных «MycoBank»: http://www.

mycobank.org/;

База данных «Fusarium-ID»: http://

isolate.fusariumdb.org/index.php;

База данных по

Phytophthora

: http://

www.phytophthoradb.org/;

База данных «Phytophthora-ID»: http://
phytophthora-id.org/seq-id.html;

База геномных данных по

Pythium

http://pythium.plantbiology.msu.edu/.

Бактерии

База данных по микробам, связанным
с растениями и окружающей сре-
дой (PAMDB.org):http://genome.ppws.
vt.edu/cgi-bin/MLST/home.pl

Нематоды

База данных «WormBase» по генетике
нематод: http://www.wormbase.org

Насекомые

База данных «BeeBase» по ис-
следованиям пчел: http://
hymenopteragenome.org/beebase/;

База данных «FlyBase» по генам и ге-
номам

Drosophila

: http://flybase.org;

База данных «BeetleBase» по ге-
нетике, геномике и биологии раз-
вития

Tribolium castaneum

: http://

beetlebase.org.

165

9. Отчетность

Введение

По завершении диагностической ра-

боты сведения об идентификации долж-
ны быть представлены заявителю в со-
гласованные временные сроки. Важно,
чтобы другой компетентный штатный со-
трудник проверил окончательный отчет
до его отправки заявителю во избежание
ошибок.

Ответы по поводу образцов должны:

быть настолько краткими, насколько
это возможно;

формулироваться с осторожностью;

предоставлять информацию, запро-
шенную заявителем, во всех возмож-
ных случаях;

не превышать уровня компетенции
штатного сотрудника;

не превышать уровня официально-
сти идентификации.

Окончательный отчет должен содержать:

всю информацию о заявителе;

всю информацию об образце;

все проведенные анализы;

научное название вредителя и болез-
ни в соответствии с принятым фор-
матом, например, для энтомологии –

Род вид

[ОТРЯД: Семейство];

подписи специалистов, проводивших
идентификацию;

сведения о найденных дополнитель-
ных образцах (если таковые имеются);

и, если применимо:

состояние: живой/погибший;

статус вредного организма/ статус
регулирования;

количество организмов и стадии
их развития;

дата и время ответа;

напечатанные ФИО специалистов,
проводивших идентификацию;

расценки.

Важно представить доказательство того,

что заявителю был отправлен ответ, в

частности:

что было отправлено;

как было отправлено;

когда было отправлено;

кто отправил.

Промежуточный отчет

Рекомендуется отправить промежу-

точный ответ, если идентификацию не-
возможно завершить в сроки, согласо-
ванные для предоставления отчета.

Правки в окончательном отчете

В случаях, когда содержание отче-

та отсутствует или является неверным
(например, идентификация организмов
или результаты анализов – неправиль-
ные), исправленный отчет должен быть
отправлен заявителю. Повторно подго-
товьте окончательный отчет и позаботь-
тесь о том, чтобы в этот новый отчет было
включено дополнительное сообщение,
констатирующее, что этот новый отчет
заменяет Отчет номер: XXXXXX или что
он заменяет отчет, выданный дд/мм/гггг.

Обнаружение нового организма

Обязанностью сотрудников, осущест-

вляющих диагностику, является обеспече-
ние того, чтобы руководство лаборатории
было уведомлено в кратчайшие сроки о
следующих категориях идентификации:

идентификация любого организма,
который, как предполагается, являет-
ся новым для страны;

любая идентификация нежелатель-
ного организма, которая ожидает
подтверждения;

любое значимое обнаружение орга-
низма, при выявлении которого не-
обходимо принимать соответствую-
щие меры.

167

10. Дальнейшие действия с образцом

Введение

Диагностической лаборатории необ-

ходимо рассмотреть наилучшие способы
того, что делать с образцом, после того
как он был полностью проанализирован,
и финальный отчет по диагностике был
подготовлен.

Образцы могут быть утилизированы

надлежащим образом в соответствии с
риском, который они представляют для
биобезопасности, или сохранены для ис-
пользования в будущем.

10.1 Утилизация

Перед тем, как будет принято реше-

ние об утилизации образца, лаборатория
должна принять во внимание необходи-
мость его сохранения в качестве доку-
ментального подтверждения. Смотрите
раздел 2.5 МСФМ 27 («Диагностические
протоколы для регулируемых вредных
организмов») для получения дополни-
тельного руководства в этой сфере. Об-
разец должен также рассматриваться с
точки зрения его ценности для будущего
использования, как описано ниже.

Если считается, что образец не будет

иметь никакой ценности в дальнейшем,
его следует утилизировать способом, ко-
торый сделает его безопасным с точки
зрения фитосанитарного риска. В лабо-
ратории для этого должны иметься по-
мещения, как описано в Главе 2.

10.2 Сохранение образца или

препарата

Лаборатория может сделать выбор в

пользу сохранения образцов и их препа-
ратов по многим причинам.

В контексте фитосанитарных вопро-

сов сохранение образца может быть
важным для того, чтобы обеспечить до-

казательство для случаев несоответ-
ствия, юридических действий, возни-
кающих в результате фитосанитарного
действия или торгового спора, смотрите
раздел 2.5 МСФМ 27 («Диагностические
протоколы для регулируемых вредных
организмов»).

Образцы также могут сохраняться

ввиду их диагностической ценности в ка-
честве референтных образцов, либо они
могут представлять собой первый заре-
гистрированный случай обнаружения
вредного организма в зоне. В последнем
случае доказательство может использо-
ваться НОКЗР в ее официальном статусе
для таких целей, как оповещение о вред-
ных организмах (МСФМ 17), установле-
ние фитосанитарного статуса страны
(МСФМ 8) и свободных зон (МСФМ 4).

Если образец или препарат облада-

ет хорошей диагностической справоч-
ной ценностью, его можно сохранить в
лаборатории или в другой коллекции в
качестве вспомогательного материала
для будущей диагностики или обучения.
Критерии выбора дополнительных ре-
ферентных образцов включают в себя,
но не ограничиваются следующими кри-
териями:

новый вид в коллекции;

образец в лучшем состоянии, чем об-
разцы, уже находящиеся в коллекции;

он является новым обнаружением по
стране происхождения;

для учебного материала, например,
из проектов;

для библиотеки фотоизображений.

Больше подробной информации о

сохранении образцов и препаратов для
этих целей можно найти в Главе 8.

171

11. Библиография

Введение

Интернет обеспечивает доступ к об-

ширному объему информации, укре-
пляющей фундамент диагностики и со-
действующей расширению знаний. В
разделе 5.5 приводится информация о
ключевых справочных материалах по
вредным для растений организмам, а
также по центрам передового опыта и
экспертным базам данных.

Список библиографических названий

Барнет Х.Л. и Хантер Б.Б.

1972 г.

«Иллюстрированный журнал родов не-
совершенных грибов», 3-е издание,
Миннеаполис, Миннесота. Издательство
«Burgess» /

Barnet, H.L. & Hunter, B.B.

1972. Illustrated genera of imperfect fungi,
3rd edn. Minneapolis, MN, Burgess.

Бунхэм Н., Глоувер Р., Томлинсон

Дж. и Мамфод Р.

2008 г. «Использова-

ние стандартных платформенных тех-
нологий для выявления и идентифика-
ции патогенов растений». «Европейский
журнал фитопатологии», 121: 355-363 /

Boonham, N., Glover, R., Tomlinson, J.

& Mumford, R.

2008. Exploiting generic

platform technologies for the detection and
identification of plant pathogens. European
Journal of Plant Pathology, 121: 355–363.
DOI: 10.1007/978-1-4020-8780-6_15.

Бунхэм Н., Томлинсон Дж. и Мам-

фод Р.

2007 г. «Микрокомплексы для

быстрой идентификации вирусов рас-
тений» Журнал «Ежегодный обзор фи-
топатологии», 45: 307–328 /

Boonham,

N., Tomlinson, J. & Mumford, R.

2007.

Microarrays for rapid identification of plant
viruses. Annual Review of Phytopathology,
45: 307–328. DOI: 10.1146/annurev.
phyto.45.062806.094349.

Брэдбери Дж.Ф.

1985 г. «Руковод-

ство по фитопатогенным бактериям».

Валлингфорд, СК, Международный центр
сельскохозяйственных исследований.
С. 332 /

Bradbury, J.F.

1985. Guide to plant

pathogenic bacteria. Wallingford, UK, CAB
International. 332 pp.

CABI и ЕОКЗР.

1997 г. «Карантинные

для Европы вредные организмы», 2-е
издание. Валлингфорд, СК. Междуна-
родный центр сельскохозяйственных
исследований и Париж, Европейская и
Средиземноморская организация по ка-
рантину и защите растений. С. 1425 / CABI
& EPPO. 1997. Quarantine pests for Europe,
2nd edn. Wallingford, UK, CAB International
and Paris, European and Mediterranean
Plant Protection Organization. 1425 pp.

Кэннон Р.Дж.К., Пембертон А.В. и

Барлет П.В.

1999 г. «Надлежащие меры

по ликвидации вредных организмов, не
входящих в перечень». Бюллетень ЕОКЗР,
29: 29-36 /

Cannon, R.J P.J.C., Pemberton,

A.W. & Bartlett, P.W.

1999. Appropriate

measures for the eradication of unlisted
pests. Bulletin OEPP / EPPO Bulletin,
29: 29–36.

Кулен В.А. и Д’Эрде К.Дж.

1972 г. «Ме-

тод количественного выделения нематод
из ткани растений». Гент, Бельгия, Мини-
стерство сельского хозяйства, Государ-
ственный сельскохозяйственный иссле-
довательский центр. С. 77 /

Coolen, W.A.

& D’Herde, C.J.

1972. A method for the

quantitative extraction of nematodes from
plant tissue. Ghent, Belgium, Ministry of
Agriculture, State Agricultural Research
Centre. 77 pp.

Декрэмер В. и Хант Д.Дж.

2006 г.

«Структура и классификация» в Перри
Р.Н. и Моенс М., под ред. 2013 г. «Фитоне-
матология». 1-е издание. стр. 3-32. Вал-
лингфорд, СК. Международный центр
сельскохозяйственных исследований. /

Decraemer, W. & Hunt, D.J.

2006. Structure

172

& classification. In R.N. Perry & M. Moens,
eds. Plant nematology, 1st edn, pp. 3–32.
Wallingford, UK, CAB International.

Эллис М.Б. и Эллис Дж.П.

1997 г. «Ми-

крогрибы на наземных растениях: спра-
вочник по идентификации». Слау, СК. Из-
дательство «Richmond Publishing». С. 868
/

Ellis, M.B. & Ellis, J.P.

1997 г. Microfungi

on land plants: an identification handbook.
Slough, UK, Richmond Publishing. 868 pp.

ЕОКЗР.

2013a. Диагностика: PM 7/119

(1) «Выделение нематод» / Diagnostic: PM
7/119 (1) Nematode extraction. Бюллетень
ЕОКЗР, 43: 471–495.

ЕОКЗР.

2013b. Диагностические про-

токолы для регулируемых вредных ор-
ганизмов: иллюстрированный глоссарий
морфологических терминов в немато-
логии / Diagnostic protocols for regulated
pests: pictorial glossary of morphological
terms in nematology. Технический до-
кумент ЕОКЗР No. 1056 (rev. 4). Париж,
Европейская и Средиземноморская ор-
ганизация по карантину и защите рас-
тений. Доступно по ссылке: http://www.
eppo.int/QUARANTINE/diag_activities/
EPPO_TD_1056_Glossary.pdf (последний
доступ осуществлен 16 сентября 2015 г.).

Эрвин Д.К. и Рибейро О.К.

1996 г.

«Болезни, вызываемые по всему миру».
Сен-Пол, Миннесота. Издательство «APS
Press», Американское фитопатологи-
ческое общество. С.592 /

Erwin, D.C. &

Ribeiro, O.K.

1996. Phytophthora diseases

worldwide. St Paul, MN, APS Press, American
Phytopathological Society. 592 pp.

Фенвик Д.В.

1940 г. «Методы извлече-

ния из почвы и подсчета цист

Heterodera

schachtii

». «Журнал по гельминтологии»,

18: 155-172 /

Fenwick, D.W.

1940. Methods

for the recovery and counting of cysts of
Heterodera schachtii from soil. Journal of
Helminthology, 18: 155–172.

Флегг Дж.Дж.М. и Хупер Д.Дж.

1970 г. «Выделение свободноживущих

стадий из почвы» в Саузи Дж.Ф., под
ред. «Лабораторные методы работы с
растительными и почвенными нема-
тодами». стр. 5-22. Технический бюлле-
тень 2. Лондон, Министерство сельского
хозяйства, рыболовства и продоволь-
ствия /

Flegg, J.J.M & Hooper, D.J.

1970.

Extraction of free-living stages from soil. In
J.F. Southey, ed. Laboratory methods for
work with plant and soil nematodes, pp.
5–22. Technical Bulletin 2. London, Ministry
of Agriculture, Fisheries and Food.

Хокланд С., Инсерра Р.Н., Мил-

лар Л. и Леман П.С.

2006 г. «Междуна-

родное здоровье растений – примене-
ние законодательства на практике» в
Перри Р.Н. и Моенс М., под ред. 2013 г.
«Фитонематология». 1-е издание. Вал-
лингфорд, СК. Международный центр
сельскохозяйственных исследований.
с. 327-345 /

Hockland, S., Inserra, R.N.,

Millar, L. & Lehman, P.S.

2006. International

plant health – putting legislation into
practice. In R.N. Perry & M. Moens, eds.
Plant nematology, 1st edn, pp. 327–345.
Wallingford, UK, CAB International.

Хупер Д.Дж. и Эванс К.

1993 г. «Выде-

ление, идентификация и борьба с фито-
паразитическими нематодами» в Эванс
К., Траджилл Д.М. и Вебстер Дж.М., под
ред. «Фитопаразитические нематоды в
сельском хозяйстве умеренных широт»,
с. 1-60. Валлингфорд, Международный
центр селькохозяйственных исследо-
ваний /

Hooper, D.J. & Evans, K.

1993.

Extraction, identification and control of
plant parasitic nematodes. In K. Evans, D.M.
Trudgill & J.M. Webster, eds. Plant parasitic
nematodes in temperate agriculture, pp.
1–60. Wallingford, UK, CAB International.

Хупер Д.Дж.

1986 г. «Выделение не-

матод из растительной ткани» в Саузи
Дж.Ф., под ред. «Лабораторные методы
работы с растительными и почвенными
нематодами». Справочник 402, 6-е изд.,
стр. 51-58, Лондон, Министерство сель-
ского хозяйства, рыболовства и продо-

11. Библиография

РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1) - часть 11