РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1) - часть 10

 

  Главная      Книги - Разные     РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1)

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

   

 

   

 

содержание      ..     8      9      10      11     ..

 

 

 

РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1) - часть 10

 

 

138

8.2.4 Маркировка образца

Очень важно, чтобы на всех подготов-

ленных образцах, которые будут включе-
ны в любую постоянную коллекцию, не-
зависимо от того, наколоты они, хранятся 
в этиловом спирте или на предметном 
стекле, имелись правильно написанные 
и соответствующие этикетки. Этикетки 
должны быть распечатаны с использова-
нием стойких чернил, нерастворимых в 
воде и этиловом спирте. Форматы этике-
ток для энтомологических образцов ука-
заны в данном руководстве.

Никогда не используйте обе стороны 

этикетки или шариковую ручку.

8.2.4.1  Распечатанные этикетки

Шаблоны этикеток создаются в элек-

тронном виде на бело-голубой перга-
ментной бумаге плотностью 100 г/м

2

 или 

любой другой подходящей антикоррози-
онной бумаге архивного качества с глад-
кой поверхностью, которую не проткнет 
ручка при нанесении записи на этикет-

ку. Шаблоны определительных этикеток 
также могут быть созданы в электрон-
ном виде для каждого энтомолога.

Информация о месте происхождения 

и определительные данные могут быть 
созданы в электронном виде или напи-
саны от руки при помощи специальной 
ручки для архива или ручки со стойким 
черными чернилами и самым маленьким 
размером стержня, обычно – 0,18 (ручки 
фирмы «Rotring») или 1 (ручки фирмы 
«Artline» или похожие ручки).

Независимо от того, созданы ли эти-

кетки посредством электронных инстру-
ментов или написаны от руки, их размер 
составляет порядка 8 мм × 15 мм – для 
наколотых образцов и 10 мм х 20 мм – 
для образцов в этиловом спирте, само-
клеящиеся этикетки для образцов, за-
фиксированных на предметных стеклах, 
предварительно нарезаются.

Все этикетки, созданные в электрон-

ном виде и распечатанные, необходимо 
нагреть в небольшой настольной печ-
ке для закрепления чернил на бумаге и 
предотвращения их размазывания или 
растекания. Смотрите инструкции про-
изводителя для выбора наиболее подхо-
дящей печки.

Инструкции по сушке энтомологических 
этикеток

 

ƒ

Печка для сушки этикеток должна ис-
пользоваться только для бумаги! 

Не 

для:

 

y

жира;

 

y

пищевых продуктов;

 

y

других химических веществ;

 

ƒ

Нарежьте этикетки полосками или 
поместите всю страницу на прово-
лочную сетку.

 

ƒ

Сушите этикетки в течение одной ми-
нуты при 160°C.

 

ƒ

Засеките время на часах или на секун-
домере:

Рисунок 39. 

Микроинструменты, используемые

для приготовления энтомологического препарата

8. Референтные коллекции

139

 

y

Внимательно следите! Исследуйте 
этикетки под микроскопом.

 

y

Бумага должна быть гладкой и 
блестящей, а не зернистой или 
пятнистой.

Этикетки с информацией о месте 
происхождения

Этикетки с информацией о месте про-

исхождения для всех образцов должны 
содержать уникальный регистрацион-
ный или учетный номер в целях отсле-
живаемости, данные о месте (или стране 
происхождения), хозяине, дату сбора:

 

ƒ

регистрационный/учетный номер;

 

ƒ

страна происхождения;

 

ƒ

хозяин и место обнаружения (на вто-
рой этикетке, если необходимо);

 

ƒ

ФИО лица, осуществившего сбор; 

 

ƒ

дата.

Идентификационные (Опред.) этикетки 

Вторая определительная или ИД эти-

кетка используется для указания назва-
ния вида, лица, проведшего идентифика-
цию, и года идентификации:

 

ƒ

Семейство (или подсемейство, если 
известно) заглавными буквами;

 

ƒ

Род и вид: курсивом (если создано 
на компьютере); название рода на-
чинается с заглавной буквы, вида – со 
строчной;

 

ƒ

Лицо, проведшее идентификацию: 
инициалы и фамилия, год.

 

ƒ

Если название длинное, год может 
быть сокращен до последних двух 
цифр после апострофа (’13).

 

ƒ

Опред.: М.Дж. Паркер, 2013.

 

ƒ

Опред.: М.Дж. Паркер, 01 янв. 2013.

 

ƒ

Опред.: С.П. Кортешевский, ’13.

Этикетки последующей повторной 
идентификации

Эти этикетки должны быть нанесены 

на образец без удаления этикетки перво-
начальной идентификации.

Примечание:

 После повторной иден-

тификации, в систематизированные до-
кументы, относящиеся к образцу, воз-
можно, придется внести изменения.

Размещение этикеток на наколотые 
образцы

Этикетка с информацией о месте сбо-

ра должна быть помещена на расстоянии 
примерно 5 мм от наколотого образца. 
Примеры этикеток приведены ниже.

Для накалываемых образцов 

(рис.  40А) место прокалывания должно 
быть примерно в середине этикетки, не 
затрагивая надпись. Этот метод обеспе-
чивает максимальную защиту хрупких 
частей тела образца.

В случае с образцами, наколотыми 

непосредственно на булавку, этикетка 
располагается по центру под образцом; 
горизонтальная ось этикетки должна 
располагаться в том же направлении, что 
горизонтальная ось образца.

В отношении образцов, прикреплен-

ных к картону или при помощи двойного 
закрепления (рис. 40Б), вонзите булавку в 
центр правой стороны этикетки так, чтобы 
длинная ось этикетки была расположена в 
том же направлении, что и картонная кар-
точка. Этикетка протыкается булавкой с 
правой стороны от текста. Таким образом 
меньше повреждаются надпись и образец.

Оставьте достаточно свободного ме-

ста между этикетками, чтобы данные 
можно было прочитать без наклонения 
этикетки. Наклонение этикеток может 
ослабить их крепление, они могут про-
ворачиваться на булавке, что создает 
риск повреждения соседних образцов.

Когда крепление этикеток становит-

ся слабым, снимите этикетку и закройте 
отверстие ногтем большого пальца, а за-
тем наколите ее вновь, проделав новое 
отверстие.

140

Расположение этикеток на образцах, 
хранящихся в пробирках

Это относится к этикеткам для об-

разцов, хранящихся в стеклянных или 
пластиковых пробирках, сухими или в 
этиловом спирте. Эти этикетки больше, 
чем этикетки для наколотых образцов 
(до 15 мм × 40 мм), данные о месте про-
исхождения и идентификации находят-
ся на одной этикетке, расположенной 
вдоль длины пробирки. Используйте 
только одну этикетку, которая должна 
помещаться внутрь пробирки (рис. 41).

Данные о месте происхождения рас-

полагаются слева, данные об идентифи-
кации – справа.

Накрутите этикетку на карандаш над-

писью наружу для того, чтобы она была 
слегка скрученной, прежде чем поме-
стить ее в пробирку. Это позволяет эти-
кетке оставаться прижатой к стеклу, и 
плавающие образцы не смогут засло-
нить надпись.

Если необходимо вставить вторую 

этикетку: чтобы обеспечить читаемость 

обеих этикеток, вставьте простой лист 
бумаги шириной с пробирку, чтобы раз-
делить их так, чтобы надписи на обеих 
этикетках смотрели наружу.

Если образцы хранятся в 96%-ном 

этиловом спирте для целей молекуляр-
ной диагностики, это должно быть указа-
но на этикетке.

Расположение этикеток на образцах на 
предметных стеклах

Этикетка с информацией о месте про-

исхождения помещается на правой сто-
роне, если голова образца смотрит вниз.

Этикетка с информацией об иденти-

фикации помещается на левой стороне 
предметного стекла (рис. 42).

8.2.5 Размягчение сухих образцов

Размягчение не требуется для только 

что умерщвленных образцов. Некоторые 
образцы, однако, погибают при транспор-
тировке в лабораторию и становятся сухи-
ми и ломкими; они должны быть размяг-
чены, чтобы предотвратить повреждение 
частей тела во время накалывания.

Рисунок 40. А 

– Образец, напрямую наколотый на булавку, демонстрирующий расположение этикеток;

Б 

– Образец, наколотый на картон, демонстрирующий расположение этикеток и место накалывания

8. Референтные коллекции

141

Рисунок 41.

 Пример этикетки для образца, хранящегося в пробирке

Рисунок 42.

 Нанесение этикетки на образец, зафиксированный на предметном стекле

Простая процедура размягчения:

 

ƒ

Налейте на дно камеры для размягче-
ния (воздухонепроницаемый контей-
нер или сушилка) теплую воду при-
мерно до 1 см, поместите решетку над 
водой и накройте ее фильтровальной 
бумагой или тканью.

 

ƒ

Добавьте несколько капель гвоздич-
ного масла или дезинфицирующего 
средства для предотвращения разви-
тия плесени.

 

ƒ

Поместите образцы на фильтроваль-
ную бумагу в неглубокую посуду, та-
кую как чашка Петри или пластиковая 
крышка.

 

ƒ

Закройте камеру для размягчения и 
оставьте на ночь. Длительность раз-
мягчения отличается для разных на-
секомых и размеров.

Кроме того, для получения быстрых 

результатов поместите камеру в печь при 
температуре 40°С. В течение нескольких 

часов образцы должны достаточно раз-
мягчиться для того, чтобы с ними можно 
было работать.

Убедитесь в том, что на этикетки в ка-

мере размягчения не были нанесены во-
дорастворимые чернила.

8.2.6 Высушивание образцов

Образцы для хранения в высушен-

ном виде,

 включая раковины улиток, 

должны высушиваться в подходящих кон-
тейнерах в печи при 40°C или на воздухе 
при комнатной температуре в безопас-
ном контейнере до их размещения в кол-
лекцию на хранение. Высушенные образ-
цы из коллекции не следует оставлять вне 
лаборатории на ночь, если только они не 
помещены в закрытые контейнеры.

Температура в сушильных шкафах в 

энтомологических лабораториях под-
держивается на оптимальном уровне 

142

в  40°С для сушки энтомологических об-

разцов. Как правило, образцы могут 

оставаться в сушильной печи до тех пор, 

пока они не будут перемещены в место 

постоянного хранения.

Наколотые образцы 

могут быть по-

мещены в печь для сушки в лотках с от-

секами или в коробках для хранения. 

Сушка в зависимости от размера и цвета 

образца может длиться от нескольких 

часов или ночи (например, небольшие 

двукрылые 

(Diptera)

) до одной недели 

(например, большие черные жесткокры-

лые 

(Coleoptera)

).

Материал на предметном стекле

 

должен сушиться в энтомологической 

печи в течение не менее четырех не-

дель. Полное высыхание различных сред 

и различных объемов сред может занять 

более продолжительное время. Для вы-

сыхания образцы на предметных стеклах 

помещают в печь на алюминиевых под-

носах для предметных стекол.

8.2.7 Препарирование

Препарирование – задача, требую-

щая наличия навыков и практики. Лю-

бая часть тела насекомого может быть 

препарирована и закреплена на пред-

метном стекле в среде Хойера для ис-

следования. Однако после того, как трех-

мерная выступающая часть помещается 

под покровное стекло, может произойти 

ее повреждение, поэтому помещение 

образца в ванночку, предназначенную 

для использования при окрашивании, 

с песком и 95%-ным этиловым спиртом 

позволяет исследовать образец под раз-

ными углами. Выступающие части долж-

ны храниться в 80%-ном этиловом спир-

те с добавлением 5%-ного глицерина. 

Части очень небольшого размера могут 

быть зафиксированы на предметом сте-

кле с лункой.

8.2.7.1 Гениталии

 

ƒ

Поместите брюшко и надкрылья в 

70%-ный этиловый спирт; если на-

секомое было умерщвлено недавно, 

нет необходимости помещать их в 

этиловый спирт, нагревайте в 10% 

KOH до одного часа.

 

ƒ

Осторожно поместите гениталии 

и последний измененный сегмент 

брюшка в дистиллированную воду.

 

ƒ

Переместите в 90%-ный этиловый 

спирт либо после проведения наблю-

дений зафиксируйте в среде Хойера 

сразу после того, как достанете из 

дистиллированной воды. Учтите, что 

может произойти повреждение.

Можно также временно закрепить на 

предметном стекле в глицерине для ис-

следования; или исследовать в воде в 

часовом стекле.

Гениталии и размягченные части 

лучше всего сохраняются в глицерине в 

микропробирке, наколотой вместе с об-

разцом (на одной и той же булавке).

Справочные материалы по препарированию 

и подготовке гениталий чешуекрылых:

Хайден Дж.Е., Ли С., Пассоа С.К., Янг 

Дж., Лэндри Дж.Ф., Назари В., Малли Р., 

Сомма Л.А. и Алмарк К.М.

 2013 г. «Циф-

ровая идентификация микрочешуекры-

лых на 

Solanaceae

». Форт-Коллинз, Коло-

радо, Министерство сельского хозяйства 

США – Служба инспекции здоровья жи-

вотных и растений – Карантин и защита 

растений. Программа идентификацион-

ных технологий (ITP) / 

Hayden, J.E., Lee, 

S., Passoa, S.C., Young, J., Landry,  J.F., 

Nazari, V. Mally, R., Somma, L.A. & 

Ahlmark, K.M.

 2013. Digital identification 

of microlepidoptera on Solanaceae. Fort 

Collins, CO, USDA-APHIS-PPQ Identification 

Technology Program (ITP). Документ до-

ступен по ссылке: http://idtools.org/id/

leps/micro/ (последний доступ осущест-

влен 17 сентября 2015 г.).

Хоар Р. Дж. Б.

, 2000 г. «Новый род 

примитивных Nepticulidae 

(Lepidoptera) 

из восточной Австралии, с пересмо-
тренной диагностикой подсемейств 
молей-малюток», «Зоологический жур-

8. Референтные коллекции

143

нал Линнеевского общества», 128(3): 
289–317. (стр.  292) / 

Hoare, R.J.B.

 2000. 

A new genus of primitive Nepticulidae 
(Lepidoptera) from eastern Australia, with a 
revised diagnosis of nepticulid subfamilies. 
Zoological Journal of the Linnean Society, 
128(3): 289–317. (p. 292).

8.7.2 Личинки двукрылых (Diptera) и 

другие части насекомых

 

ƒ

Поместите личинку в воду в препа-
ровальную ванночку и разрежьте 
кутикулу тонкими анатомическими 
ножницами вдоль одной стороны, 
начиная вблизи переднего края, про-
ходя ниже бокового дыхательного от-
верстия и почти до заднего края.

 

ƒ

Поместите личинку в раствор Эсси-
га / Уикли и осторожно нагревайте в 
течение одного часа. Когда личинка 
хорошо размягчиться, удалите содер-
жимое тела.

 

ƒ

Почти полностью отделите заднюю 
дыхальцевую зону от оставшейся ча-
сти кожицы и вытяните головную и 
глоточную часть скелета из тела. По-
местите кожу в 95%-ный этиловый 
спирт.

 

ƒ

Закрепите на предметном стекле в 
растворе Хойера кожей наизнанку 
так, чтобы головная и глоточная часть 
скелета с ротовыми крючками была 
расположена на некотором рассто-
янии от кожи и задняя дыхальцевая 
зона расположена обоими дыхальца-
ми вверх.

В случае с некоторыми другими по-

рядками голова образца осторожно за-
крепляется на предметное стекло так, 
чтобы можно было исследовать ротовые 
органы.

Другие части тела насекомого, такие 

как усики, ноги и щупальца, могут быть 
закреплены на предметное стекло непо-
средственно в растворе Хойера.

8.2.7.3  Набивка образцов Orthoptera, 

Cicadidae и Phasmatodea

Может потребоваться препариро-

вание крупных кузнечиков, крупных 
полужесткокрылых 

(Hemiptera)

 (напри-

мер, 

Cicadidae

) и других прямокрылых 

насекомых для их постоянного хране-
ния в высушенном виде. Используя ана-
томические ножницы, сделайте надрез 
под брюшком; кишечник с содержимым 
удаляется пинцетом, полость протирает-
ся ватой, смоченной в этиловом спирте, 
а затем чистая вата помещается внутрь 
полости для заполнения пространства. 
Разрезанные края могут быть соедине-
ны и склеены до того, как образец будет 
сушится в печке.

Для сохранения брюшка привиде-

ньевых 

(Phasmatodea)

 твердым до суш-

ки в печи, возможно, потребуется через 
конец брюшка удалить кишечник с со-
держимым и поместить внутрь нейло-
новые щетинки.

8.2.7.4  Процедура препарирования 

крыльев чешуекрылых 
(Lepidoptera)

 

ƒ

Аккуратно отрежьте крылья в месте 
нижнего прикрепления к образцу.

 

ƒ

Продезинфицируйте крылья чешу-
екрылых, поместив их в бытовой от-
беливатель или в отбеливатель для 
белья (5%-ный раствор гипохлорита 
натрия) на 1-3 минуты. Предвари-
тельное смачивание этиловымвым 
спиртом активирует процесс дезин-
фицирования. 

Примечание:

 за про-

цессом дезинфицирования следует 
внимательно наблюдать под микро-
скопом, так как крылья могут повре-
диться, если остаются в химическом 
веществе слишком долго.

 

ƒ

Как только жилки станут видимыми, 
достаньте крылья из отбеливателя и 
промойте их в чистой воде.

 

ƒ

Удалите чешуйки 

Lepidoptera

 в воде 

при помощи щетки с тонкой щетиной.

144

 

ƒ

Крыло без чешуек, при желании, за-
тем можно окрасить раствором фук-
синсернистой кислоты.

 

ƒ

Промойте в 95%-ном этиловом спир-
те и закрепите на предметном стекле 
в глицерине или растворе Хойера.

 

ƒ

Для подготовки постоянного препа-
рата поместите крылья в гвоздичное 
масло на 5-10 минут перед закре-
плением в эупарале или канадском 
бальзаме.

 

ƒ

Расположите крыло, как пожелаете, 
переворачивая его, если необходимо, 
и убедившись в том, что его основание 
хорошо растянуто, и все жилки видны.

8.2.8 Процедура фиксации небольших 

членистоногих на предметном 

стекле

Подготовку препаратов на предмет-

ных стеклах всех образцов для рефе-
рентной коллекции необходимо прово-
дить согласно процедуре закрепления 
для постоянного хранения. Процедура 
закрепления для временного хранения 
также приводится ниже. Она может быть 
использована для быстрой идентифи-
кации и кратковременного хранения и 
может быть переделана в препарат для 
постоянного хранения.

8.2.8.1  Процедура для ногохвостиков 

(Collembola), тлей и незрелых 

особей полужетскокрылых 

(Hemiptera) (клопы)

 

ƒ

Поместите образцы в раствор Эсси-
га/Уилки в ванночку, предназначен-
ную для использования при окраши-
вании.

 

ƒ

Накройте стеклянной крышкой и на-
несите этикетку с уникальным иден-
тификационным номером.

 

ƒ

Нагревайте до осветления раствора 
(от 30 минут до часа) на нагреватель-
ной плитке или под лампочкой в вы-
тяжном шкафу.

 

ƒ

При необходимости добавьте 3 или 4 

капли окрашивающего раствора фук-

синсернистой кислоты. 

 

ƒ

Извлеките содержимое тела и повто-

рите, при необходимости, используя 

новый раствор Эссига/Уилки.

Для постоянных препаратов

 

ƒ

Поместите в 25%-ный этиловый спирт 

на 5-10 минут.

 

ƒ

50%-ный этиловый спирт – на 5-10 

минут.

 

ƒ

75%-ный этиловый спирт – на 5-10 

минут.

 

ƒ

100%-ный этиловый спирт – на 5-10 

минут.

 

ƒ

Гвоздичное масло – на 5-10 минут.

 

ƒ

И, наконец, закрепите непосред-

ственно в канадском бальзаме.

Для временных препаратов

Закрепите непосредственно в рас-

творе Хойера (ногохвостки также могут 

быть осветлены в молочной кислоте в 

духовке при 40°С).

8.2.8.2  Трипсы (Thysanoptera)

Процедура подготовки постоянного 
препарата

 

ƒ

Поместите в 10%-ный KOH или рас-

твор Эссига/Уилки на различное 

время, в зависимости от цвета об-

разца:

 

y

черные или темно-коричневые – 

на несколько часов;

 

y

бледные – на 2 часа.

 

ƒ

Переместите в воду (не менее чем на 

1 час, можно оставить на несколько 

дней).

 

ƒ

Переместите в 30%-ный этиловый 

спирт (на 1 час, можно оставить на 2-3 

дня).

 

ƒ

Переместите в 70%-ный этиловый 

спирт (на 1 час, можно оставить на 2-3 

дня).

 

ƒ

Переместите в 95%-ный этиловый 

спирт (на 1 час, можно оставить на 2-3 

дня).

8. Референтные коллекции

145

 

ƒ

Переместите в чистый спирт (на 1 час, 
можно оставить на 2-3 дня).

 

ƒ

Поместите в гвоздичное масло (не 
менее чем на 1 час, можно оставить 
на 2-3 дня).

 

ƒ

Закрепите на предметном стекле в 
канадском бальзаме, обычно один 
трипс на одно предметное стекло; го-
лова образца смотрит вниз.

Процедура подготовки временного 
препарата

 

ƒ

Поместите трипсов в раствор Эссига/
Уилки в лунку часового стекла на раз-
ное время в зависимости от цвета об-
разца.

 

ƒ

Накройте стеклянной крышкой, нане-
сите этикетку и положите под лампу 
для осветления.

 

ƒ

После осветления (примерно в тече-
ние 1 часа, в зависимости от цвета 
образца), удалите внутренние части; 
промойте образец в 70-96%-ном эти-
ловом спирте.

 

ƒ

Закрепите на предметном стекле в 
среде Хойера, обычно один трипс на 
одно предметное стекло, спинкой 
вверх, головой в сторону специалиста.

 

ƒ

Нанесите на препарат этикетку, при 
этом головка образца должна смо-
треть вниз.

Справочный материал: Трипсы-Ви-

ки. 2013. «Сбор и подготовка трипсов 
для исследования». Доступно по ссыл-
ке: http://thrips.info/wiki/Collecting_and_
preparing_thrips_for_study (последний 
доступ осуществлен 22 сентября 2015 г.). 

8.2.8.3  Процедура подготовки 

препаратов щитовок-
щитоносцев и ложнощитовок 
(Hemiptera: Diaspidi- dae и 
Coccidae) для временного 
хранения

Целью подготовки этого препарата 

является устранение как внешней секре-
ции, покрывающей тело, так и внутренних 

органов, не повреждая при этом внешние 
диагностические структуры тела.

 

ƒ

Под бинокулярным микроскопом до-
станьте образцы из пробирок и рас-
тительного субстрата и поместите 
их в ванночку, предназначенную для 
использования при окрашивании, со-
держащую раствор Эссига/Уилки.

 

ƒ

Осторожно удалите чешуйки с по-
крытия (контроли), сделайте прокол 
в брюшной среднегрудной зоне и до-
бавьте несколько капель фуксинсер-
нистой кислоты к красителю.

 

ƒ

Накройте стеклянной крышкой, нане-
сите этикетку и поместите под лампу 
для осветления. Образцы могут быть 
продуты и слегка вычищены на этом 
этапе, чтобы содействовать процес-
су осветления. Свежие образцы, как 
правило, осветляются должным об-
разом в течение 1-2 часов.

 

ƒ

Переместите в свежий раствор Эссиг-
са/Уилки, извлеките внутренние ча-
сти, а затем промойте образец в 75%-
ом этиловом спирте.

 

ƒ

Закрепите в среде Хойера на пред-
метном стекле брюшной стороной 
вверх с хвостовым щитком, смотря-
щим вверх. 

 

ƒ

Нанесите этикетку на предметное 
стекло.

8.2.8.4  Процедура подготовки 

препаратов мучнистых 
червецов (Hemiptera: 
Pseudococcidae) и гигантских 

червецов (Hemiptera: 

Monophlebidae)

Целью подготовки этого препарата 

является устранение как внешней секре-
ции, покрывающей тело, так и внутренних 
органов, не повреждая при этом внешние 
диагностические структуры тела.

 

ƒ

Под бинокулярным микроскопом из-
влеките образцы из растительного 
субстрата и пробирок и поместите 

146

их в ванночку, предназначенную для 
использования при окрашивании, со-
держащую раствор Эссига/Уилки.

 

ƒ

Сделайте небольшой надрез тонкой 
иглой на спинной стороне червеца 
или щитовки между тазиками задних 
ног.

 

ƒ

Поместите несколько капель хлоро-
форма для удаления воскового слоя 
на теле и несколько капель фуксин-
сернистой кислоты для окрашивания.

 

ƒ

Накройте ванночку, предназначен-
ную для использования при окраши-
вании, стеклянной крышкой, нане-
сите этикетку и поместите под лампу 
для осветления. Образцы могут быть 
продуты и слегка вычищены на этом 
этапе для содействия осветлению. 
Свежие образцы, как правило, освет-
ляются должным образом в течение 
1-2 часов.

 

ƒ

Переместите в свежий раствор Эсси-
га/Уилки, извлеките внутренние ча-
сти, а затем промойте образец в 75%-
ном этиловом спирте.

 

ƒ

Закрепите на предметном стекле в 
среде Хойера брюшком вверх и голо-
вой вниз.

 

ƒ

Нанесите этикетку на предметное 
стекло.

8.2.8.5  Процедура подготовки 

препаратов мучнистых 
червецов и щитовок (Hemiptera: 
Coccoidea) для длительного 
хранения при помощи 
микроволновой печи

 

ƒ

Переместите щитовок или мучнистых 
червецов из растительного материа-
ла в сухую ванночку, предназначен-
ную для использования при окра-
шивании. На этом этапе могут быть 
сделаны наблюдения – паразитизм, 
образец живой или мертвый, про-
ведены подсчеты, предварительная 
идентификация и т.д.

 

ƒ

Накапайте 95%-ный этиловый спирт 
на червецов, чтобы он проник в воск.

 

ƒ

Сделайте прокол в среднегрудной ча-
сти – минибулавка с держателем иде-
ально подходит для этой цели.

 

ƒ

Переместите насекомых в раствор 
Эссига/Уилки с добавлением одной 
или двух капель раствора фуксин-
сернистой кислоты; используйте 1 мл 
жидкости в пробирке емкостью 5 мл. 
Неплотно закройте крышкой – не за-
кручивайте ее. Крышка должна иметь 
3-4 вентиляционных отверстия, так 
как содержимое будет кипеть в про-
бирке (плотно закрытая пробирка 
может взорваться).

 

ƒ

Поместите в микроволновую печь на 
1 минуту. 

Примечание:

 Время и мощ-

ность будет зависеть от мощности 
(количество потребляемых ватт) ис-
пользуемой микроволновой печи. 
Фенольные соединения будут испа-
ряться, поэтому используйте вытяж-
ной шкаф.

 

ƒ

Как только пробирка достаточно 
остынет, вылейте жидкость в ван-
ночку для окрашивания. Насекомые 
должны быть осветлены. Если насеко-
мые не осветлены, то аккуратно про-
дуйте насекомое для очистки, а затем 
поместите обратно в пробирку и по-
местите в микроволновую печь еще 
на одну минуту.

 

ƒ

Переместите насекомых в 95%-ный 
этиловый спирт. Используйте пинцет 
с плоским кончиком, чтобы аккурат-
но выровнять брюшно-спинную зону, 
при этом вытолкнуть оставшееся вну-
треннее содержимое. Насекомые те-
перь могут быть закреплены в среде 
Хойера.

 

ƒ

Незамедлительно поместите в гвоз-
дичное масло в ванночку для окраши-
вания. Накройте ванночку и помести-
те в микроволновую печь на 1 минуту. 

Примечание:

 время и мощность будет 

зависеть от мощности (количество 
потребляемых ватт) используемой 

8. Референтные коллекции

147

микроволновой печи. Масло не ки-
пит, поэтому пробирка не использу-
ется. Масло растворяет следы жира 
и воска, которые в противном случае 
затемняют препараты в канадском 
бальзаме. Для некоторых насекомых, 
например, очень жирных червецов 
или гигантских червецов, может воз-
никнуть необходимость повторить 
этот этап в свежем гвоздичном масле, 
если гвоздичное масло имеет густой 
мутный вид после нагрева в микро-
волновой печи.

 

ƒ

Переместите непосредственно в ка-
надский бальзам на предметных сте-
клах.

Справочный материал: Процедура 

подготовки препарата на предметном 
стекле – это модификация метода, пред-
ложенного в работе 

Ло П.Л. и Бланка Р.Х. 

1989 г. «Обследование видов щитовок-щи-
тоносцев (Hemiptera: 

Diaspididae

) в садах 

киви». Журнал «Энтомолог Новой Зелан-
дии» 12: 1-4 / 

Lo, P.L. & Blank, R.H.

 1989. A 

survey of armoured scale species (Hemiptera: 
Diaspididae) in kiwifruit orchards. New 
Zealand Entomologist, 12: 1–4.

8.2.8.6  Клещи (Acari)

Хорошо склеротизированных кле-

щей следует осветлять в молочной кис-
лоте до приготовления препарата на 
предметном стекле. Избегайте чрезмер-
ного осветления в молочной кислоте, так 
как это может чрезмерно осветлить кле-
щей и усложнить работу с ними.

Для того чтобы достать клещей из 

растительного субстрата, смочите иглу в 
молочной кислоте, среде Хойера или ис-
пользуйте тонкую кисть для рисования.

 

ƒ

Поместите их в ванночку для окраши-
вания или на предметное стекло с лун-
кой с молочной кислотой и нагревайте 
под лампой, на нагревательной плит-
ке или в печи при температуре 70°С.

 

ƒ

Закрепите осветленный образец на 

предметном стекле в среде Хойера.

Слегка склеротизированные и не-

склеротизированные клещи могут быть 

сразу закреплены на предметном стекле 

в среде Хойера. Поместите предметное 

стекло на нагревательную плитку для ос-

ветления при температуре 70°С. Образ-

цы, как правило, осветляются для иден-

тификации в течение часа.

Справочный материал: 

Дули Дж. 

2002 г. «Подготовка препарата образ-

ца». Сан-Франциско, Калифорния: Ка-

рантин и защита растений /

 Dooley, J. 

2002. Specimen preparation. San Francisco, 

CA: PPA. Документ доступен по ссылке 

адресу: http://keys.lucidcentral.org/keys/

v3/whitefly/PDF_PwP%20ETC/Slide%20

Prep%20Training.pdf (последний доступ 

осуществлен 22 сентября 2015 г.).

8.2.8.7  Незрелые особи белокрылок 

и листоблошек (Hemiptera, 

Psylloidea: Aleyrodidae) (пупарии)

 

ƒ

Поместите образцы в 75%-ный этило-

вый спирт.

 

ƒ

Переместите образцы в 10%-ный KOH 

и осветляйте в течение нескольких 

часов при комнатной температуре. 

(

Примечание:

 никогда не нагревайте 

образцы белокрылки в KOH, так как 

это влияет на хитин и снижает его 

способность удерживать окраску). 

Не помещайте черные экземпляры в 

KOH, так как это вызывает сморщива-

ние их кожи.

 

ƒ

Замочите в 75%-ном этиловом спирте 

(делать надрезы необязательно), а за-

тем в отбеливающем растворе пере-

киси водорода и гидроксида аммо-

ния в пропорции 50:50.

 

ƒ

Убедитесь в том, что образцы погру-

жены в раствор. Проверяйте каждые 

15 минут. 

 

ƒ

Как только образцы станут равномер-

ного коричневого цвета, перемести-

те их в 75%-ный этиловый спирт для 

промывания и нейтрализации KOH.

148

 

ƒ

Переместите в раствор Эссига/Уикли 
с окрашивающей фуксинсернистой 
кислотой.

 

ƒ

Переместите в гвоздичное масло. 
Никогда не пытайтесь продувать или 
извлекать содержимое тела личинок 
(нимф), так как щетинки – очень тон-
кие и легко повреждаются. Оставьте 
на 5-10 минут, пока они не осветлятся.

 

ƒ

Поместите крошечную каплю на 
предметное стекло, распределите 
так, чтобы покрыть всю зону покров-
ного стекла.

 

ƒ

Разместите образцы; позвольте ка-
надскому бальзаму стать немного 
липким.

 

ƒ

Поместите покровное стекло осто-
рожно на бальзам и образцы.

 

ƒ

Если бальзам не покрывает зону по-
кровного стекла, вы можете добавить 
еще немного бальзама.

8.2.8.8 Взрослые особи белокрылки

Процедура
временного закрепления

 

ƒ

Поместите образцы в 70%-ный этило-
вый спирт.

 

ƒ

Поместите образец на предметное 
стекло со средой Хойера. Образцы на 
предметном стекле должны быть рас-
положены спинкой вверх или на боку. 
Расположить на боку труднее, но необ-
ходимые структуры лучше различимы.

 

ƒ

Нагревайте предметное стекло при 
40-60°С в течение нескольких часов.

Процедура
постоянного закрепления

 

ƒ

Поместите образцы в 70%-ный этило-
вый спирт (делать надрезы не обяза-
тельно, и их не следует делать).

 

ƒ

Используйте лопаточку, достаточно 
широкую для поддержания большин-
ства частей тела и крыльев, когда вы 
переносите их из одного реактива в 
другой.

 

ƒ

Переместите образцы в 10%-ный KOH 
и осветляйте в течение нескольких 
часов при комнатной температуре. 
Лучше всего оставить на ночь, если 
только не требуется провести бы-
строе определение. 

Примечание:

 Ни-

когда не нагревайте образцы в KOH!

 

ƒ

Переместите в этиловый спирт для 
промывания и нейтрализации KOH.

 

ƒ

Переместите в раствор Эссига/Уилки 
с окрашивающим веществом (ногами 
вниз, спинкой вверх; не обязательно 
погружать весь образец, иначе кры-
лья, скорее всего, будет невозможно 
отделить от остальной части тела); 
нагревайте при 50°C (не пытайтесь 
извлечь содержимое тела, так как бе-
локрылка становится очень липкой в 
нагретом растворе Эссига/Уилки). 

 

ƒ

Переместите в гвоздичное масло и 
извлеките содержимое тела очень 
тонкой изогнутой иглой (булавки для 
насекомых № 00 или 0); поместите об-
ратно в раствор Эссига/Уилки (окра-
шенный или неокрашенный), при 
необходимости, и нагревайте. Вновь 
поместите в гвоздичное масло, если 
образцы нагревались в растворе Эс-
сига/Уилки.

 

ƒ

Закрепите образцы на предметном 
стекле при помощи покровного стек-
ла с креплениями (крепления должны 
быть виниловыми или из короткой мо-
новолоконной медной рыболовной 
проволоки диаметром около 0,25 мм).

Примечание:

 важно поместить об-

разцы в очень тонкий слой жидкого 
канадского бальзама, разбавленного 
ксиленом до текучего или капающего со-
стояния, иначе усики, а зачастую и ноги, 
разрушатся и станут бесполезными для 
целей идентификации. Густой бальзам 
не может проникнуть через небольшие 
отверстия в этих структурах достаточно 
быстро. Густой бальзам можно добавить 
перед покрытием покровным стеклом, 
и, вероятно, густой бальзам необходим 
для предметных стекол с креплением в 

8. Референтные коллекции

149

любом случае, так как ксилен испарится, 
оставив недостаточное количество баль-
зама для покрытия образцов.

 

ƒ

Образцы должны быть расположены 
спинкой вверх или на боку. Располо-
жить их на боку сложнее, но необхо-
димые структуры – лучше различимы.

Справочный материал: Эта процеду-

ра была взята из временного ключа по 
взрослым белокрылкам Калифорнии, 
автор – Р. Дж. Джилл / R.J. Gill (1989 г., не-
опубликованные данные).

8.2.9 Справочные материалы по 

методам подготовки препаратов и 

их фиксации

Авторы рекомендуют следующую ли-

тературу по методам подготовки и фик-
сации образцов. В этих справочных ма-
териалах приводятся методы подготовки 
препаратов различных групп.

Общие

Науманн Д.И.

, под ред. 1991 г. «Насе-

комые Австралии: учебник для студентов 
и научных работников» (части 1 и 2). Мель-
бурн, Издательство «Melbourne University 
Press». С.1029 / 

Naumann, D.I.

, ed. 1991. The 

insects of Australia: a textbook for students 
and research workers (Parts 1 & 2). Melbourne, 
Melbourne University Press. 1029 pp.

Уокер A.K. и. Кросби T.K.

 1988 г. 

«Подготовка и курирование насекомых», 
новое пересмотренное издание. Но-
возеландская информационная серия 
УНПИ (Управление научных и промыш-
ленных исследований) 163. Веллинг-
тон, Издательство научной информа-
ции УНПИ. С 92 / 

Walker, A.K. & Crosby, 

T.K.

 1988. The preparation and curation 

of insects, new revised edn. New Zealand 
DSIR Information Series 163. Wellington, 
DSIR Science Information Publishing 
Centre. 92 pp. Доступно по ссылке: http://
www.landcareresearch.co.nz/resources/
collections/nzac/specimen-preparation-

and-curation (последний доступ осущест-
влен 17 сентября 2015 г.).

Стер Ф.В.

, под ред. 1987 г. «Незрелые 

насекомые». Дабек, Айова, Издатель-
ство «Kendall / Hunt Publishing». С.  754. 
(Т. 1, стр. 9-17) / 

Stehr, F.W.

, ed. 1987. 

Immature insects. Dubuque, IA, Kendall/
Hunt Publishing. 754 pp. (Vol. 1, pp. 9–17).

Клещи (Acari)

Кранц Г.В. и Уолтер, Д.Е.

 2009 г. «Ру-

ководство по акарологии», 3-е изд. Лаб-
бок, Техас, Издание «Texas Tech University 
Press». С. 816. (Стр. 83-96) / 

Krantz, G.W. & 

Walter, D.E.

 2009. A manual of acarology, 

3rd edn. Lubbock, TX, Texas Tech University 
Press. 816 pp. (pp. 83–96).

Джеппсен Л.Р., Ллойда Х.Х., Кифер 

H.H. и Бейкер Е.В.

, 1975 г. «Клещи, по-

вреждающие экономически важные рас-
тения». Беркли, Калифорния, Издатель-
ство «University of California Press». С. 614. 
(Стр. 385-392) / 

Jeppson, L.R., Keifer, 

H.H. & Baker, E.W.

 1975. Mites injurious to 

economic plants. Berkeley, CA, University 
of California Press. 614 pp. (pp. 385–392).

Пауки (Araneae)

Убик Д., Пакуин П., Кушинга П.Е. и 

Рот Б.

, под ред. 2005 г. «Роды пауков Се-

верной Америки: руководство по иден-
тификации». Американское арахноло-
гическое общество. (стр. 8-9) / 

Ubick, D., 

Paquin, P., Cushing, P.E. & Roth, V.

, eds. 

2005. The spider genera of North America: 
an identification manual. The American 
Arachnological Society. (pp. 8–9).

Жесткокрылые (Coleoptera)

Бут Р.Г., Кокс М.Л. и Мэдж Р. Б.

 1990 г. 

«Руководство по насекомым, имеющим 
важное значение для человека. Том 3. 
Coleoptera». Оксофрд. Издательство 
«Oxford University Press». С.  392 (Взрос-
лые особи, стр. 10-12;. Личинки, стр. 205-
208.) / 

Booth, R.G., Cox, M.L. & Madge, 

R.B.

1990. IIE guides to insects of importance 

150

to man. Vol. 3. Coleoptera. Oxford, Oxford 
University Press. 392 pp. (Adults, pp. 10–12; 
larvae, pp. 205–208).

Двукрылые (Diptera)

Феррар П.

, 1987 г. «Руководство 

по размножению и незрелым стади-
ям Diptera Cyclorrhapha». Часть 1. Текст; 
Часть 2. Цифры. Лейден Е. Дж., Брилл. 
Копенгаген, Издательство «Scandinavian 
Science Press». С. 907. (стр. 10-12) /

 Ferrar, P.

 

1987. A guide to the breeding habits and 
immature stages of Diptera Cyclorrhapha. 
Part 1. Text; Part 2. Figures. Leiden, E.J. Brill; 
Copenhagen, Scandinavian Science Press. 
907 pp. (pp. 10–12).

Уайт И. и Элсон-Харрис M.M.

, 1992 г. 

«Плодовые мухи экономической зна-
чимости: их идентификация и бионо-
мия». Валлингфорд, СК, Международный 
центр сельскохозяйственных иссле-
дований. С.  600. (Стр. 24-29) / 

White, I. 

& Elson-Harris, M.M.

 1992. Fruit flies of 

economic significance: their identification 
and bionomics. Wallingford, UK, CAB 
International. 600 pp. (pp. 24–29).

Дрю Р.А.И., Хупер Г.Х.С. и Бейтман М. 

А. 

1978 г. «Экономически значимые пло-

довые мухи южной части Тихоокеанского 
региона». Квинсленд, Департамент сырье-
вой промышленности; Канберра, Депар-
тамент здравоохранения. С.137. (стр. 2-4) 

Drew, R.A.I., Hooper, G.H.S. & Bateman, 

M.A.

 1978. Economic fruit flies of south 

Pacific region. Queensland, Department of 
Primary Industries; Canberra, Department of 
Health. 137 pp. (pp. 2–4). 

Фут Р.Х., Бланк Ф.Л. и Норрбом А.Л. 

1993 г. «Справочник по плодовым мухам 
(Diptera: Tephritidae) Америки к северу 
от Мексики». Итака, штат Нью-Йорк. С. 
576. (стр. 37-41)/ 

Foote, R.H., Blanc, F.L. 

& Norrbom, A.L.

 1993. Handbook of the 

fruit flies (Diptera: Tephritidae) of America 
north of Mexico. Ithaca, NY, Comstock. 576 
pp. (pp. 37–41).

Полужесткокрылые (Heteroptera)

Слатер Дж.А. и Барановски Р.М.

 

1978 г. «Как распознать истинных клопов 
(Hemiptera–Heteroptera)». Дабек, Айова, 
Издательство «W.C. Brown» (стр.  12-15) 

Slater, J.A. & Baranowski, R.M.

 1978. 

How to know the true bugs (Hemiptera–
Heteroptera). Dubuque, IA, W.C. Brown. 
(pp. 12–15).

Белокрылки (Aleyroydidae)

Мартин Дж.Х.

 1999  г. «Белокрыл-

ки фауны Австралии (Sternorrhyncha: 
Aleyrodidae): руководство по таксоно-
мии и идентификации». Канберра, Го-
сударственное объединение научных 
и прикладных исследований. (стр. 124-
125) / 

Martin, J.H.

 1999. The whitefly fauna 

of Australia (Sternorrhyncha: Aleyrodidae): 
a taxonomic account and identification 
guide. Canberra, Commonwealth Scientific 
and Industrial Research Organisation. 
(pp. 124–125).

Тли (Aphididae)

Блэкмен Р.Л. и Истоп В.Ф.

, 2000  г. 

«Тли на мировых сельскохозяйственных 
культурах: руководство по идентифика-
ции и информации». 2-е издание. СК. Из-
дательство «Wiley». С. 250 (стр. 363–365) / 

Blackman, R.L. & Eastop, V.F.

 2000. Aphids 

on the worlds crops: an identification and 
information guide, 2nd edn. UK, Wiley. 
250 pp. (pp. 363–365).

Ложнощитовки (Coccidae)

Джилл Р.Дж.

 1988 г. «Насекомые-щи-

товки Калифорнии. Часть 1. Ложнощи-
товки (Homoptera: Coccoidea: Coccidae)». 
Техническая серия по сельскохозяйствен-
ной биосистематике и фитопатоологии 
№ 1. Сакраменто, Департамент продо-
вольствия и сельского хозяйства Кали-
форнии. С.132. (стр. 126–127) / 

Gill,  R.J. 

1988. The scale insects of California. Part 
1 The soft scales (Homoptera: Coccoidea: 
Coccidae). Technical Series in Agricultural 

8. Референтные коллекции

151

Biosystematics and Plant Pathology No. 1. 
Sacramento, California Department of Food 
and Agriculture. 132 pp. (pp. 126–127). 

Кокциды (Coccoidea)

Джилл Р.Дж.

, 1988. «Насекомые-

щитовки Калифорнии. Часть 2. Вто-
ростепенные семейства (Homoptera: 
Coccoidea)». Сакраменто, Департамент 
продовольствия и сельского хозяй-
ства Калифорнии. С. 241 / 

Gill, R.J.

 1993. 

The scale insects of California. Part 2 The 
minor families (Homoptera: Coccoidea). 
Sacramento, California Department of 
Food and Agriculture. 241 pp.

Щитовки (Diaspididae)

Джилл Р.Дж.

 1987 г. «Насекомые-щи-

товки Калифорнии. Часть 3. Щитовки-щи-
тоносцы (Homoptera: Diaspididae)». Техни-
ческая серия по сельскохозяйственной 
биосистематике и фитопатологии № 3. Са-
краменто, Департамент продовольствия и 
сельского хозяйства Калифорнии. С. 307 / 

Gill, R.J.

 1997. The scale insects of California. 

Part 3. The armored scales (Homoptera: 
Diaspididae). Technical Series in Agricultural 
Biosystematics and Plant Pathology No. 3. 
Sacramento, California Department of Food 
and Agriculture. 307 pp.

Вильямс Д. Дж. и Ватсон Г.В.

 1988 г. 

«Щитовки тропиков южной части Тихо-
океанского региона. Часть 1. Щитовки-
щитоносцы (Diaspididae)». Валлингфорд, 
СК, Энтомологический институт Между-
народного центра сельскохозяйствен-
ных исследований. (стр. 13) / 

Williams, 

D.J. & Watson, G.W.

 1988. The scale insects 

of the tropical south Pacific region. Part 
1. The armoured scales (Diaspididae). 
Wallingford, UK, CAB International Institute 
of Entomology. (p. 13).

Мучнистые червецы (Pseudococcidae)

Вильямс Д.Дж. и дэ Виллик М.С.Г. 

1992  г. «Мучнистые червецы Централь-
ной и Южной Америки». Валлингфорд, 

СК, Энтомологический институт Между-

народного центра сельскохозяйствен-

ных исследований. (стр. 22) / 

Williams, 

D.J. & de Willink, M.C.G.

 1992. Mealybugs 

of Central and South America. Wallingford, 

UK, CAB International. 635 pp. (p. 22).

Вильямс Д. Дж. и Ватсон Г.В.

 1988 г. 

«Щитовки тропиков южной части Тихоо-

кеанского региона. Часть 2. Мучнистые 

червецы (Pseudococcidae)» Энтомологи-

ческий институт Международного центра 

сельскохозяйственных исследований. 

С. 260. (стр. 11)./ 

Williams, D.J. & Watson, 

G.W. 1988.

 The scale insects of tropical 

south Pacific region. Part  2. Mealybugs 

(Pseudococcidae). CAB International 

Institute of Entomology. 260 pp. (p. 11).

Чешуекрылые (Lepidoptera)

Холловей Дж.Д., Брэдли Дж.Д. 

и Беттс С.Р.

, под ред. 1987 г. «Руко-

водство по насекомым, важным для 

человека. Т.1. Lepidoptera». Валлинг-

форд, СК, Энтомологический инсти-

тут Международного центра сельско-

хозяйственных исследований. (стр. 

11–14) / 

Holloway,  J.D., Bradley, J.D. 

& Betts,  C.R.

, eds. 1987. CIE guides 

to insects of importance to man. Vol. 

1. Lepidoptera. Wallingford, UK, CAB 

International Institute of Entomology. 

(pp. 11–14).

Трипсы (Thysanoptera)

Палмер Дж.М., Моунд Л.А. и 

Оме  Г. Дж. 

1989 г. «Руководство по зна-

чимым для человека насекомым. Т.2. 

Thysanoptera». Валлингфорд, Энтомоло-

гический институт Международного цен-

тра сельскохояйственных исследований; 

Лондон, Британский музей естественной 

истории. С. 73. (стр. 3–5) / 

Palmer, J.M., 

Mound, L.A. & du Heaume, G.J. 

1989. CIE 

guides to insects of importance to man. 

Vol. 2. Thysanoptera. Wallingford, UK, CAB 

International Institute of Entomology; 

London, British Museum of Natural History. 

73 pp. (pp. 3–5).

152

Трипсы-Вики.

 2013 г. Сбор и под-

готовка трипсов для исследования. До-
ступно по ссылке: http://thrips.info/wiki/
Collecting_and_preparing_thrips_for_
study (последний доступ осуществлен 22 
сентября 2015 г.).

8.3 Референтная коллекция нематод

8.3.1 Оборудование и реактивы

 

ƒ

высушивающее средство (например, 
силикагель, хлорид кальция, 95%-
ный этиловый спирт);

 

ƒ

этиловый спирт;

 

ƒ

формалин;

 

ƒ

глицерин;

 

ƒ

парафильм;

 

ƒ

сушилка;

 

ƒ

препаровальная игла;

 

ƒ

стеклянная крышка для покрытия ча-
сового стекла;

 

ƒ

нагреватель;

 

ƒ

предметное стекло для микроскопа;

 

ƒ

покровное стекло для микроскопа;

 

ƒ

пипетка;

 

ƒ

мелкие стеклянные шарики, тонкая 
проволока или воск для закрепления 
крышек;

 

ƒ

пробирка;

 

ƒ

часовое стекло.

8.3.2 Процедура фиксации нематод для 

постоянного хранения

 

ƒ

Выделите нематод на разных стадиях 
развития, как описано в Главе 5.

 

ƒ

Переместите живые образцы на часо-
вое стекло.

 

ƒ

Уменьшите количество воды в часо-
вом стекле до 1 мл.

 

ƒ

Добавьте 2 мл 3%-ного горячего фор-
малина на часовое стекло и оставьте 
для затвердевания на, как минимум, 2 
недели.

Примечание:

 Не используйте фик-

сирующие жидкости, содержащие эти-
ловый спирт, так как это приводит к по-
вреждению.

8.3.2.1  Препараты для длительного 

хранения

 

ƒ

После умерщвления и фиксации пе-
реместите образцы из фиксирующего 
вещества в 1 мл раствора Сейнхор-
ста I (20 частей 95%-ного этилового 
спирта, 1 часть глицерина и 79 частей 
воды) в часовом стекле.

 

ƒ

Поместите часовое стекло с образца-
ми в сушилку с высушивающим веще-
ством на 2-3 дня.

 

ƒ

 Добавьте в два раза больше раство-
ра Сейнхорста II (5 частей глицерина 
и 95 частей 95%-ного этилового спир-
та) к имеющемуся раствору в часовом 
стекле.

 

ƒ

Накройте часовое стекло стеклянной 
крышкой, оставив небольшой зазор 
около 1-2 мм шириной.

 

ƒ

Храните образцы при комнатной тем-
пературе, чтобы обеспечить медлен-
ное испарение спирта в течение 2-х 
недель.

 

ƒ

Переместите образцы препароваль-
ной иглой (или же закрепите реснич-
ку или перышко на держателе для 
ручек) на стеклянное предметное 
стекло с каплей глицерина.

 

ƒ

Распределите нематод, при необхо-
димости.

 

ƒ

Добавьте маленькие стеклянные ша-
рики, тонкую проволоку или воск для 
поддержания покровных стекол для 
крупных нематод.

 

ƒ

Осторожно поместите покровное 
стекло и запечатайте его лаком для 
ногтей.

8.3.2.2  Незакрепленные образцы

 

ƒ

После умерщвления и фиксации пе-
реместите образцы в пробирку.

 

ƒ

Добавьте 3%-ный формалин с 2%-ным 
глицерином для предотвращения 
разрушения образцов в случае испа-
рения консервирующего вещества;

 

ƒ

Запечатайте пробирку парафильмом 
и прикрепите этикетку.

8. Референтные коллекции

153

8.4 Референтная коллекция 

фитопатогенов и гербарий

Референтная коллекция возбудите-

лей болезней растений и гербарий мо-
жет содержать любые из нижеприведен-
ных типов образцов:

 

ƒ

грибы;

 

ƒ

инвазивные растения;

 

ƒ

паразитические растения;

 

ƒ

части растений, пораженные патоге-
нами (например, бактериями, гриба-
ми, нематодами, вирусами, вироида-
ми, фитоплазмами, 

Liberibacter)

 

ƒ

части растений, пораженных абиоти-
ческими факторами.

В хорошей референтной коллекции 

возбудителей болезней растений и в гер-
барии (в дополнение к перечисленным 
во введении) должны храниться:

 

ƒ

образцы с достаточным количеством 
материала;

 

ƒ

образцы с разными частями растений 
с разными стадиями развития сим-
птомов;

 

ƒ

образцы с разными морфологически-
ми состояниями, что касается грибов 
(например, анаморф и телеоморф, 
или в состоянии эцидия, пикниды, 
урединия и телия);

 

ƒ

образцы из разных стран;

 

ƒ

образцы из разных административ-
ных районов;

 

ƒ

множество образцов, чтобы охватить 
разнообразие среди популяций;

 

ƒ

дополнительная информация, напри-
мер, фотографии симптомов в поле и 
фотографии образцов перед сушкой.

Примечание

: Можно приготовить 

препарат образцов на предметных сте-
клах для микроскопа и хранить его в гер-
барии.

8.4.1 Выбор метода

Большинство образцов растений, 

включая зараженные патогенами, 

могут быть сохранены посредством 
воздушной сушки, сушки с помощью 
десикантов, сушки под прессом, лио-
фильной сушки, заморозки и ламини-
рования. Очень мясистые и хрупкие об-
разцы можно сохранить посредством 
консервации для сохранения формы 
образца. Преимущества и недостатки 
каждого из этих методов кратко пред-
ставлены в табл. 3.

8.4.2 Требования к образцам

Образцы должны быть обработаны в 

кратчайшие сроки. Если этого не дела-
ется, то наклейте на образцы этикетки и 
храните их в надлежащих условиях – в 
холодильнике или в прохладном зате-
ненном месте. 

Примечание:

 Некоторые 

тропические растения становятся темно 
бурыми, когда их хранят в холодильнике.

Образцы должны содержать доста-

точно материала в хорошем состоянии 
для их сохранения. Перед обработкой 
образцов необходимо сфотографиро-
вать их, если это требуется. 

Примеча-

ние:

 Сушка изменит цвет больной ткани 

с симптомами и форму мясистых частей 
растений.

Рекомендуется выбирать части рас-

тений, на которых проявляются разные 
стадии симптоматики или разное состо-
яние патогенов. Части растений следу-
ет разрезать, чтобы они поместились в 
контейнеры. Объемный материал мож-
но разрезать пополам или на четыре ча-
сти или нарезать ломтиками для упро-
щения сушки.

Необходимо надеть одноразовые 

перчатки и начисто вытереть поверх-
ности рабочего стола и инструменты 
дезинфицирующим средством. Это осо-
бенно важно при работе с материалом, 
зараженным болезнями, которые могут 
оказать неблагоприятное воздействие.

 

 

 

 

 

 

 

содержание      ..     8      9      10      11     ..