содержание .. 3 4 5 6 ..

РУКОВОДСТВО по оказанию фитосанитарных диагностических услуг (ФАО, Версия 1.1) - часть 5

3. Нематериальная инфраструктура

6. Материал для контроля качества

[Опишите образцы, которые будут использоваться в качестве (референтных) материалов контроля

качества, например референтные коллекции и другие национальные коллекции. Для молекулярных

методов определить следующее:

Отрицательный контроль:

В некоторых обстоятельствах должны быть включены образцы тех

же самых или сходных видов хозяев, что и исследуемые образцы, свободные от патогена.

Положительный контроль:

ДНК патогена, ДНК или РНК беспозвоночных, длина которой охва-

тывает участок, подлежащий амплификации с помощью ПЦР или ПЦР в реальном времени, со-

ответственно. Она может быть извлечена из растения, плазмиды, бактериальной или грибной

культуры или беспозвоночного. Положительный контроль будет использоваться в концентрации

примерно в 1000 раз больше, чем предел обнаружения ПЦР.

Внутренний контроль:

Для каждого образца одновременно или в качестве альтернативы может

использоваться внутренний контроль, в котором была получена отрицательная реакция на пато-

ген-мишень. Внутренние контроли позволяют выявлять РНК или ДНК растений или ДНК бактерий,

грибов, беспозвоночных или нематод.

Отсутствие типового контроля (вода в качестве контроля):

Нуклеиновая кислота не добавля-

ется в реакционную смесь]

7. Процедура контроля качества

[Опишите калибровку оборудования, проверку критических параметров, регулярное участие в ква-

лификационном тестировании и оценку неопределенности измерений (НИ)]

8. Оборудование

[Перечислите все оборудование, необходимое для проведения анализа]

9. Реактивы и растворы

[Перечислите все реактивы и растворы, полученные из них]

10. Процедура

[Подробно опишите метод, вплоть до этапов выявления]

11. Интерпретация и запись результатов

12. Расчеты

[Подробно опишите расчеты, если требуется]

13. Отчет о результатах

14. Справочные документы

15. Приложения

Название процедуры работы с образцом

Номер

версии

Дата

выпуска

Описание

Автор

Рецензент

Редактор

Владелец

Содержание

[со следующими разделами]

1. Цель

[Опишите работу с образцами, поступающими в лабораторию, которая включает в себя следующее:

Как документируются образцы

Как образцы готовятся к обработке

Как проводятся идентификация

Как готовится отчет по идентификации

Как образцы высылаются для проведения внешнего анализа/валидации]

2. Область применения

[Опишите, в какой области или в отношении кого применяется процедура]

3. Действия

[Опишите, как вести работу с образцом, включая следующее:

Как образцы доставляются в лабораторию

Каким инструкциям по охране здоровья и безопасности необходимо следовать перед началом

работы с образцами

Роли и обязанности приемщика

Как хранить образцы

Как присвоить уникальный идентификационный номер образцам для их отслеживаемости

Роли и обязанности диагностического персонала по работе с образцами

Что делать при получении непригодных образцов

Обработка и анализ образцов

Сообщение о результатах клиенту уполномоченным лицом

Как сохранить или утилизировать образцы

Как отправить образцы для внешнего анализа/валидации]

4. Приложения

Типовая форма по работе с образцом

3.7 Система управления

информацией в лаборатории

3.7.1 Введение

Система управления информацией в

лаборатории (СУИЛ) – это метод, при по-
мощи которого лаборатория получает,
анализирует, хранит и сообщает о лабо-

раторных данных. Она помогает лабора-

тории управлять и систематизировать

лабораторные данные и свою деятель-

ность. Она помогает лаборатории от-
слеживать образцы, повышать точность

вводимой информации об образце, уве-

личивает пропускную способность и, на-

конец, повышает эффективность работы.

3.7.2 Необходимость

системы управления информацией

в лаборатории

Сбор, обработка и распространение

информации о вредных для растений
организмах имеет решающее значение
для проведения надзора, исследования
первичных очагов, принятия ответных
мер и содействия проведению перегово-
ров по доступу на рынок и т.д. Важно об-
ладать диагностической информацией,
доступной для своевременного и обо-
снованного принятия решений. Без со-
ответствующей системы управления ин-
формацией извлечение информации об
образце, связанном с ним анализе и со-
ставление отчетов будет осуществляться
вручную и будет трудоемким процессом.
Лаборатории должны обеспечить, что их
результаты ясны, не содержат ошибок и
соответствуют стандартам обеспечения
и контроля качества, установленным ре-
гулирующими органами (ИСО 9001/ИСО
17025). Если лаборатория генерирует
большой объем информации, проводя

повседневные анализы и будучи обя-
занной выполнять работу с образцами в
сжатые сроки, необходимо позаботиться
о безопасности и целостности данных.

Специально разработанная система

управления информацией поможет лабо-

ратории быстрее и надежнее производить
точные и воспроизводимые результаты.
Информацию об образце по результатам
лабораторного анализа будет легче хра-
нить и отслеживать с момента приема об-
разца до момента сообщения результатов.
Также лаборатория может оценить обна-
ружения вредителей и болезней на опре-
деленных товарах (взаимосвязь между хо-
зяином и вредным организмом), статус их
ликвидации, историю наблюдений и т.д.,
для проведения надзора и научно-иссле-
довательской деятельности.

3.7.3 Управление информацией

в лаборатории

Лаборатории придется определить,

какой тип системы ей необходимо при-
менять для управления информацией
об образце. Это решение должно быть
основано на анализе потребностей и
деятельности лаборатории. Следующие
факторы могут быть приняты во внима-
ние при принятии решений:

размер организации или лаборато-
рии;

количество повседневных анализов в
неделю или месяц;

общее количество полученных об-
разцов;

нормативные требования;

требования клиентов;

необходимость проведения анали-
за и сообщения результатов в более
сжатые сроки;

как адаптироваться к проблемам или
справиться с ними в будущем, напри-
мер, со значительным увеличением
объема данных.

3.7.4 Инструменты

управления информацией

в лаборатории

3.7.4.1 Учетные записи на бумажных

носителях

По-прежнему можно использовать

простую систему учета с использовани-

3. Нематериальная инфраструктура

ем бумажных носителей. Есть определен-

ные преимущества в использовании руч-

ной системы учета данных: ее дешевле

внедрить, нет необходимости во всеобъ-

емлющей или дорогостоящей програм-

ме обучения применению специализи-

рованного программного обеспечения,

риск искажения данных гораздо меньше

и т.д. Но ее главные недостатки заключа-

ются в том, что для извлечения данных

требуется время, особенно при обработ-

ке большого объема данных, а также ус-

ложняется обмен информацией.

3.7.4.2 Ведомости

Электронная ведомость (например,

MS Excel) является цифровым эквива-

лентом бумажной ведомости. Она мо-

жет быть использована для хранения

и управления данными. Электронные

ведомости просты в использовании,

но трудно управляемы, если слишком

много информации заносится в одну

таблицу. Становится все труднее ее ре-

дактировать или найти в ней часть ин-

формации. Отсутствует контроль вер-

сий, что создает путаницу и неточность,

когда электронные ведомости выдаются

нескольким штатным сотрудникам. Нет

никакого контроля или жестких правил

в отношении типа информации, которая

может быть занесена в определенный

столбец электронной ведомости. По-

этому данные могут стать неточными и

могут поставить под угрозу целостность

результатов.

3.7.4.3 Базы данных

База данных (например, MS Access,

Oracle), как правило, используется для

хранения больших объемов информа-

ции. Организация может хранить любые

файлы в базе данных, включая файлы

Word, изображения и PDF-файлы. Дан-

ные могут отправляться другим лицам в

формате файлов PDF или Excel. База дан-

ных помогает установить взаимосвязь

между типами данных для быстрого до-

ступа к информации и одновременного

обновления. Правки могут вноситься

легко, и несколько человек могут иметь

доступ к одному набору данных при по-

мощи систем управления базами дан-

ных, при этом сохраняется целостность

данных. Базы данных обеспечивают

большую комплексность с точки зрения

управления данными, но нуждаются в

технической поддержке посредством

программирования или SQL-кода.

3.7.4.4 Готовое программное

обеспечение (например, LIMS,

Q-pulse)

Специализированное программное

обеспечение предназначено для опти-

мизации и расширения лабораторных

операций посредством потоковой ор-

ганизации данных в лаборатории. Такое

программное обеспечение может быть

использовано для:

приемки, регистрации и маркировки

образца;

распределения работы (например,

анализов по каждому образцу);

проверки состояния работы;

отслеживания учетных записей и об-

разцов;

создания отчетов о проведении ана-

лизов после применения контроля

качества.

Эти системы должны быть адаптиро-

ваны под потребности пользователей.

С использованием клиент-серверных

инструментов система позволяет об-

рабатывать данные в любой точке сети.

Более того, с модулями на основе веб-

технологий в системе пользователи мо-

гут вынести операции за пределы лабо-

ратории.

3.7.5 Что хранить

СУИЛ позволяет организации хранить

различные части информации, необхо-

димой для выполнения функций лабора-

тории. Они могут включать в себя лабо-

раторные протоколы, список реактивов,

изображения, информацию об образце,

информацию об оборудовании; при этом

минимумом является следующее.

3.7.5.1 Регистрация образца и

информация о доступе

СУИЛ используется для хранения сле-

дующей информации о регистрации об-

разца и о доступе:

дата приемки образца;

уникальный номер доступа (для про-

слеживаемости образца);

анализы, которые должны быть про-

ведены;

направление диагностики (энтомоло-

гия, микологии, вирусологии, немато-

логия);

контактные данные заказчика;

регистрационный номер заказчика;

количество полученных пробирок;

симптомы образца, если таковые

имеются;

срочный или повседневный анализ;

данные об обнаружении образца на

хозяине (почва, сорт, контейнер, ка-

кое-либо растение и его части и т.д.);

данные о стране происхождения и

месте нахождения.

3.7.5.2 Данные по идентификации

порядок;

семейство;

род;

вид;

стадия развития;

состояние (живой или мертвый);

данные о специалисте, проведшем

идентификацию;

дата проведения идентификации;

дата получения окончательного ответа;

расценки, если таковые имеются;

новое сообщение (новый хозяин или

новая связь).

3.8 Ссылки

Международная организация по

стандартизации (ИСО).

2008 г. ИСО

9001:2008: «Системы менеджмен-

та качества. Требования.» Доступно

по ссылке: http://www.iso.org/iso/

catalogue_detail?csnumber=46486
(последний доступ осуществлен 17
сентября 2015 г.).

Международная организация по

стандартизации (ИСО).

2005 г. ИСО/

МЭК 17025:2005: «Общие требования к
компетентности испытательных и ка-
либровочных лабораторий». Доступ-
но по ссылке: http://www.iso.org/iso/
home/store/catalogue_tc/catalogue_
detail.htm?csnumber=39883 (послед-
ний доступ осуществлен 17 сентября
2015 года).

Орган по международной аккре-

дитации Новой Зеландии (IANZ),

май 2011 г. «Научные критерии ак-
кредитации – Биологические испыта-
ния». 4-е издание. Доступно по ссыл-
ке: http://www.ianz.govt.nz/services/
accreditation-2/accreditation/labora-
tories/biological/ (последний доступ
осуществлен 17 сентября 2015 года).

Крог П.

2012 г. «Жизненный цикл

файла: понимание потока данных».
Филадельфия, Пенсильвания. Аме-
риканское общество фотографов
СМИ /

Krogh, P.

2012. File lifecycle:

understanding workflow. Philadelphia,
PA, American Society of Media
Photographers. Документ доступен
по ссылке: http://dpbestflow.org/file-
lifecycle/file-lifecycle-overview (по-
следний доступ осуществлен 17 сен-
тября 2015 года).

Ло П.Л. и Бланк Р.Х.

1989 г. «Обсле-

дования видов щитовок-щитоносцев
(Hemiptera: Diaspididae) в садах киви».
Журнал «Энтомолог Новой Зелан-
дии», 12: 1–4 /

Lo, P.L. & Blank, R.H.

1989. A survey of armoured scale species
(Hemiptera: Diaspididae) in kiwifruit
orchards. NZ Entomologist, 12: 1–4.

Стандартные операционные про-

цедуры

(2014 год). Неопубликован-

ное. Новая Зеландия, Лаборатория
здоровья растений и окружающей
среды, Министерство сырьевой про-
мышленности.

3. Нематериальная инфраструктура

Томсон М., Лионс А., Кумарасингх

Л., Пек Д.Р., Конг Г., Шаттук С. и Ла

Салле Дж.

2011 г. «Дистанционная

микроскопия: успешное примене-

ние в обеспечении фитосанитар-

ной биологической безопасности в

Австралии и Новой Зеландии» «Ав-

стралийский энтомологический жур-

нал», 50: 1–6 /

Thompson, M., Lyons,

A., Kumarasinghe, L., Peck, D.R.,

Kong, G., Shattuck, S. & La Salle, J.

2011. Remote microscopy: a success

story in Australian and New Zealand

plant biosecurity. Australian Journal of

Entomology, Идентификатор цифро-

вого объекта (DOI): 10.1111/j.1440-

6055.2010.00803.x.

Уокер К.

2012 г. «Руководство пользо-

вателя по библиотеке изображений

«PaDIL»». Неопубликованное руко-

водство пользователя. Музей Викто-

рии, Австралия /

Walker, K.

2012. PaDIL

user guide. Unpublished user guide.

Museum Victoria, Australia.

РАЗДЕЛ 2

Организация рабочего процесса в лаборатории

4. Работа с образцами

Краткий обзор

В этом разделе дается обзор ключе-

вых методов, используемых для выяв-
ления и идентификации вредных для
растений организмов. Существует це-
лый ряд методов, доступных для специ-
алиста по диагностике – от визуального
исследования под микроскопом до сек-
венирования ДНК. Будет дано общее ру-
ководство по процессу исследования и
отбора образцов, а также по этапам про-
ведения диагностики. Подробно описы-
ваются широко используемые методы,
и приводится несколько примеров по
разным группам вредных организмов.

На рис. 14 приведена общая схема

функционирования службы по идентифи-

кации вредных организмов. В центре по-

казан рабочий процесс, слева – исходные

ресурсы, а справа – результаты. Эта схема

приводится для того, чтобы целиком по-

казать всю систему основных видов дея-

тельности, этапов и моментов принятия

решений, которые служат отличительным

признаком службы по идентификации

вредных организмов. Это не «предпи-

санная практика», которой нужно сле-

довать, и не исчерпывающее описание

системы, однако предназначение этой

схемы заключается в содействии появле-

нию независимых идей о том, как можно

реализовать имеющиеся возможности в

контексте вашей конкретной ситуации.

Рисунок 14.

Общая схема функционирования службы по идентификации вредных организмов

Исходные ресурсы

Рабочий процесс

Результаты

Оперативная основа

(например)

Бизнес-план

Показатели деятельности

Развитие персонала

Материальная

инфраструктура (например)

Помещения

Оборудование

Нематериальная

инфраструктура (например)

Система качества (например, СОП

учета и контроля, отчетность)

Учебно-образовательная под-

держка

Развитие персонала

Кадровые ресурсы

(например)

Развитие бизнеса

Управленческие

Технические

Финансовые

Юридические

Ресурсы (например)

Биологические коллекции

Литература/цифровые носители

Информация об

образце и клиенте

Дальнейшее

действие с образцом

Получение образца

в лаборатории

Анализ данных

Отчет

Диагностика

Последует идентификация или

работа прекратиться

Направление в зону

проведения диагностики

Определение риска

Для здоровья человека

Карантинного

Выявление /

идентификация

Отчет для клиента

Обязанности НОКЗР

Направляется в архив /

утилизируется

Данная схема отражает структуру по-

следующих разделов и глав и показыва-
ет, как эти сферы деятельности взаимо-
действуют, обеспечивая эффективное
функционирование службы по иденти-
фикации вредных организмов.

Введение

Образцы могут поступать в лаборато-

рию из множества источников и сопро-
вождаться разными заявками. Важно,
чтобы эти образцы и заявки, сопрово-
ждающие их, надлежащим образом ре-
гистрировались и затем перемещались
по лаборатории и отслеживались до
того момента, когда может быть принято
окончательное решение.

4.1 Приемка образцов

В большинстве случаев можно ожи-

дать, что образцы поступают через ин-
спекторов; однако в зависимости от ра-
боты лаборатории образцы также могут
поступать от фермеров, представителей
сельскохозяйственной отрасли и на-
селения. Поэтому объем информации,
который может быть собран об образ-
це, будет разным. Несмотря на это, чем
больше сведений можно получить об об-
разце, тем выше вероятность получения
быстрого и точного результата диагно-
стики. Поэтому фитосанитарным диагно-
стическим лабораториям при приемке
образцов рекомендуется давать клиен-
там для заполнения информационные
бланки, чтобы они могли задокументи-
ровать относящуюся к делу информа-
цию. На этих бланках должны быть отра-
жены такие сведения, как:

контактные данные лица или орга-
низации, которые вносят заявку на
диагностику образца;

данные об образце, например, тип
растения, возраст растений;

проблема, например, симптомы, про-
цент пораженных растений;

история выращивания растения.

В процессе приемки образцов клиент

должен получить ожидаемую им инфор-
мацию, т.е. информацию о том, существует
ли соответствующий анализ, каковы стои-
мость и сроки предоставления отчета.

Объем информации с указанием ос-

новного описания и характеристик фи-
тосанитарных симптомов, который мо-
жет быть представлен на бланке заявки,
не ограничен; однако необходимо стре-
миться к получению минимального объ-
ема описания, такого как – поражены ли
листья, побеги, плоды или корни, наблю-
дается ли некроз, пожелтение, усыхание
или увядание.

4.2 Регистрация образцов

Когда образец поступает в лабора-

торию для анализа, он должен сопро-
вождаться документами с заявкой на
приемку образца (как описано выше;
например, рис. 15). Сведения об образ-
це должны затем быть внесены в систе-
му регистрации, и образцу должен быть
присвоен уникальный идентификацион-
ный код или номер. Это позволит отсле-
живать образец и легко связать резуль-
таты диагностики с данными о клиенте с
целью быстрого предоставления точной
отчетности.

Образцы должны доставляться в цен-

тральный пункт, где их можно открыть
и зарегистрировать. Для определения
того, какой диагностической группе
следует направить образец, проведите
оценку информации в документах для
установления необходимого анализа
или основных симптомов, указанных
клиентом. Проверьте наличие всех важ-
ных сведений, таких как:

наименование отправителя – назва-
ние компании и контактные данные;

адрес и контактные номера/адрес эл.
почты;

кодовый номер (кодовые номера)
клиента;

4. Работа с образцами

Рисунок 15A.

Страница 1 стандартного, двухстраничного бланка заявки на приемку образца, который используется Fera

Бланк заявки на приемку

образца в Фито-Клинику, 2015 г.

ФИО:

Ваш справ.номер:

Компания:

Договор-заявка №:

Адрес:

ФИО и адрес для отправки

счета (если отличается)

Индекс:

Номер НДС

Тел:

Факс:

Моб.тел:

Эл.почта:

Хотите ли вы зарегистрироваться в системе «SamTrack»?



(Наша бесплатная и безопасная онлайн система отслеживания

образцов, позволяющая быстро и легко получить доступ к информации о вашем образце)*

Образец

– Чтобы помочь нам с проведением диагностики, пожалуйста, попытайтесь указать как можно больше информации

Род, вид и сорт растения:

(Или тип семян / растительного материала / почвы)

Метод размножения / посадки (например, семена,

черенки и т.д.):

Возраст растений или

дата посева:

Растения выращиваются в открытом или закрытом

грунте, или это продукт запаса?

Какие пестициды / гербициды использовались и

когда?

Проблема

Какие симптомы вы наблюдали?

Например, пятнистость листьев, усыхание, увяда-

ние

По вашему мнению, что может быть причиной?

Бактерии



Грибы



Вредитель



Нематода



Вирус



Распределение симптомов и пораженная часть рас-

тения (корни, стебли и т.д.)?

% пораженных растений

Когда проблему впервые заметили?

Если вы хотите, чтобы был проведен конкретный

анализ из нашего прайс-листа, пожалуйста, укажите

какой:

Другая информация:

история посевов и типы выращиваемых рядом растений, уклон, температура, влажность, орошение,

отчетность.

Настоящим я разрешаю Фито-Клинике Fera проводить анализы этого образца и соглашаюсь со стандартными положениями и

условиями Fera.

Подписано:

Дата:

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ:

Неподписанные бланки рассматриваться не будут.

Мы можем использовать ваши контактные данные для отправки вам информации о наших услугах/предложениях/событиях;

однако ваши данные не будут переданы никакому стороннему лицу за пределами Fera. Пожалуйста, поставьте здесь галочку,

если вы хотите отказаться от получения такого рода информации и хотите получать только информацию, относящуюся к вашему

образцу (образцам)

Настоящим Fera исключает всю ответственность за любые претензии, потери, запросы или убытки какого-либо характера (пред-

виделись ли такие претензии, потери, запросы или убытки, были известны или нет), возникающие из или в связи с услугами и

подготовкой любого технического или научного отчета, включая без ограничения косвенные или побочные убытки или потери

реальной или предполагаемой прибыли (включая потерю прибыли по контрактам); неполучение доходов, потерю бизнеса; по-

терю возможности; потерю ожидаемой экономии; потерю неосязаемых активов; потерю репутации; потерю или повреждение

данных; упущенные возможности использования денег или иное, и независимо от факта получения информации о возмож-

ности таких претензий, потерь, запросов или убытков и от их возникновения в результате небрежности (включая халатность) в

рамках контракта или по иным причинам. Это заявление не влияет на ваши законные права.

Рисунок 15Б.

Страница 2 стандартного, двухстраничного бланка заявки на приемку образца, который используется Fera

4. Работа с образцами

Отправка вашего образца на диагностику

Как выбрать образец – Образец, который вы отправляете, дает ключ к диагностике, поэтому, пожалуйста, примите во внимание

следующее:

• Постарайтесь отправить образец с типичными признаками проблемы – нам необходимо увидеть весь комплекс симптомов.

• Что касается болезней, пожалуйста, включите в образец часть, которая включает границу между здоровой и больной тканью,

и если это возможно, включите здоровый материал для сравнения, обозначив его как таковой.

• Если симптомы на листьях или побегах проявляются в виде общего изменения цвета или усыхания, указывая на возможное

повреждение корней, в таком случае, пожалуйста, отправьте нам все растение целиком (если возможно) и включите корни и

окружающую их почву.

• Если вы предполагаете, что проблема вызвана нематодами, пожалуйста, включите отдельные образцы почвы как из зоны за-

ражения, так и с границы зараженной зоны.

Как упаковать образец

Целые растения

Поместите влажный корневой ком в пластиковый пакет, который запечатыва-

ется вокруг стебля растения. Поместите все растение во второй пластиковый

пакет, заполните его небольшим количеством воздуха и запечатайте.

Листья и побеги

Диагностика вирусных болезней:

Диагностика других / неизвестных болезней:

Поместите в пластиковый пакет, заполните его небольшим количеством воз-

духа и запечатайте. Заверните образец в слегка намоченную фильтровальную

бумагу, поместите в пластиковый пакет, заполните его небольшим количеством

воздуха и запечатайте.

Сочные материалы

Например, фрукты, овощи, клубни (кроме картофеля), луковицы, клубнелукови-

цы и т.д. Заверните в сухую фильтровальную бумагу, если они гниют/трескают-

ся, пожалуйста, заверните каждый из них по отдельности. Поместите в пласти-

ковый пакет, заполните его небольшим количеством воздуха и запечатайте.

Беспозвоночные вредители

Образцы беспозвоночных вредителей (насекомых, пауков, клещей и т.д.) следу-

ет помещать в герметичный пластмассовый контейнер.

Клубни картофеля

Диагностика, связанная с беспозвоночными

вредителями:

Диагностика других / неизвестных болезней:

Заверните в сухую фильтровальную бумагу. Поместите в пластиковый пакет,

заполните его небольшим количеством воздуха и запечатайте.

Заверните в сухую фильтровальную бумагу.

Не помещайте в пластиковый

пакет.

Образцы почвы

Для анализа на нематоды. Поместите 500 г почвы в крепкий пластиковый пакет

и запечатайте его.

Образцы семян

Позаботьтесь о том, чтобы семена были надежно упакованы.

Все образцы должны быть помещены в крепкие картонные коробки и надежно упакованы с добавлением скатанной бумаги. В

отдельный пакет поместите свой бланк заявки на приемку образца и запечатайте коробку

Отправьте ваш образец по адресу:

Фито-Клиника Fera Сэнд Хаттон Йорк YO41 1LZ Соединенное Королевство

В идеале, образцы следует отправлять через курьерскую службу экспресс-доставки или почтовым отправлением первого

класса, чтобы они были получены Fera на следующий день. Если возможно, не отправляйте образцы накануне выходных дней

или государственных праздников, однако, если это событие – неизбежно, то на наружной части упаковки сделайте отметку

«Пожалуйста, заморозьте при получении», если необходимо.

Если у вас есть вопросы, обращайтесь:

Горячая линия Фито-Клиники Тел: 01904 462324 Факс: 01904 462147

Эл. почта: plantclinic@fera.gsi.gov.uk

*Система «SamTrack» - это наша бесплатная и безопасная онлайн система отслеживания образцов, позволяющая быстро и лег-

ко получить доступ к информации о вашем образце. Вы можете зарегистрироваться в этой системе по ссылке: http://samtrack.

fera.defra.gov.uk/. После регистрации вы получите уникальное имя пользователя и пароль, а также инструкции по пользованию

системой.

Использование Системы «SamTrack» обеспечивает актуальной информацией 24 часа в сутки. Вы можете:

• Проверить, когда мы получили ваш образец (ваши образцы), и кто с ними работает.

• Проверить, какие вредители и болезни были идентифицированы, проверить отчет и увидеть краткий обзор по всем образ-

цам, которые вы нам присылали.

• Получить доступ к информации в нерабочее время.

идентичность растения – хозяина
(растений-хозяев) / образца (образ-
цов);

какой анализ требуется провести.

Если отсутствует бланк заявки на при-

емку образца, или информации недоста-
точно, свяжитесь с клиентом для получе-
ния требуемой информации.

При регистрации образца следует за-

фиксировать следующие сведения:

данные о клиенте (как указано выше);

осуществлен ли отбор этого образца
в рамках направленного обследова-
ния;

идентичность растения-хозяина (рас-
тений-хозяев) / образца (образцов);

сорт растения;

тип образца;

страна происхождения;

дата получения;

диагностическая группа (отдел), кото-
рая будет работать с образцом;

уникальный идентификационный код
или номер образца.

4.3 Исследование образцов

Как только образец был получен и

сведения об образце были записаны, он
готов для исследования. Первоначаль-
ная проверка может включать в себя:

сведения о хозяине и регистрацион-
ные номера образца;

пригоден ли образец для исследова-
ния, т.е. очевидные признаки чрез-
мерного гниения отсутствуют;

присутствуют ли летающие или под-
вижные насекомые, которых, воз-
можно, необходимо изолировать;

имеет ли присланный образец отно-
шение к заявленной проблеме.

После установления соответствия

образца требованиям первичной про-
верки, работа с ним переходит на этап
диагностики. Образцы, для которых за-
явлен конкретный анализ (например,

диагностика картофеля на выявление
вирусов), напрямую передаются соответ-
ствующему специалисту по диагностике.
Однако, в случае с образцами, в отноше-
нии которых поступил запрос на опреде-
ление этиологии неизвестной болезни,
требуется предварительное расследо-
вание. В следующих разделах описыва-
ются некоторые базовые наблюдения,
которые могут позволить наиболее точ-
но предположить, к каким таксонам от-
носятся возбудители или вредители, и
направление диагностики.

4.3.1 Корни, клубни,

луковицы и клубнелуковицы

Симптомы

– проверить наличие

дефектов, физического повреждения,
галлов или цист, чрезмерно разросших-
ся корней, гниения и т.д. Если гниение
имеет место, установите сухое оно или
влажное, внутреннее или поверхност-
ное, существенное или несущественное,
переходит ли на узловой корень.

Осмотр

– сначала осмотрите образец,

не трогая прикрепленную к нему почву.
Затем осторожно удалите почву тупым
инструментом или путем встряхивания и
сделайте повторный осмотр. И, наконец,
смойте всю почву и еще раз осмотрите
образец. На каждом этапе осматривайте
поверхности под препаровальной лупой
и ищите мицелий, плодовые тела, скле-
роции, стелющиеся гифы, мицелий, напо-
минающий шнурки или корни растений, и
т.д. Сделайте поперечные и горизонталь-
ные срезы больших кусков материала (на-
пример, клубней) и посмотрите, имеет ли
место изменение цвета сосудов или на-
блюдается ли общее гниение.

Осмотр под микроскопом

– подго-

товьте препарат на предметном стекле
и исследуйте его на наличие грибных
структур; посмотрите, наблюдается ли
движение бактерий.

Анализы

– выделите из лидирующего

края, используйте флотационный метод,
метод приманок, проведите инкубацию,
инокуляцию, проверьте почву (уровень
pH и электрическую проводимость).

Просмотрите информационный

листок по образцу

– проблемы с куль-

тивированием (например, переувлажне-
ние), вопросы хранения (например, за-
морозки, перегрев, нехватка кислорода),
уплотнение грунта или луговой мергель
(«хардпен»), загрязнение грунтовых вод
(например, утечка канализации), дата
посадки в грунт или горшок, проявление
симптомов, спектр пораженных хозяев,
распространение (местами или широкое
распространение), предыдущая история
посевов, анализы питательности, приме-
нение химических препаратов (напри-
мер, пестицидов или регуляторов роста,
таких как ингибиторы прорастания) и т.д.

4.3.2 Основа стебля

Симптомы

– проверьте наличие по-

раженных участков, язв, галлов, вторич-
ных корней, изменения цвета сосудов,
признаков повреждений беспозвоноч-
ными вредителями (например, экскре-
менты насекомых, паутина, слизь слиз-
ней или улиток).

Осмотр

– ищите мицелий, плодовые

тела (например, склероции, пикниды),
сделайте поперечные и продольные сре-
зы и посмотрите, имеет ли место изме-
нение цвета сосудов, несовместимость
прививки и т.д.

Осмотр под микроскопом

– под-

готовьте препараты на предметных сте-
клах и исследуйте их на наличие гриб-
ных структур, изменение цвета сосудов,
посмотрите, наблюдается ли движение
бактерий.

Анализы

– выделите из лидирующе-

го края, используйте метод приманок,
проведите инкубацию, инокуляцию и ис-
пользуйте флотационный метод.

Просмотрите информационный

листок по образцу

– повреждения по-

звоночными вредителями (например,
кроликами, оленями и т.д.), физические
повреждения (например, стрижка газо-
нов), повреждения, вызванные погод-
ными условиями (например, качание на
ветру, заморозки, засуха, применение
каменной соли зимой), почвоулучшите-
ли и мульча, и т.д.

4.3.3 Стебли и стволы

Симптомы

– проверьте наличие физи-

ческих повреждений и ран, пораженных
участков, язв, галлов, изменения цвета
сосудов, повреждений беспозвоночными
вредителями (например, червоточины,
паутина, экскременты насекомых) и т.д.

Осмотр

– ищите мицелий, плодовые

тела, ядовитые грибы, трутовые грибы,
сделайте поперечные и продольные
срезы и т.д.

Осмотр под микроскопом

– подго-

товьте препараты на предметных сте-
клах и исследуйте их на наличие грибных
структур, изменение цвета сосудов или
сердцевины, посмотрите, наблюдается
ли движение бактерий.

Анализы

– выделите из лидирующе-

го края, проведите инкубацию, инокуля-
цию, используйте флотационный метод.

Просмотрите информационный

листок по образцу

– повреждение по-

звоночными вредителями (например,
белками, оленями и т.д.), повреждения
беспозвоночными вредителями (напри-
мер, насекомыми – древоточцами), на-
блюдались ли какие-либо грибы или
трутовики, физическое повреждение (на-
пример, повреждение от удара молнии).

4.3.4 Листья, цветы и плоды

Симптомы

– осмотрите верхнюю и

нижнюю поверхности и, в случае с круп-
ными образцами, сделайте поперечные
и продольные срезы для определения

4. Работа с образцами

масштаба поражения. Проверьте, имеет
ли место какое-либо изменение цвета
или пятна и установите их распростране-
ние (например, старое или новое обра-
зование, между жилками или в жилках,
по краям, апикальные или дистальные,
единичные, многочисленные, срощен-
ные), деформация и изменение формы
(нетипичные форма и цвет, обильное
формирование волосков, искривлен-
ность и т.д.). Запротоколируйте, если пят-
на являются некротическими, хлороз-
ными или пропитаны водой. Проверьте
наличие физических повреждений и
ран, пораженных участков, язв, галлов,
повреждений беспозвоночными вреди-
телями (например, червоточины, паути-
на, экскременты насекомых).

Осмотр

– ищите мицелий, плодовые

тела, мучнистую росу, ржавчинные гри-

бы, слизевиков и т.д., посмотрите, наблю-

дается ли движение бактерий.

Осмотр под микроскопом

– подго-

товьте препараты на предметных сте-

клах и исследуйте их на наличие гриб-

ных структур.

Анализы

– выделите из лидирующе-

го края, проведите инкубацию, инокуля-

цию, используйте флотационный метод.

Просмотрите информационный

листок по образцу

– применение пе-

стицидов, повреждения, вызванные по-

годными условиями (например, град, за-

морозки, солнечный или ветровой ожог,

принесенная ветром почва или песок).

5. Диагностика

Введение

В этом разделе приводится обзор

ключевых методов, используемых для

выявления и идентификации вредителей

и болезней растений. Существует целый

ряд методов, доступных для специалиста

по диагностике – от визуального иссле-

дования под микроскопом до секвени-

рования ДНК. Дается общее руководство

по процессу исследования и отбора об-

разцов, а также по этапам проведения

диагностики. Подробно описываются

широко используемые методы, и приво-

дится несколько примеров по разным

группам вредных организмов.

5.1 Методы диагностики

В этом разделе дается краткий обзор

методов диагностики, которые можно

использовать для идентификации вред-

ных организмов, а также приводится не-

сколько примеров. Как правило, для лю-

бого конкретного вредного организма

существует целый ряд диагностических

методов, поэтому приводится руковод-

ство по определению наиболее подхо-

дящего метода с учетом инфраструкту-

ры и потенциала кадровых ресурсов.

Решающую роль в данном случае играет

понимание вопроса, на который нужно

дать ответ, уровень достоверности тре-

буемой идентификации, сроки, в рамках

которых вы работаете, стоимость и дру-

гие требования методики, а также коли-

чество образцов, анализ (диагностику)

которых необходимо провести. Выбор

метода – это зачастую компромисс меж-

ду разными факторами, включая стои-

мость, специфичность, чувствительность

и количество образцов.

5.1.1 Традиционный биотест

Как правило, эти анализы занимают

больше времени и являются более тру-

доемкими, чем другие лабораторные

анализы, описанные ниже. Тем не менее,
они все еще очень важны в диагностике;
например, зачастую все еще требуется
проведение анализа вирусов и вирои-
дов на растениях–индикаторах, являю-
щихся их хозяевами, для подтверждения
результата лабораторного анализа. Био-
тесты обычно проводятся в разделенных
на отсеки теплицах, защищенных от про-
никновения насекомых, а в некоторых
климатических условиях потребуются
парники из сетки для выращивания и
содержания растений. Могут потребо-
ваться климатические камеры, способ-
ные обеспечить контроль температуры,
продолжительность освещения и дня
для круглогодичной работы. Выбор рас-
тений-индикаторов для использования
в повседневной диагностике зависит от
типа растений и вредных организмов,
анализ которых проводится. Рекоменду-
ется постоянно поддерживать коллек-
ции референтных материалов.

5.1.2 Морфологическая идентификация

Определение морфологии вредного

организма – это фундаментальная часть
всей фитосанитарной диагностики. Спо-
собность точно и быстро охарактери-
зовать вредные организмы – важна для
понимания значимости выявленного
вредного организма. Морфология – это
сравнение идентифицируемого вредно-
го организма с известными референт-
ными материалами, которое позволяет
интерпретировать наблюдаемые сим-
птомы или свойства для осуществления
идентификации. Часто после такой иден-
тификации проводятся подтверждаю-
щие анализы, которые подтверждают
идентификацию или дают дополнитель-
ные сведения, такие как сведения о кон-
кретном виде. Степень использования
морфологических методов зависит от
направления диагностики. Морфология

может варьироваться от осмотра поло-
вых репродуктивных органов насеко-
мых до изучения грибных структур под
микроскопом и до изучения размера и
цвета колоний бактерий.

5.1.3 Анализ метаболитов (в основном,

при идентификации бактерий)

Большинство бактериальных возбу-

дителей болезней могут быть выделены
и выращены на средах, а затем подвер-
гнуты анализу на состав метаболитов и
свойства, обеспечивающие таксономи-
ческой информацией. Традиционно эти
методы включали в себя последователь-
ность анализов, в основном, анализы
на использование субстрата, которые
опирались на дихотомический ключ, в
результате чего на идентификацию ухо-
дили не дни, а недели. Эти методы также
требовали высокого уровня технической
компетенции для того, чтобы можно
было получить воспроизводимые дан-
ные. Впоследствии были разработаны
альтернативные форматы анализов на
использование субстратов, такие как си-
стема «Biolog» (http://www.biolog.com),
которая позволяет проводить более бы-
струю и надежную идентификацию.

Еще одной коммерчески доступной

системой является система «MIDI» (http://
www.midi-inc.com), которая основана на
идентификации и количественном ана-
лизе жирных кислот клеточных стенок.
Как и в случае с системой «Biolog», иден-
тификация может быть осуществлена
через 48 часов после получения чистой
культуры. Как система «Biolog», так и си-
стема «MIDI» – это коммерческие продук-
ты, и к ним прилагаются обширные базы
данных по видам бактерий. Уровень
таксономической идентификации, полу-
чаемой при использовании этих систем,
– одинаковый. Как правило, как система
«Biolog», так и система «MIDI» позволяют
проводить надежную идентификацию
бактериальных возбудителей болез-
ней растений до уровня вида. Более до-

стоверная и уточненная (т.е. до уровня
патовара) идентификация может быть
осуществлена для некоторых видов по-
средством добавления специфических
профилей метаболитов образцов во вну-
тренние базы данных этих систем.

5.1.4 Серологические методы

Серологические методы основаны на

свойствах иммунных систем млекопита-
ющих и птиц. Когда инородный материал
(называемый «антиген»), такой как ми-
кроорганизм, белок или сложный угле-
вод вводиться в организм животного,
иммунная система животного реагирует,
образуя антитела в сыворотке крови. Эти
антитела связываются исключительно с
антигеном, вызвавшим их образование.

Многие патогены растений можно вы-

явить, используя серологические или им-
мунологические методы. Эта технология
особенно важна для диагностики и иден-
тификации вирусов растений; простота
молекулярной структуры вирусов позво-
ляет получить высокоспецифичную ре-
акцию. Однако такие методы также были
разработаны для бактерий и таких более
сложных организмов, как грибы.

Антитела могут быть поликлональ-

ными или моноклональными. Поли-
клональные антитела называются так,
потому что они состоят из множества
антител с разной специфичностью, ко-
торые присоединяются к нескольким
разным эпитопам (участкам связывания)
антигена. Моноклональные антитела со-
держат многочисленные идентичные
копии только одного антитела, которое
присоединяется к одному специфиче-
скому эпитопу. Из-за этих свойств общее
мнение о моно- и поликлональных анти-
телах такое, что моноклональные тела
обеспечивают большую специфичность,
чем поликлональные антитела. Польза
такого различия, к тому же, зависит от
предполагаемого использования и вред-
ного организма-мишени, а также от того,

5. Диагностика

содержание .. 3 4 5 6 ..