Manuel sur l’élaboration et l’utilisation des spécifications FAO/OMS pour les pesticides (2017)

8.23

Sacs de stockage traités longue durée (LB), suite

243

8.23.4.2

Résistance à la rupture de la couture du dessous

(ISO 13935-

1) (Notes 7 & 13)

La résistance minimale moyenne à la rupture de la couture du
dessous du sac ne doit pas être inférieure à [ ] N.

8.23.5 Stabilité à l’entreposage

8.23.5.1

Stabilité chimique à température élevée

(CIPAC MT 46.3.4)

(Note 10)

Après un stockage à 54

2 °C (Note 11) pendant deux semaines, la

teneur d’ingrédient actif déterminée ne doit pas être inférieure à 95
pour cent, par rapport à la teneur moyenne déterminée trouvée avant
le stockage (Note 12) et le produit doit continuer à se conformer aux
clauses pour:

- le ratio des isomères (8.22.2.3), le cas échéant,
- l’indice de résistance au lavage (8.22.2.4),
- les impuretés pertinentes (8.22.3.1), le cas échéant.

8.23.5.2

Stabilité physique des sacs à température élevée

(MT 46.3)

(Note 13)

Après un stockage à 54

2 °C pendant deux semaines, le produit

doit continuer à se conformer aux clauses pour les propriétés
physiques:

- la moyenne de résistance à la rupture et de l’allongement à la
rupture

(8.22.4.1),

- la résistance à la rupture de la couture du dessous

(8.22.4.2),

8.23.6

Résistance aux UV

(ISO 4892-3:2008, Tableau 4, Méthode A, cycle n°1)

(Note 14), le cas échéant

Les sacs doivent conserver au moins % d’ingrédient actif après une exposition aux
rayons UV et aux intempéries pendant 144 h, et la résistance à la rupture de la
couture du dessous ne doit pas être inférieure à 50 pour cent de la mesure
originale, sans exposition aux UV.

________________________

Note 1

La spécification peut s’appliquer aux sacs en vrac ou aux sac composés qui peuvent être
de capacités différentes et composés de bandes tissées ou non tissées. Les sacs doivent
être faits en polymère vierge, par ex. polypropylène ou PEHD et peuvent être blancs ou
de couleur. Ces sacs sont censés durer au moins deux ans dans l’entrepôt.

Note 2

De petites longueurs occasionnelles de fils lâches présentes dans les sacs composés ne
sont pas considérées comme une substance étrangère.

Note 3

Les sacs de stockage traités avec un pesticide de longue durée sont censés conserver
leur activité biologique et leur résistance à la traction pendant leur durée de vie et au
cours d’une exposition aux UV pendant un nombre spécifié d’heures lorsqu’ils sont testés
selon la Note 14.

Note 4

L’inflammabilité du produit ne fait pas partie de la spécification mais elle doit être mesurée
par le fabricant, selon la 16 CFR Part 1610, et le résultat doit figurer sur l’emballage.

8.23

Sacs de stockage traités longue durée (LB)

244

Note 5

Les méthodes d’identification et de détermination de la teneur en principe actif doivent
être celles de la CIPAC, l’AOAC ou équivalentes.

Si les méthodes n’ont pas encore été

publiées, alors tous les détails, avec les données appropriées de la validation de la
méthode, doivent être soumis à la FAO/OMS par l’auteur de la proposition. Le plan
d’échantillonnage doit prendre en considération la variation à l’intérieur du produit. Pour
la teneur en principe actif, l’homogénéisation de l’échantillon avant de prendre des
portions avant et après le stockage, et la conservation de l’échantillon dans une bouteille
à capsule sont recommandées.

Note 6

Un plan d’échantillonnage recommandé est présenté dans la Figure 1. Les échantillons
doivent être suffisamment importants pour mener tous les tests nécessaires et être
représentatifs du tissu. Sauf lorsque les coutures doivent être testées, ne pas tester le
produit à moins de 10 cm des coutures ou des lisières.

Utiliser des ciseaux pointus, ou l’équivalent, pour minimiser les dommages aux fibres et
au tissu et éviter ainsi tout biais consécutif dans les résultats de certains tests. Rouler les
bandes ou les carrés et les placer dans des feuilles d’aluminium neuves, propres et
étiquetées avant l’analyse. Les échantillons doivent être conservés au frais, en évitant
les sources de chaleur (dont la lumière directe du soleil) ou au congélateur, et
analysés/testés dans un délai minimal. Des portions représentatives (sous-échantillons)
pour les essais doivent être prélevés comme décrit dans chaque méthode d’essai.

Note 7

Les méthodes de détermination du ratio des isomères doivent être validées par les pairs.

Note 8

La méthode CIPAC MT 195 pour la détermination de l’indice de résistance au lavage des
LN a été adoptée comme méthode CIPAC à part entière en 2013, mais la méthode n’a
pas encore été publiée dans un manuel. En attendant la publication du manuel, des
copies de la méthode peuvent être obtenues par le biais du site web de la CIPAC,

http://www.cipac.org/index.php/methods-publications/pre-published-methods

. La

méthode CIPAC a été élaborée pour les formulations des LN, mais elle est considérée
comme applicable aux formulations à libération lente basées sur des textiles similaires
ainsi qu’aux sacs de stockage.

Note 9

Les méthodes de détermination des impuretés pertinentes doivent être au minimum
validées par les pairs. Si elles n’ont pas été publiées, tous les détails de la méthode et
les données de validation par les pairs doivent être fournis.

Note 10 La méthode CIPAC MT 46.3.4 pour le stockage accéléré des LN a été adoptée comme

méthode CIPAC à part entière en 2015, mais la méthode n’a pas encore été publiée dans
un manuel. En attendant la publication du manuel, des copies de la méthode peuvent
être obtenues par le biais du site web de la CIPAC,

http://www.cipac.org/index.php/methods-publications/pre-published-methods

. La

Note 11 À moins que d’autres températures et durées soient spécifiées. Se référer à la Section

4.6.2 pour les conditions de stockage alternatives.

Note 12 Des échantillons du produit prélevés avant et après le test de la stabilité au stockage

peuvent être analysés parallèlement (à savoir après le stockage) afin de réduire les
erreurs d’analyse. Le fabricant doit démontrer que la conception du sous-échantillonnage
fournit des portions analytiques homogénéisées pour le test de stabilité avant et après le
stockage.

Note 13 La méthode CIPAC MT 46.3.2 est utilisée lorsque le sac entier est stocké à 54

2 °C

pendant 2 semaines afin de tester les propriétés physiques et des échantillons
appropriés sont prélevés après le stockage du sac.

Note 14 Le test des rayons UV et des intempéries doit être mené selon la procédure donnée en

ISO 4892-3:2006, Tableau 4, Méthode A, Cycle n°1.

247

DIRECTIVES RELATIVES AUX SPÉCIFICATIONS DES PESTICIDES

BACTÉRIENS

Note: les directives relatives aux spécifications pour les pesticides bactériens (bactéries,
champignons, virus, levures et autre) font actuellement (début 2016) l’objet d’une révision
majeure et une nouvelle version est censée être disponible au téléchargement depuis
les sites web respectifs de la FAO et de l’OMS d’ici fin 2016. En attendant, les directives
relatives aux spécifications de ces catégories demeurent valables jusqu’à leur
remplacement par la nouvelle version.

PESTICIDES BACTÉRIENS

PRÉMÉLANGES

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

FORMULATIONS SOLIDES POUR DISPERSION

9.11 Larvicides bactériens en poudres mouillables (WP)

9.12 Larvicides bactériens en granulés dispersables dans l'eau

(WG)

9.13 Larvicides bactériens en comprimés dispersables dans l'eau

(WT)

FORMULATIONS LIQUIDES POUR DISPERSION

9.21 Larvicides bactériens en concentrés fluidifiables (SC)

PESTICIDES VIRAUX

PESTICIDES FONGICIDES

9.1.

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

248

DIRECTIVES RELATIVES AUX SPÉCIFICATIONS DES PESTICIDES
BACTÉRIENS

Introduction

S’il y a lieu, les directives, clauses et limites à adopter pour les spécifications des
larvicides bactériens sont similaires à celles identifiées dans les Sections 4 à 8 de
ce Manuel. La justification des exigences et objectifs qui diffèrent est décrite ci-
dessous. En plus de ces différences, lorsque l’utilisation de formulations de Bti est
proposée dans de l’eau potable, la couleur, le goût et l’odeur doivent être inclus
dans les spécifications. La teneur maximale en contaminants microbiens doit
encore être déterminée, en cas d’utilisation pour de l’eau potable ou toute autre
application de santé publique.

Description du produit. Le principe actif est décrit en termes de genre, espèce et
souche de la bactérie. La description doit également inclure des informations sur
la couleur, l’odeur et le goût si le produit est prévu pour une application à l’eau
potable.

Identité du principe actif. Le but est de permettre l’identification de l’espèce et de
la souche de la bactérie et d’identifier la collection de cultures de réputation
internationale d’où peut être obtenu un matériau de référence étalon aux fins de
vérification de la conformité aux spécifications.

Teneur en principe actif. Le but est d’assurer que la teneur en principe actif est
décrite sans équivoque et une méthode de dosage de l’activité biologique (toxicité
sur les moustiques cibles) est fournie à cet effet.

Impuretés, microbiennes. Le but est de limiter la teneur en contaminants
microbiens qui pourraient autrement accroître les risques associés à la
manipulation ou nuire à l’efficacité du matériau. À la différence de la plupart des
autres impuretés, les impuretés microbiennes sont introduites facilement lors de
l’échantillonnage et leur nombre peut augmenter avec le temps. L’échantillonnage
et les méthodes des tests doivent être menés en utilisant des installations conçues
spécialement et du personnel qualifié. La pertinence des impuretés microbiennes,
et de leurs limites, ne peut pas être déterminée à l’aide de l’approche décrite dans
la Section 3.1.D alors, à présent, elles sont déterminées au cas par cas par
l’OMS/PCS.

Impuretés, chimiques. Cette clause est prévue spécifiquement pour limiter la
teneur en bêta-exotoxine et, par conséquent, la possibilité d’effets néfastes sur les
organismes non cibles.

Stabilité au stockage. Les pesticides microbiens ne se prêtent pas nécessairement
au test MT 46.3 de la CIPAC et, par conséquence, cette clause est traitée au cas
par cas.

9.1.

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

249

9.1

PRÉMÉLANGES DE LARVICIDES BACTÉRIENS (TK)

Note pour la préparation des projets de spécifications. Ne pas omettre de clauses ou
insérer des clauses supplémentaires, ni insérer de limites qui soient plus permissives que
celles données dans les lignes directrices, sans se référer à la Section 4. À partir des
« Notes » fournies à la fin de ces lignes directrices, intégrer seulement celles qui sont
applicables à la spécification particulière.

…… [Genre, espèce, sous-espèce et souche de la bactérie]

PRÉMÉLANGE

[numéro CIPAC]/TK (mois & année de publication)

9.1.1 Description (Note 1)

Le produit se compose de …… [

genre, espèce, sous-espèce

et souche de la

bactérie] ainsi que des sous-produits connexes de la voie de fabrication et doit être
sous la forme de [description physique], exempt de toute matière étrangère visible
et d’agents modificateurs ajoutés, à l’exception des stabilisateurs (conservateurs)
et des agents de fluidité (Note 2), le cas échéant.

9.1.2 Principe actif (Note 3)

9.1.2.1

Identité

Le principe actif doit répondre à un test d'identité et, lorsqu’il demeure
un doute sur l'identité, il doit répondre à au moins un test
supplémentaire.

9.1.2.2

Teneur en principe actif (activité biologique)

La teneur en …… [

Genre, espèce, sous-espèce

et souche de la

bactérie] doit être déclarée en Unités Toxiques Internationales
(UTI/mg produit), et une fois déterminée par la méthode décrite dans
la Note 4, l’activité biologique moyenne ne doit pas être inférieure à
90 pour cent de la teneur minimale déclarée.

9.1.3 Impuretés pertinentes et contaminants

9.1.3.1

Contaminants microbiens et impuretés

(Note 5.)

9.1.3.2

Impuretés chimiques

Le produit doit être exempt de bêta-exotoxine lorsqu’il est soumis à
l’essai de toxicité sur les larves de mouches (Notes 6 et 7) ou à une
méthode CLHP équivalente.

9.1.3.3

Eau

(méthode d’essai M7R1 de l’OMS)

Maximum … g/kg (Note 8).

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

250

9.1.4 Propriétés physiques

9.1.4.1

Intervalle de pH

(CIPAC MT 75.3), le cas échéant

Intervalle de pH … à …

9.1.5 Stabilité au stockage

9.1.5.1

Stabilité à température élevée

(Méthode à élaborer – Note 9.)

________________________

Note 1 Le pré-mélange est l’organisme axénique unique (« pur ») avec toutes les composantes

biologiques pertinentes qui lui sont associées, par ex. les toxines, les parties cellulaires
et les spores. La description doit inclure des informations sur toute modification génétique
de la souche utilisée.

Note 2

Un agent de fluidité peut être requis pour réduire l’électricité statique et l’agglomération
des particules.

Note 3

Des informations doivent être fournies sur la source et les caractéristiques d’identification
du matériel de référence pouvant être obtenu auprès d’une institution reconnue au plan
international.

Note 4

Détermination de l’activité biologique (toxicité) du

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

et des produits

B. sphaericus

Principes

L’activité biologique est testée en comparant la mortalité des larves de moustiques

Actuellement il y a deux poudres de référence internationalement reconnues qui

permettent de déterminer l’activité biologique à l’aide de bio-essais des préparations
bactériennes sur les larves de moustiques, lorsqu’elles sont utilisées en conjonction avec
les méthodes décrites ci-dessous.

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

(

Bti

) est comparée à celle d’une poudre de référence lyophilisée (IPS82,

souche 1884) de cette espèce bactérienne, en utilisant des larves de

Aedes aegypti

(souche Bora Bora) au début du quatrième stade. La toxicité de IPS82 a une toxicité
attribuée arbitrairement de 15 000 UTI/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus sphaericus

(

Bsph

) est

déterminée par rapport à une poudre de référence lyophilisée (SPH88, souche 2362) de
cette espèce bactérienne en utilisant des larves de

Culex pipiens

(souche Montpellier)

au début du quatrième stade. La toxicité de SPH88 a une toxicité attribuée arbitrairement
de 1 700 ITU/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

La toxicité de toutes les préparations bactériennes basées sur les

Bti

Bsph

peut

être déterminée par rapport aux poudres étalons ci-dessus. La toxicité (UTI/mg) des
produits testés est déterminée selon la formule suivante:

titre (ITU/mg) du produit testé =

titre standard (ITU/mg) x LC

(mg/l) standard

(mg/l) inconnue "X"

L’utilisation de poudres

larvicides bactériennes de référence alternatives et/ou de

souches alternatives de moustiques dans ce test doit être abordée avec prudence car il
est inévitable qu’il en sera obtenu des résultats différents. Ces alternatives doivent être
soumises à un étalonnage croisé soigné par rapport aux poudres et/ou souches de
référence identifiées ci-dessus. Dans l’idéal, cet étalonnage croisé doit être mené par un
groupe de laboratoires experts indépendants. Les poudres/souches, et les données de
l’étalonnage croisé qui les appuieront, doivent être mises à la disposition de quiconque
souhaite utiliser, ou vérifier, le test avec les poudres/souches alternatives.

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK), suite

251

Méthode

Appareils et réactifs

Agitateur ou homogénéisateur à entraînement supérieur
Bain de glace (conteneur de glace pilée).

Balance analytique (précise à ± 0.1 mg).

Balance à plateau supérieur (précise à ± 10 mg), de préférence avec fonction de tare.

Eau désionisée.

Agent de mouillage (par ex. Tween 80).

Verre borosilicaté ou béchers en plastiques de 200 ml.

Bouteille en verre transparent de 500 ml à large ouverture et bouchon à vis.

Bouteilles en verre transparent de 100 ml à bouchon à vis.

Micropipette.

Pipette de 10 ml.

Tubes en plastique de 12 ml avec bouchons ou capuchons.
Gobelets en plastique ou en papier ciré de 200 ml.

(i) Préparation des suspensions étalons de référence pour l’étalonnage du titrage

biologique

Avant de préparer la suspension, vérifier que l’agitation/mélange de l’agent

mouillant/eau, décrit dans le paragraphe suivant, n’entraîne pas la formation de mousse.
Si c’est le cas, diluer (par ex. 1:10) l’agent mouillant avant utilisation.

Peser avec précision environ 50 mg (à 0,1 mg près) de la poudre étalon de

référence et la transférer dans un bécher de 200 ml avec 100 ml d’eau désionisée (elle
peut être transférée directement dans la bouteille de 500 ml si l’ouverture est assez large
pour accepter la tête de l’agitateur/mélangeur). Laisser le mélange reposer 30 mn  et
ajouter une petite goutte  (environ 0,2 mg) d’agent mouillant. Placer le bécher dans le
bain de glace et agiter ou mélanger le mélange pendant deux minutes. Vérifier
visuellement la présence éventuelle de grosses particules restantes et reprendre
l’agitation ou le mélange s’il y en a. Peser ou tarer la bouteille de 500 ml et y transférer
la  suspension/solution,  rincer soigneusement et minutieusement le bécher et
l’agitateur/mélangeur.  Ajouter encore de l’eau désionisée pour parvenir à un poids du
contenu de 500 g (500 ml), fermer la bouteille et secouer vigoureusement pour mélanger
le contenu. Confirmer, par examen microscopique d’une petite aliquote, qu’il ne demeure
aucun agrégat de spores et de cristaux. S’il y en a encore, le contenu doit de nouveau
être agité/mélangé dans le bain de glace. Cette suspension/solution primaire contient 1
mg/10 ml et doit être secouée vigoureusement immédiatement avant d’enlever les
aliquotes.

Transférer 10 ml d’aliquotes de la solution/suspension primaire dans des tubes

Pour préparer une « solution mère », peser ou tarer une bouteille de 100 ml.

Transférer une des aliquotes de 10 ml dans la bouteille de 100 ml, rincer soigneusement
au moins deux fois avec de l’eau désionisée, et remplir jusqu’à un total de 100 g. Secouer
le mélange vigoureusement (ou utiliser le mélangeur) pour produire une suspension
homogène. Les aliquotes congelées doivent être homogénéisées soigneusement avant
utilisation car les particules s’agglomèrent durant la congélation. La « solution mère »
contient 10 mg/l.

À partir de la « solution mère », les dilutions suivantes sont préparées directement

dans des gobelets en plastique remplis (en pesant) avec 150 ml d’eau désionisée. Dans
chaque gobelet, 25 larves au début du stade L4 de

Aedes aegypti

ou de

Culex pipiens

(en fonction des espèces bactériennes à tester:

Aedes

pour

Bti

et larves de

Culex

pour

B. sphaericus

) sont ajoutées d’abord au moyen d’une pipette Pasteur, avant l’ajout des

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

252

ajoutés dans des gobelets distincts et les solutions mélangées pour produire des
concentrations finales de 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,008 et 0,005 mg/l, respectivement, de
la poudre étalon de référence. Quatre gobelets identiques sont utilisés pour chaque
concentration et un comme témoin, qui contient seulement 150 ml d’eau désionisée.

(ii) Préparation des suspensions du produit à tester

Pour le titrage biologique des préparations de produits secs (TK, WP, WG, WT) de

toxicité inconnue, un homogénat initial est fait de la même manière que celle décrite pour
la poudre étalon de référence ci-dessus sauf que les déterminations répétées doivent
être faites sur des dilutions préparées en pesant des portions d’essai séparées du
produit. Ce sont donc quatre suspensions/solutions primaires répétées qui doivent être
préparées. Pour le dosage d’une formulation liquide (SC), après une bonne agitation,
100 mg sont pesés au lieu de 50 mg (la « solution mère » correspondant alors à 20 mg/l).
Les gobelets et les larves sont préparés comme décrit ci-dessus et des dilutions
comparables sont préparées en ce qui concerne la norme de référence.

Pour les produits à la toxicité inconnue, effectuer des titrages biologiques de

détermination de la gamme, à l’aide d’une large gamme de concentrations du produit à
l’essai pour déterminer sa toxicité approximative. Les résultats sont ensuite utilisés pour
déterminer une plage plus étroite de concentrations pour un titrage biologique plus
précis.

(iii) Détermination de la toxicité

Aucune nourriture n’est ajoutée pour les larve de

Aedes

. Pour le titrage biologique

des

Culex

, un extrait de levure finement moulue (1,5 mg) est ajouté à l’eau et mélangé

pour produire une concentration de 10 mg/l. Tous les tests doivent être menés à 28 ± 2
°C, avec un cycle 12 heures de lumière/12 heures d’obscurité. Pour éviter les effets
néfastes de l’évaporation de l’eau en cas de faible humidité, l’humidité relative doit être
maintenue à 50 ± 15%, si possible.

Chaque série de de titrages biologiques doit de préférence impliquer 6

concentrations x 4 répliques x 25 larves pour l’étalon de référence et l’inconnu et 100
larves pour le témoin. Le but est d’identifier une gamme de concentrations qui donnent
une mortalité entre 5 et 95% (car 100 larves sont utilisées). Les données donnant 0 ou
100% de mortalité sont ignorées pour le calcul de la CL

. Pour préparer une courbe

dose-réponse valide, seules les concentrations donnant des valeurs entre 95% et 5% de
mortalité doivent être utilisées. Au moins deux points de dilution doivent être supérieurs
à la CL

et deux inférieurs, pour garantir la validité de la valeur. La sensibilité de la

colonie d’insectes peut exiger qu’une série de six dilutions légèrement différentes soit
utilisée.

La mortalité est déterminée à 24 et 48 h en comptant le nombre de larves vivantes

restantes. En cas de nymphose, les pupes doivent être enlevées et leur nombre exclu
du calcul. Si plus de cinq pour cent des larves se nymphosent, le test est invalidé car les
larves n’ingèrent rien avant la nymphaison et trop de larves ont survécu uniquement
parce qu’elles étaient trop âgées. Du fait de l’action destructrice très rapide du

Bti,

il n’y

a généralement pas de différence entre la mortalité à 24 heures et à 48 heures. Dans ce
cas, le compte à 48 heures confirme la lecture à 24 heures et offre une vérification de
l’influence possible de facteurs autres que les composantes du

Bti

. La mortalité est

enregistrée à 48 h pour les préparations du

Bsph

, en raison de son taux d’action plus

lent.

Si la mortalité du groupe témoin dépasse 5%, les mortalités des groupes traités

doivent être traitées selon la formule d’Abbott [Abbott, W. S. (1925). Méthode pour
calculer l’efficacité d’un insecticide.

Journal of Economic Entomology

, 265-267]:

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK), suite

253

X – Y

pourcentage (%) témoin

————

X x 100

où

X = % de survie dans l’échantillon témoin,

Y = % de survie dans l’échantillon traité.

Les tests avec une mortalité de l’échantillon témoin supérieure à 10%, ou une

nymphaison supérieure à 5%, doivent être écartés. Des lignes de régression mortalité-
concentration peuvent être dessinées sur du papier gausso-logarithmique mais c’est
plutôt subjectif. Il est préférable d’utiliser un programme statistique, comme SAS, qui
intègre une analyse Log Probit. Avec un tel programme statistique, la formule d’Abbott
n’est pas nécessaire car la correction est effectuée automatiquement par le programme.
La toxicité d’une préparation inconnue est déterminée par l’estimation et la comparaison
des CL

du produit testé et des préparations étalons de référence, à l’aide des formules

décrites ci-dessus. La toxicité des préparations

Bti

est définie par le compte à 24 h après

le début du test, tandis que la toxicité du

Bsph

est définie par le compte après 48 h

d’exposition larvaire.

Pour une précision accrue, les titrages biologiques doivent être répétés sur au

moins trois jours différents, en même temps que le titrage de l’étalon de référence, et
l’écart type des moyennes doit être calculé. Une série de tests est valide si l’écart type
relatif (ETR ou coefficient de variation, CV) est inférieur à 25 pour cent.

(iv) Production des larves des tests

Les larves L4 sont représentatives de la sensibilité totale de la population cible et

pratiques à gérer. Il est très important d’utiliser une population homogène du début du
quatrième stade, qui est obtenue dans les cinq jours suivant l’éclosion en utilisant les
méthodes d’élevage normalisées.

Pour les

Aedes

aegypti,

les œufs sont pondus dans un gobelet recouvert d’un

papier filtre et rempli au tiers d’eau désionisée. Le papier est séché à température
ambiante et conservé plusieurs mois en le stockant dans un sac plastique scellé à
température ambiante. Lorsque des larves sont nécessaires, le papier est immergé dans
de l’eau déchlorée. Pour synchroniser l’éclosion, ajouter l’alimentation des larves dans
l’eau 24 heures avant d’ajouter les œufs. La croissance bactériologique va désoxygéner
l’eau et déclencher l’éclosion des œufs.  Cela pousse généralement le premier stade
larvaire à éclore dans les 12 heures. Ces larves sont ensuite transférées dans un
conteneur (25 x 25 cm de profondeur) contenant 2 litres d’eau déchlorée pour obtenir
une population de  500  à 700 larves  par  conteneur.  L’alimentation des larves peut
consister en des flacons de protéines comme ceux utilisés pour les poissons d’aquarium,
ou des biscuits pour chat en poudre, et les conteneurs sont conservés à 25 ± 2 °C. Il est
important  que la quantité d’aliments reste faible pour éviter une forte croissance
bactérienne qui tue les larves. Plusieurs séances d’alimentation à un ou deux jours
d’intervalle et une observation quotidienne est ce qu’il y a de mieux. Si l’eau devient
trouble, remplacer toute l’eau en filtrant les larves et en les transférant dans un récipient
propre avec de l’eau propre et de l’alimentation. Cinq à sept jours plus tard, on devrait
obtenir une population homogène au début du quatrième stade larvaire (âgés de 5 jours
et longs de 4 à 5 mm).

Pour les larves de

Culex pipiens

, il est plus difficile d’obtenir une population

homogène du quatrième  stade larvaire. Tout d’abord, un grand nombre de nacelles
d’œufs doivent être pondues et collectées le même jour. Ils peuvent être stockés à 15-
18 °C afin d’accumuler plus d’œufs pour l’éclosion. Les premiers stades larvaires sont
fragiles et ne doivent donc pas être manipulés.  Le développement vers le deuxième
stade larvaire prend généralement 3 à 4 jours à  25  ±  2  °C  après la ponte des  œufs.
Lorsqu’ils sont prêts, les deuxièmes stades larvaires sont regroupés dans un bac avec
trois litres d’eau déchlorée de 4 à 6 cm de profondeur –  800 à 1 000 larves par bac.
L’alimentation (extrait de levure et biscuits pour chiens ou chats) est fournie selon les
besoins. Les quatrièmes stades larvaires précoces convenant aux tests sont
généralement obtenus au bout de sept jours, même si parfois il faut huit ou neuf jours.

Note 5

Les teneurs maximales acceptables de contaminants microbiens n’ont pas encore été
déterminées.

9.1

Prémélanges de larvicides bactériens (TK)

254

Note 6

Essai de toxicité sur les larves de mouches: Bond R. P. M.,

et al

. The thermostable

exotoxin of

Bacillus thuringiensis

. In: Burges H. D. et Hussey N. W., eds. Microbial control

of insects and mites. Academic Press, London, 1971.

Note 7

Aucun test n’est requis si le fabricant a montré que la souche de

Bacillus thuringiensis

n’est pas capable de produire de bêta exotoxine. Aucun test n’est requis pour les

Bacillus

sphaericus

, car cette espèce n’est pas connue pour produire des exotoxines.

Note 8

Généralement, la teneur en eau ne doit pas dépasser 5% afin d’empêcher la dégradation
prématurée du produit.

Note 9

Les larvicides microbiens doivent être entreposés à des températures fraîches mais des
tests accélérés de stabilité au stockage seraient extrêmement utiles pour des contrôles
rapides de la stabilité au stockage des produits. Pour l’instant, il n’existe pas de méthode
normalisée. En l’absence de test accéléré de la stabilité au stockage, il est recommandé
que les normes minimales suivantes soient respectées:

a) pas plus de 10% de perte d’activité biologique en dessous de la valeur d’activité

indiquée sur l’étiquette lorsqu’ils sont stockés à 5 ºC pendant 2 ans; et

b) pas plus de 10% de perte d’activité biologique en dessous de la valeur d’activité

indiquée sur l’étiquette lorsqu’ils sont stockés entre 20 et 25 ºC pendant 1 an.

Ces tests de la stabilité au stockage doivent être effectués à l’aide d’échantillons de
produits représentatifs et l’activité biologique doit être évaluée à l’aide des méthodes
d’essai décrites dans la Note 4.

Les résultats du test de l’activité biologique peuvent varier jusqu’à ± 25% de la moyenne

et cela doit être pris en compte en déterminant la perte d’activité. Si les données des
tests sur un et deux ans ne sont pas disponibles au moment de la rédaction d’une
spécification, une estimation de la stabilité au stockage peut être acceptable, en
attendant la fin des tests.

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP)

255

9.11

LARVICIDES BACTÉRIENS EN POUDRES MOUILLABLES (WP)

Note pour la préparation des projets de spécifications. Ne pas omettre de clauses ou
insérer des clauses supplémentaires, ni insérer de limites qui soient plus permissives que
celles données dans les lignes directrices, sans fournir de justification. À partir des
« Notes » fournies à la fin de ces lignes directrices, intégrer seulement celles qui sont
applicables à la spécification particulière.

…… [Genre, espèce, sous-espèce et souche de la bactérie]

POUDRE MOUILLABLE

[numéro CIPAC]/WP (mois & année de publication)

9.11.1 Description (Note 1)

Le produit se compose d’un mélange homogène de …… [

genre, espèce, sous-

espèce

et souche de la bactérie] (Note 2) conforme aux exigences de la

spécification de l’OMS ……, ainsi que des charges et de tout autre agent de
formulation nécessaire. La formulation doit être sèche, fluide et exempte de toute
matière étrangère visible et de grumeaux durs. La formulation doit être …… en
couleur.

9.11.2 Principe actif (Note 3)

9.11.2.1

Identité

Le principe actif doit répondre à un test d'identité et, lorsqu’il demeure
un doute sur l'identité, il doit répondre à au moins un test
supplémentaire.

9.11.2.2

Teneur en principe actif (activité biologique)

La teneur en …… [

Genre, espèce, sous-espèce

et souche de la

9.11.3 Impuretés pertinentes et contaminants

9.11.3.1

Contaminants microbiens

(Note 5)

9.11.3.2

Impuretés chimiques

Le produit doit être exempt de bêta-exotoxine lorsqu’il est soumis à
l’essai de toxicité sur les larves de mouches (Notes 6 et 7) ou à une
méthode CLHP équivalente.

9.11.3.3

Eau

(CIPAC MT 75.3)

Maximum …… g/kg (Note 8).

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP)

256

9.11.4 Propriétés physiques

9.11.4.1

Intervalle de pH

(CIPAC MT 75.3), le cas échéant

Intervalle de pH …… à ……

9.11.4.2

Mousse persistante

(CIPAC MT 47.3) (Note 9)

Maximum: …… ml après une minute.

9.11.4.3

Test du tamis humide

(CIPAC MT 185)

Maximum: ……% de la formulation doit être retenu sur un tamis
d’essai de ...... µm.

9.11.4.4

Suspensibilité

(CIPAC MT 184) (Note 10)

Un minimum de ……% du produit doit être en suspension après 30
mn dans de l’eau-étalon D CIPAC à 30 ± 2

C (Note 11).

9.11.4.5

Mouillabilité

(CIPAC MT 53.3) (Note 12)

La formulation doit être complètement mouillée en …… mn.

9.11.5 Stabilité au stockage

9.11.5.1

Stabilité à température élevée

(Méthode à élaborer – Note 13)

________________________

Note 1

En plus des caractéristiques décrites dans la clause, l’odeur et le goût peuvent également
être des critères importants d’acceptabilité du produit lorsque le produit est destiné à être
appliqué dans l’approvisionnement d’eau potable. Il n’y a pas de tests objectifs ou
concordants pour déterminer l’acceptabilité de ces caractéristiques. Si l’odeur et le goût
doivent être vérifiés, il est recommandé que, à cet effet, le produit soit dilué au taux le
plus élevé d’utilisation.

Note 2

L’organisme unique axénique (« pur ») avec toutes les composantes biologiques
pertinentes qui lui sont associées, par ex. les toxines, les parties cellulaires et les spores.
La description doit inclure des informations sur toute modification génétique de la souche
utilisée.

Note 3

Note 4

Détermination de l’activité biologique (toxicité) du

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

et des produits

B. sphaericus

Principes

L’activité biologique est testée en comparant la mortalité des larves de moustiques

Actuellement il y a deux poudres de référence internationalement reconnues qui

permettent de déterminer l’activité biologique à l’aide de titrages biologiques des
préparations bactériennes sur les larves de moustiques, lorsqu’elles sont utilisées en
conjonction avec les méthodes décrites ci-dessous.

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

(

Bti

) est comparée à celle d’une poudre de référence lyophilisée (IPS82,

souche 1884) de cette espèce bactérienne, en utilisant des larves de

Aedes aegypti

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP), suite

257

(souche Bora Bora) au début du quatrième stade. La toxicité de IPS82 a une toxicité
attribuée arbitrairement de 15 000 UTI/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus sphaericus

(

Bsph

) est

déterminée par rapport à une poudre de référence lyophilisée (SPH88, souche 2362) de
cette espèce bactérienne en utilisant des larves de

Culex pipiens pipiens

(souche

Montpellier) au début du quatrième stade. La toxicité de SPH88 a une toxicité attribuée
arbitrairement de 1 700 ITU/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

La toxicité de toutes les préparations bactériennes basées sur les

Bti

Bsph

peut

être déterminée par rapport aux poudres étalons ci-dessus. La toxicité (UTI/mg) des
produits testés est déterminée selon la formule suivante:

titre (ITU/mg) du produit testé = titre standard (ITU/mg) x CL

(mg/l) standard

(mg/l) inconnue "X"

L’utilisation de poudres larvicides bactériennes de référence alternatives et/ou de

Méthode

Appareils et réactifs

homogénéisateur à entraînement supérieur ou agitateur
Bain de glace (conteneur de glace pilée).

Balance analytique (précise à ± 0.1 mg).

Balance à plateau supérieur (précise à ± 10 mg), de préférence avec fonction de tare.

Eau désionisée.

Agent de mouillage (par ex. Tween 80).

Verre borosilicaté ou béchers en plastiques de 200 ml.

Bouteille en verre transparent de 500 ml à large ouverture et bouchon à vis.

Bouteilles en verre transparent de 100 ml à bouchon à vis.

Micropipette.

Pipette de 10 ml.
Tubes en plastique de 12 ml avec bouchons ou capuchons.
Gobelets en plastique ou en papier ciré de 200 ml.

(i) Préparation des suspensions étalons de référence pour l’étalonnage du titrage

biologique

Avant de préparer la suspension, vérifier que l’agitation/mélange du mélange agent

mouillant/eau, décrit dans le paragraphe suivant, n’entraîne pas la formation de mousse.
Si c’est le cas, diluer (par ex. 1:10) l’agent mouillant avant utilisation.

Peser avec précision environ 30 mg (à 0,1 mg près) de la poudre étalon de

référence et la transférer dans un bécher de 200 ml avec 100 ml d’eau désionisée (elle
peut être transférée directement dans la bouteille de 500 ml si l’ouverture est assez large
pour accepter la tête de l’agitateur/mélangeur). Laisser le mélange reposer 30 mn et
ajouter une petite goutte (environ 0,2 mg) d’agent mouillant. Placer le bécher dans le
bain de glace et agiter ou mélanger le mélange pendant deux minutes. Vérifier
visuellement la présence éventuelle de grosses particules restantes et reprendre
l’agitation ou le mélange s’il y en a. Peser ou tarer la bouteille de 500 ml et y transférer
la suspension/solution, rincer soigneusement et minutieusement le bécher et
l’agitateur/mélangeur. Ajouter encore de l’eau désionisée pour parvenir à un poids du
contenu de 500 g (500 ml), fermer la bouteille et secouer vigoureusement pour mélanger
le contenu. Confirmer, par examen microscopique d’une petite aliquote, qu’il ne demeure
aucun agrégat de spores et de cristaux. S’il y en a encore, le contenu doit de nouveau
être agité/mélangé dans le bain de glace. Cette suspension/solution primaire contient 1
mg/10 ml et doit être secouée vigoureusement immédiatement avant d’enlever les
aliquotes.

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP)

258

Transférer 10 ml d’aliquotes de la solution/suspension primaire dans des tubes

Pour préparer une « solution mère », peser ou tarer une bouteille de 100 ml.

Transférer une des aliquotes de 10 ml dans la bouteille de 100 ml, rincer soigneusement
au moins deux fois avec de l’eau désionisée, et remplir jusqu’à un total de 100 g. Secouer
le mélanger vigoureusement (ou utiliser le mélangeur) pour produire une suspension
homogène. Les aliquotes congelées doivent être homogénéisées soigneusement avant
utilisation car les particules s’agglomèrent durant la congélation. La « solution mère »
contient 10 mg/l.

À partir de la « solution mère », les dilutions suivantes sont préparées directement

dans des gobelets en plastique remplis (en pesant) avec 150 ml d’eau désionisée. Dans
chaque gobelet, 25 larves au début du stade L4 de

Aedes aegypti

ou de

Culex pipiens

(en fonction des espèces bactériennes à tester:

Aedes

pour

Bti

et larves de

Culex

pour

B. sphaericus

) sont ajoutées d’abord au moyen d’une pipette Pasteur, avant l’ajout des

suspensions bactériennes. Le volume d’eau ajouté avec les larves est enlevé du gobelet
(en pesant) et jeté, pour éviter de modifier le volume dans le gobelet. À l’aide de
micropipettes, 600 µl, 450 µl, 300 µl, 150 µl, 120 µl et 75 µl de « solution mère » sont
ajoutés dans des gobelets distincts et les solutions mélangées pour produire des
concentrations finales de 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,008 et 0,005 mg/l, respectivement, de
la poudre étalon de référence. Quatre gobelets identiques sont utilisés pour chaque
concentration et un comme témoin, qui contient seulement 150 ml d’eau désionisée.

(ii) Préparation des suspensions du produit à tester

Pour le titrage biologique des préparations de produits secs (TK, WP, WG, WT) de

Pour les produits à la toxicité inconnue, effectuer des titrages biologiques de

(iii) Détermination de la toxicité

Aucune nourriture n’est ajoutée pour les larve de

Aedes

. Pour le titrage biologique

des

Culex

, un extrait de levure finement moulue (1,5 mg) est ajouté à l’eau et mélangé

Chaque série de titrages biologiques doit de préférence impliquer 6 concentrations

x 4 répliques x 25 larves pour l’étalon de référence et l’inconnu et 100 larves pour le
témoin. Le but est d’identifier une gamme de concentrations qui donnent une mortalité
entre 5 et 95% (car 100 larves sont utilisées). Les données donnant 0 ou 100% de
mortalité sont ignorées pour le calcul de la CL

. Pour préparer une courbe dose-réponse

valide, seules les concentrations donnant des valeurs entre 95% et 5% de mortalité
doivent être utilisées. Au moins deux points de dilution doivent être supérieurs à la CL

et deux inférieurs, pour garantir la validité de la valeur. La sensibilité de la colonie
d’insectes peut exiger qu’une série de six dilutions légèrement différentes soit utilisée.

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP), suite

259

La mortalité est déterminée à 24 et 48 h en comptant le nombre de larves vivantes

Bti,

il n’y

Bti

. La mortalité est

enregistrée à 48 h pour les préparations du

Bsph

, en raison de son taux d’action plus

lent.

Si la mortalité du groupe témoin dépasse 5%, les mortalités des groupes traités

doivent être traitées selon la formule d’Abbott [Abbott, W. S. (1925). Méthode pour
calculer l’efficacité d’un insecticide.

Journal of Economic Entomology

, 265-267]:

X – Y

pourcentage (%) témoin

————

X x 100

où

X = % de survie dans l’échantillon témoin,

Y = % de survie dans l’échantillon traité.

Les tests avec une mortalité de l’échantillon témoin supérieure à 10%, ou une

du produit testé et des préparations étalons de référence, à l’aide des formules

décrites ci-dessus. La toxicité des préparations

Bti

est définie par le compte à 24 h après

le début du test, tandis que la toxicité du

Bsph

est définie par le compte après 48 h

d’exposition larvaire.

Pour une précision accrue, les titrages biologiques doivent être répétés sur au

moins trois jours différents, en même temps que le titrage de l’étalon de référence, et
l’écart type des moyennes être calculé. Une série de tests est valide si l’écart type relatif
(ETR ou coefficient de variation, CV) est inférieur à 25 pour cent.

(iv) Production des larves des tests

Les larves L4 sont représentatives de la sensibilité totale de la population cible et

Pour les

Aedes

aegypti,

les œufs sont pondus dans un gobelet recouvert d’un

papier filtre et rempli au tiers d’eau désionisée. Le papier est séché à température
ambiante et conservé plusieurs mois en le stockant dans un sac plastique scellé à
température ambiante. Lorsque des larves sont nécessaires, le papier est immergé dans
de l’eau déchlorée. Pour synchroniser l’éclosion, ajouter l’alimentation des larves dans
l’eau 24 heures avant d’ajouter les œufs. La croissance bactériologique va désoxygéner
l’eau et déclencher l’éclosion des œufs. Cela pousse généralement le premier stade
larvaire à éclore dans les 12 heures. Ces larves sont ensuite transférées dans un
conteneur (25 x 25 cm de profondeur) contenant 2 litres d’eau déchlorée pour obtenir
une population de 500 à 700 larves par conteneur. L’alimentation des larves peut
consister en des flacons de protéines comme ceux utilisés pour les poissons d’aquarium,
ou des biscuits pour chat en poudre, et les conteneurs sont conservés à 25 ± 2 °C. Il est
important que la quantité d’aliments reste faible pour éviter une forte croissance
bactérienne qui tue les larves. Plusieurs séances d’alimentation à un ou deux jours
d’intervalle et une observation quotidienne est ce qu’il y a de mieux. Si l’eau devient
trouble, remplacer toute l’eau en filtrant les larves et en les transférant dans un récipient
propre avec de l’eau propre et de l’alimentation. Cinq à sept jours plus tard, on devrait
obtenir une population homogène au début du quatrième stade larvaire (âgés de 5 jours
et longs de 4 à 5 mm).

9.11

Larvicides bactériens en poudre mouillable (WP)

260

Pour les larves de

Culex pipiens pipiens

, il est plus difficile d’obtenir une population

homogène du quatrième stade larvaire. Tout d’abord, un grand nombre de nacelles
d’œufs doivent être pondues et collectées le même jour. Elles peuvent être stockées à
15-18 °C afin d’accumuler plus d’œufs pour l’éclosion. Les premiers stades larvaires sont
fragiles et ne doivent donc pas être manipulés. Le développement vers le deuxième
stade larvaire prend généralement 3 à 4 jours à 25 ±  2° C après la ponte des œufs.
Lorsqu’ils sont prêts, les deuxièmes stades larvaires sont regroupés dans un bac avec
trois litres d’eau déchlorée de 4 à 6 cm de profondeur –  800 à 1 000 larves par bac.
L’alimentation (extrait de levure et biscuits pour chiens ou chats) est fournie selon les
besoins. Les quatrièmes stades larvaires précoces convenant aux tests sont
généralement obtenus au bout de sept jours, même si parfois il faut huit ou neuf jours.

Note 5

Les teneurs maximales acceptables de contaminants microbiens n’ont pas encore été
déterminées.

Note 6

Essai de toxicité sur les larves de mouches: Bond R. P. M.,

et al

. The thermostable

exotoxin of

Bacillus thuringiensis

. In: Burges H. D. et Hussey N. W., eds. Microbial control

of insects and mites. Academic Press, London, 1971.

Note 7

Aucun test n’est requis si le fabricant a montré que la souche de

Bacillus thuringiensis

n’est pas capable de produire de bêta exotoxine. Aucun test n’est requis pour les

Bacillus

sphaericus

, car cette espèce n’est pas connue pour produire des exotoxines.

Note 8

Généralement, la teneur en eau ne doit pas dépasser 5% afin d’empêcher la dégradation
prématurée du produit.

Note 9

La masse de l'échantillon à utiliser dans le test doit être au plus haut taux d'utilisation
recommandé par le fournisseur.

Note 10 Le titrage biologique est la seule méthode entièrement fiable pour mesurer la masse

d’ingrédient actif encore en suspension. Toutefois des méthodes plus simples comme la
détermination gravimétrique et l’extraction par solvant peuvent être utilisées de façon
régulière sous réserve que ces méthodes aient prouvé qu’elles donnaient des résultats
égaux à ceux de la méthode du titrage biologique. En cas de litige, la méthode du titrage
biologique sera la méthode d’arbitrage.

Note 11 À moins que d’autres températures et/ou durées soient spécifiées.

Note 12 La méthode à utiliser doit être indiquée, que ce soit en tournoyant ou non. La formulation

doit être complètement mouillée en moins de deux minutes pour une performance
optimale.

Note 13 Les larvicides microbiens doivent être entreposés à des températures fraîches mais des

tests accélérés de stabilité au stockage seraient extrêmement utiles pour des contrôles
rapides de la stabilité au stockage des produits. Pour l’instant, il n’existe pas de méthode
normalisée. En l’absence de test accéléré de la stabilité au stockage, il est recommandé
que les normes minimales suivantes soient respectées:

a) pas plus de 10% de perte d’activité biologique en dessous de la valeur d’activité

indiquée sur l’étiquette lorsqu’ils sont stockés à 5 ºC pendant 2 ans; et

b) pas plus de 10% de perte d’activité biologique en dessous de la valeur d’activité

indiquée sur l’étiquette lorsqu’ils sont stockés entre 20 et 25 ºC pendant 1 an.

Les résultats du test de l’activité biologique peuvent varier jusqu’à ± 25% de la moyenne

9.12

Larvicides bactériens en granulés dispersables dans l’eau (WG)

261

9.12

LARVICIDES BACTÉRIENS EN GRANULÉS DISPERSABLES DANS
L’EAU (WG)

Note pour la préparation des projets de spécifications. Ne pas omettre de clauses ou
insérer des clauses supplémentaires, ni insérer de limites qui soient plus permissives que
celles données dans les lignes directrices, sans fournir de justification. À partir des
« Notes » fournies à la fin de ces lignes directrices, intégrer seulement celles qui sont
applicables à la spécification particulière.

…… [Genre, espèce, sous-espèce et souche de la bactérie]

GRANULÉS DISPERSABLES DANS L’EAU

[numéro CIPAC]/WG (mois & année de publication)

9.12.1 Description (Note 1)

Le produit se compose d’un mélange homogène de …… [

genre, espèce, sous-

espèce

et souche de la bactérie] (Note 2) conforme aux exigences de la

spécification de l’OMS ……, ainsi que des charges et de tout autre agent de
formulation nécessaire. Il doit être sous la forme de granulés (Note 3) pour
application après désintégration et dispersion dans l’eau. La formulation doit être
sèche, fluide et exempte de toute matière étrangère visible et de grumeaux durs.
La formulation doit être …… en couleur.

9.12.2 Principe actif (Note 4)

9.12.2.1

Identité

Le principe actif doit répondre à un test d'identité et, lorsqu’il demeure
un doute sur l'identité, il doit répondre à au moins un test
supplémentaire.

9.12.2.2

Teneur en principe actif (activité biologique)

La teneur en …… [

Genre, espèce, sous-espèce

et souche de la

bactérie] doit être déclarée en Unités Toxiques Internationales
(UTI/mg produit), et une fois déterminée par la méthode décrite dans
la Note 5, l’activité biologique moyenne ne doit pas être inférieure à
90 pour cent de la teneur minimale déclarée.

9.12.3 Impuretés pertinentes et contaminants

9.12.3.1

Contaminants microbiens

(Note 6.)

9.12.3.2

Impuretés chimiques

Le produit doit être exempt de bêta-exotoxine lorsqu’il est soumis à
l’essai de toxicité sur les larves de mouches (Notes 7 et 8) ou à une
méthode CLHP équivalente.

9.12.3.3

Eau

(Méthode d’essai M7R1 de l’OMS)

9.12

Larvicides bactériens en granulés dispersables dans l’eau (WG)

262

Maximum …… g/kg (Note 9).

9.12.4 Propriétés physiques

9.12.4.1

Intervalle de pH

(CIPAC MT 75.3), le cas échéant

Intervalle de pH …… à ……

9.12.4.2

Mousse persistante

(CIPAC MT 47.3)

Maximum: …… ml après une minute.

9.12.4.3

Test du tamis humide

(CIPAC MT 185)

Maximum: ……% de la formulation doit être retenu sur un tamis
d’essai de ...... µm.

9.12.4.4

Dispersibilité

( CIPAC MT 174)

Un minimum de ……% du produit doit être en suspension après 5
mn dans de l’eau-étalon D CIPAC (Note 10).

9.12.4.5

Suspensibilité

(CIPAC MT 184) (Note 11)

Un minimum de ……% du produit doit être en suspension après 30
mn dans de l’eau-étalon D CIPAC à 30 ± 2

C (Note 10).

9.12.4.6

Mouillabilité

(CIPAC MT 53.3) (Note 12)

La formulation doit être complétement mouillée en…… min.

9.12.4.7

Teneur en poussières

(CIPAC MT 171.1) (Note 13)

La formulation doit avoir un maximum de poussières collectées de
30 mg avec la méthode gravimétrique ou un facteur de poussière
maximum de 25 avec la méthode optique.

9.12.5 Stabilité au stockage

9.12.5.1

Stabilité à température élevée

(Méthode à élaborer – Note 14.)

________________________

Note 1 En plus des caractéristiques décrites dans la clause, l’odeur et le goût peuvent également

être des critères importants d’acceptabilité du produit lorsque le produit est destiné à être
appliqué dans l’approvisionnement d’eau potable. Il n’y a pas de tests objectifs ou
concordants pour déterminer l’acceptabilité de ces caractéristiques. Si l’odeur et le goût
doivent être vérifiés, il est recommandé que, à cet effet, le produit soit dilué au taux le
plus élevé d’utilisation.

Note 2 L’organisme unique axénique (« pur ») avec toutes les composantes biologiques

pertinentes qui lui sont associées, par ex. les toxines, les parties cellulaires et les spores.
La description doit inclure des informations sur toute modification génétique de la souche
utilisée.

Note 3 En fonction des conditions de fabrication, les WG peuvent avoir différentes formes et

granulométries. Pour décrire des formulations spécifiques, il est recommandé que des
informations sur la forme (par ex. forme irrégulière, presque sphérique, cylindrique…)
soient ajoutées et la granulométrie nominale indiquée.

9.12

Larvicides bactériens en granulés dispersables dans l’eau (WG), suite

263

Note 4

Des informations doivent être fournies sur la source et les caractéristiques d’identification
du matériel de référence pouvant être obtenues auprès d’une institution reconnue au
plan international.

Note 5

Détermination de l’activité biologique (toxicité) du

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

et des produits

B. sphaericus

Principes

L’activité biologique est testée en comparant la mortalité des larves de moustiques

Actuellement il y a deux poudres de référence internationalement reconnues qui

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus thuringiensis

sous-esp.

israelensis

(Bti) est comparée à celle d’une poudre de référence lyophilisée (IPS82,

souche 1884) de cette espèce bactérienne, en utilisant des larves de

Aedes aegypti

(souche Bora Bora) au début du quatrième stade. La toxicité de IPS82 a une toxicité
attribuée arbitrairement de 15 000 UTI/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

L’activité biologique des produits basés sur le

Bacillus sphaericus

(Bsph) est

déterminée par rapport à une poudre de référence lyophilisée (SPH88, souche 2362) de
cette espèce bactérienne en utilisant des larves de

Culex pipiens pipiens

(souche

Montpellier) au début du quatrième stade. La toxicité de SPH88 a une toxicité attribuée
arbitrairement de 1 700 ITU/mg de poudre contre cette souche d’insectes.

La toxicité de toutes les préparations bactériennes basées sur les

Bti

Bsph

peut

être déterminée par rapport aux poudres étalons ci-dessus. La toxicité (UTI/mg) des
produits testés est déterminée selon la formule suivante:

titre (ITU/mg) du produit testé = titre standard (ITU/mg) x CL

(mg/l) standard

(mg/l) inconnue "X"

L’utilisation de poudres larvicides bactériennes de référence alternatives et/ou de

Méthode

Appareils et réactifs

homogénéisateur à entraînement supérieur ou agitateur
Bain de glace (conteneur de glace pilée).

Balance analytique (précise à ± 0.1 mg).

Balance à plateau supérieur (précise à ± 10 mg), de préférence avec fonction de tare.

Eau désionisée.

Agent de mouillage (par ex. Tween 80).

Verre borosilicaté ou béchers en plastiques de 200 ml.

Bouteille en verre transparent de 500 ml à large ouverture et bouchon à vis.

Bouteilles en verre transparent de 100 ml à bouchon à vis.

Micropipette.

Pipette de 10 ml.
Tubes en plastique de 12 ml avec bouchons ou capuchons.
Gobelets en plastique ou en papier ciré de 200 ml.

9.12

Larvicides bactériens en granulés dispersables dans l’eau (WG)

264