Клиническая паразитология собак и кошек - часть 2

первичной   инвазии.   При  аутоинвазии  хозяин   заражается   собственным
паразитом на различных стадиях развития (например, род  Cryptosporidium).
Патентным  называют  период, в котором возбудитель заболевания (паразит)
выделяет во внешнюю среду свои зародыши – яйца, личинки и т. п., которые
обнаруживаются   в   исследуемом   материале.   Это   период   размножения
паразита.

С клинической точки зрения паразитарные болезни могут протекать остро

с наиболее выраженными клиническими признаками или  хронически, когда
проявления   сглажены.   Очень   часто,   особенно   у   взрослых   животных,
сталкиваются   с  латентным   течением,   при   котором   паразит   находится   в
организме без каких-либо клинических признаков. Эта форма опасна тем, что
латентно поражённые хозяева являются носителями и принимают участие в
дальнейшем   распространении   паразита.   У   другого   хозяина   инвазия   может
проявиться патогенно. 

С   точки   зрения   угрозы   жизни   человека   надо   настойчиво   бороться   с

опасными   паразитарными   болезнями,   переносимыми   как   позвоночными
животными, так и людьми. Такие болезни относят к зоонозам (токсоплазмоз,
личиночный   токсокароз,   лямблиоз   и   т.   д.).   Течение   инвазионных   болезней
зависит   от   общего  иммунного   статуса  организма   хозяина.   Важную   роль
играют также активность паразита и реактивность хозяина. Паразит должен
быть   достаточно  инвазионным,   чтобы   мог   напасть   на   хозяина   и   своим
дальнейшим   размножением   обеспечить   возможность   нападения   на   нового
хозяина.  Патогенность  паразита,   связана   с   его   способностью,   нарушить
гомеостаз   хозяина,   что   проявляется   в   виде   клинических   признаков.
Патогенность зависит от инвазионности, но не любой инвазионный паразит
является патогенным. С другой стороны, патогенность не сможет проявиться,
если   паразит   не   является   инвазионным   для   данного   хозяина.   Степенью
патогенности является вирулентность. Для хозяина важна восприимчивость
к определённым паразитам и резистентность или невосприимчивость, то есть
способность активно ограничивать его негативное воздействие.  У некоторых
паразитозов часто встречается  возрастная резистентность, при которой с
возрастом хозяина снижается патогенность паразита (например, у кокцидий). 

В   результате   иммунного   ответа   возникает  антипаразитарный

иммунитет.   Это   состояние,   при   котором   повышается   специфическая
резистентность, полученная хозяином при жизни. Он может препятствовать
новой   инвазии   либо   значительно   подавляет   патогенное   воздействие   и
размножение   паразита.   При   иммунном   ответе   хозяина   включается   как
гуморальная  (воздействует   при   помощи   антител),   так   и  клеточная
(обеспечивается   специализированными   клеточными   элементами)
составляющие   иммунитета.   Огромное   влияние   на   иммунную   способность
организма оказывает питание. У плотоядных развитию паразита содействует
диета с преобладанием углеводов, а достаточное количество белка наоборот
его подавляет. Недостаток витаминов также является ослабляющим фактором

3

для иммунной системы. Молозиво и материнское молоко выступают в роли
защитного фактора, и защищают слизистую кишечника от инвазии. Ранний
отъём   щенков   и   котят   способствует   быстрому   размножению   лямблий   и
развитию аутоинвазии криптоспоридиями. Стресс, особенно долговременный,
ведёт к снижению резистентности. Некоторые заболевания имеют общее либо
специфическое  иммунодефицитное   воздействие  (например,   демодекоз),
другие паразитарные инвазии наоборот проявляются в результате снижения
или   нарушения   резистентности   организма.   Так,   случаются   состояния,   при
которых

 первичное   заболевание 

(например,   чума   плотоядных)

сопровождается  вторичной   инвазией  (например,   криптоспоридиозом),
которая ухудшает всё течение болезни и прогноз. Паразитозы в клинической
практике часто протекают не самостоятельно, а как полифакторные инвазии.
Вместе   с   патогенным   воздействием   паразита   синергически   внедряются
вирусы, бактерии, плохое питание и условия ухода. Совместное влияние всех
отрицательных воздействий способствует полному развитию болезни. 

Существование   некоторых   заболеваний   тесно   связано   с  природным

очагом. Речь идёт об ограниченной  географической  территории, в которой
находится патогенный агент, который является составляющей частью данной
экосистемы.   Эта   циркуляция   обеспечивается   наличием  резервуарных
животных (позвоночных) и векторов (кровососущие насекомые, клещи). Как
только   новый  реципиент  (получатель)   заболевания,   например,   собака   или
человек, попадает в природный очаг, он подвергается  опасности нападения
вектором   и   переноса   заболевания.   В   наших   условиях   эта   проблематика
актуальна в основном у некоторых вирусных и бактериальных заболеваний
(например,   клещевой   энцефалит,   боррелиоз   Лимы).   В   тропических   и
субтропических   областях   резервуары   заболеваний   в   природных   очагах
являются   значительными,   например   трипаносомоз   у   свободно   живущих
животных   (антилоп),   от   которых   заболевание   переносится   на   домашних
животных. 

1.2. П

АРАЗИТОЛОГИЧЕСКАЯ

 

ДИАГНОСТИКА

Диагностика   паразитарных   заболеваний   непроста,   и,   если   опираться

только   на   клинические   признаки,   часто   можно   прийти   к   неточным
заключениям. Принимая во внимание неизбежность этиотропной терапии и
соответствующей   профилактики,   необходимо   предельно   точно   определить
возбудителя.   Исходя   из   анамнеза   и   клинических   данных,   подбирают
подходящий   способ   обследования   и   переходят   от   общего   обследования   к
частному. 

Применяемые  основные   паразитологические   методы  не   требуют

специальных приборов и могут проводиться в амбулаторной практике мелких
домашних   животных   в   каждой   лаборатории   с   минимальным   оснащением.

4

Прежде всего,  нужны  центрифуга  и  микроскоп  с объективами  с малым и
средним увеличением (например, 4 – 45). 

Специальные   методы  требуют   больше   химических   реактивов,   и   для

оценки   результатов   нужен   определённый   опыт   в   паразитологической
диагностике. Чаще всего используют прямые методы, при помощи которых
обнаруживают  самого  паразита.  Непрямые  методы, основанные  только  на
обнаружении антител против возбудителя заболевания или антигенов, у нас до
сих   пор   применяют   только   в   специализированных   лабораториях.   Если   бы
коммерческие   комплекты   были   повсеместно   доступны,   было   бы   можно
амбулаторно   диагностировать   некоторые   часто   встречающиеся   заболевания
(например, лямблиоз).

1.2.1. Основные методы

1.2.1.1. Копрологическое исследование

Для точной диагностики недостаточно исследовать кал один раз, потому

что выделение паразитов происходит нерегулярно. Рекомендуется брать три
образца кала, желательно собранных через день (например, 1, 3 и 5 день), но в
случае необходимости собранных в один день из следующих друг за другом
дефекаций.   Все   образцы   исследуются   вместе   или   в   определённых   случаях
отдельно.   Владельцам   рекомендуют   хранить   кал   после   сбора   в   холодном
месте. Для исследования нужен образец кала массой примерно 5 г, то есть
примерно   размером   с   орех.   Для   собак   и   кошек   нет   необходимости,   чтобы
образцы   кала   были   совершенно   свежими.   Можно   исследовать   и   образцы,
собранные   несколько   дней   назад,   однако   они   не   должны   быть
заплесневевшими. 

1. Нативный препарат. 

Метод  нативного мазка является  ориентировочным. Кал размешивают в

воде,   наносят   на   предметное   стекло   и   влажный   препарат   исследуют   под
микроскопом.   Этим   методом   паразиты   обнаруживаются   только   при
повышенной   концентрации,   поэтому   чаще   используются   методы
концентрации инвазионного начала. 

2. Метод флотации

Флотация   кала   –   копрологический   метод,   используемый   чаще   всего.   С

помощью   этого   метода   проводят   полное   паразитологическое   исследование

5

кала на паразитозы протозойного и гельминтозного характера. Он основан на
принципе использования флотационных растворов, у которых более высокая
удельная   плотность,   чем   у   паразитов.   Таким   образом,   при   исследовании
образца   кала   разные   стадии   биологического   цикла   паразита   всплывают   на
поверхность   содержимого   пробирки   и   концентрируются   в   поверхностном
слое. 

Запас флотационного раствора готовится в лаборатории. Для плотоядных

рекомендуется   использовать   в   качестве   флотационной   среды  раствор
Шеатера  –   раствор   сахара   с   удельной   плотностью  1,15  г/см

3

.   Его

использование особенно подходит для  протозойных возбудителей  (ооцисты
кокцидий, цисты лямблий и т. п.), потому что он более доступен и в нём не
происходит деформации поверхностных структур паразита. В поверхностном
слое находят как яйца гельминтов, так и фрагменты ленточных гельминтов, а
также   можно   использовать   этот   раствор   для   общего   паразитологического
исследования. 

Раствор Шеатера готовится нагреванием 500 мл воды и 750 г свекольного

сахара.   Таким   образом,   получают   насыщенный   раствор   сахара.
Приготовленный   таким   образом   раствор   можно   хранить   в   холодильнике
длительное   время.   Нужное   количество   разбавляют   водой,   хорошо
перемешивают   и   одновременно   используют   ареометр   для   достижения
необходимой   удельной   плотности,   то   есть  1,15  г/см

3

.   К   приготовленному

подобным образом раствору добавляют 0,7 мл фенола на 100 мл раствора для
предотвращения роста плесени. Раствор переливают в бутылку и хранят при
комнатной температуре или в холодильнике. 

Ещё один часто используемый флотационный раствор –  раствор Бреза,

удельная   плотность   которого  1,25   –   1,30  г/см

3

.   Его   использование   может

способствовать   деформации   тонких   оболочек,   особенно   у   простейших.
Поэтому приготовленные образцы исследуют, как можно, быстрее, потому что
со   временем   деформация   оболочек   увеличивается   и   делает   невозможной
правильную постановку диагноза. 

Для приготовления раствора Бреза готовят насыщенный раствор сульфата

магния, который получают растворением 1 кг MgSO

4

 в 1 литре горячей воды и

небольшой избыток оставляют выкристаллизовываться на ночь.  Насыщенный
раствор тиосульфата натрия (Na

2

S

2

O

3

) получают при разведении 2 кг соли в 1

литре горячей воды. Для приготовления собственно флотационного раствора
смешивают 3 части насыщенного раствора сульфата магния с тремя частями
раствора  тиосульфата натрия и 1 частью воды. Можно также использовать
другой метод: в 1 литре воды растворяют 725 г MgSO

4

, а в 1 литре воды – 1425

г  Na

2

S

2

O

3

.   Растворы   нагревают   до   кипения   и   оставляют   охладиться.   На

следующий   день   растворы   фильтруют.   После   смешивания   растворов   в
соотношении   1:1   разбавляют   водой   для   получения   необходимой   удельной
плотности 1,25 – 1,30 г/см

3

. 

6

Для   исследования   кала   флотационным   методом   отбирают   образец

размером   с   грецкий   орех,   заливают   водой   в   ступке   и   растирают   до
кашицеобразной   консистенции.   Процеживают   через   марлю   в   химический
стакан,   стараясь   максимально   отфильтровать   примеси.   Наливают   в
центрифужные пробирки, и центрифугируют 2 – 3 минуты при 1500 – 2000 об/
мин.   Потом   сливают   надосадочную   жидкость   и   к   осадку   добавляют
выбранный   флотационный   раствор.   Содержимое   пробирки   тщательно
перемешивают и встряхивают. Центрифугируют ещё раз 2 – 3 минуты при
1500 – 2000 об/мин. Пробирку ставят в штатив на 10 – 15 минут, после чего
поверхностный   слой   аккуратно   переносят   петлёй   на   предметное   стекло   и
микроскопируют. При исследовании образец не должен засыхать. 

Начинают   просматривать   под   малым   увеличением   (объектив,

увеличивающий в 4 – 10 раз), а потом переводят на среднее увеличение (х 16 –
20). Использование большего увеличения (х 40 – 45) нужно, прежде всего, для
диагностики простейших, стадии которых при малом увеличении не заметны.
Для   точного   определения   отдельных   паразитов   необходимо   использовать
окуляр   с   линейкой.   Можно,   правда,   составить   сравнительную   таблицу   и
ориентироваться по ней, однако всегда есть риск неточной идентификации.
Если взять за основу обычное и относительно часто встречающееся яйцо рода
Toxocara  размером   90   мкм,   потом   вывести   приблизительный   размер
(например,   половину   или   треть).   Однако   необходимо   также   помнить
меняющуюся   величину   объектов   при   различных   увеличениях.   Сравнивают
только ориентировочно, а при малых увеличениях высока опасность ложной
идентификации (например, у кошек надо быть осторожным при диагностике
Isospora rivolta и Toxoplasma gondii!).

3. Метод Фауста

Этот метод используется в медицине, прежде всего для диагностики цист

лямблий,   но   подходит   и   для   остальных   обычных   яиц   и   цист   паразитов.   В
качестве   флотационного   раствора   используют   33%  раствор   сульфата   цинка
(ZnSO

4

) с удельной плотностью  1,18  г/см

3

. Готовят его растворением 331 г

ZnSO

4

  •   7  H

2

O  в   1000   мл   дистиллированной   воды.   Исследования   вполне

сравнимы с основным флотационным методом. 

Образец кала размешивают в небольшом количестве воды, процеживают

через   марлю   в   химический   стакан.   Наливают   в   центрифужную   пробирку
примерно на 0,5 см ниже краёв и центрифугируют 3 минуты при 2500 об/мин.
Надосадочную жидкость аккуратно сливают, а осадок повторно размешивают
с   добавлением   раствора   сульфата   цинка   примерно   на   0,5   см   ниже   краёв
пробирки.   Центрифугируют   3   минуты   при   2500   об/мин.   Потом   ставят
пробирку в штатив и доливают раствор сульфата цинка до самых краёв. На
поверхность  сразу  же  кладут   покровное  стекло.  Через  20  минут  покровное

7

стекло   аккуратно   снимают   пинцетом,   переносят   его   влажной   стороной   на
предметное стекло и микроскопируют. 

4. Седиментационный метод

Этот   метод   основан   на   принципе   седиментации   (осаждения)   более

тяжёлых   яиц   паразитов,   которые   при   обычных   флотационных   методах   не
всплывают на поверхность. У собак и кошек они особенно не используются,
гораздо более широкое применение этот метод нашёл у жвачных, поскольку
типичные печёночные сосальщики плотоядных (например,  Opisthorchis  spp.)
продуцируют относительно маленькие яйца с низкой удельной плотностью и
для их диагностики можно без проблем использовать флотационные методы.
Седиментационные методы применяют только при подозрении на фасциолёз. 

Сначала действуют по аналогии с предыдущими методами. Образец кала

заливают   водой   в   ступке   и   растирают   до   кашицеобразной   консистенции.
Суспензию процеживают через марлю в химический стакан. Доливают водой
до краёв и оставляют осаждаться минимум на 5 минут. Верхний слой воды
осторожно сливают до самого осадка и опять доливают воды до краёв стакана
и оставляют осаждаться. Такое последовательное промывание повторяют до
тех   пор,   пока   вода   над   осадком   не   станет   прозрачной.   После   последнего
осаждения оставляют в стакане 1 – 2 мл воды вместе с осадком. Содержимое
стакана   слегка   взбалтывают   круговым   движением   и   переносят   на   часовое
стёклышко.   После   оседания,   осадок   исследуют.   Образец   содержит   много
балластных  веществ,   поэтому  иногда  его  покачивают,  чтобы  яйца  не  были
прикрыты примесями. 

5. Ларвоскопические методы

Ларвоскопические методы основаны на свойстве гидрофильных личинок,

активно проникать из кала в воду. По этой причине кал нельзя фиксировать
химикатами. После фиксации (например, формалином) личинки бы погибли,
что   сделало   бы   невозможным   применить   этот   метод.   Исследование   кала
каким-либо   ларвоскопическим   методом   проводят   в   случае   подозрения   на
инвазию паразитом, который отличается тем, что в кале носителя содержатся
личинки I, и нет яиц. Это может быть, например, оллуланоз. 
а) Метод Вайда применяют для оформленного кала. Образец кала размером с

грецкий   орех   заворачивают   в   марлю   и   кладут   на   часовоё   стёклышко.
Заливают водой комнатной температуры и оставляют стоять в тепле 2 – 4
часа,   минимум   30   минут.   При   высыхании   воду   доливают   так,   чтобы
образец   всегда   находился   в   небольшом   количестве   воды.   Перед
исследованием   снимают   марлю   с   калом   и   просматривают   при   малом
увеличении. 

8

б) Метод Бермана применяют как для оформленного, так и неоформленного

кала. Этот метод более трудоёмкий и требует большего времени, однако
результаты более надёжны. Необходим штатив и воронка, у которой на
горлышко натянута гибкая резиновая трубка с зажимом. Образец кала (его
объём   в   соответствии   с   размерами   воронки)   заворачивают   в   марлю,   и
кладут   в   воронку.   Заливают   водой   комнатной   температуры   так,   чтобы
образец   был   в   воде   на   ⅓.   Оставляют   стоять   12   –   24   часа   в   тепле   в
лаборатории. Для исследования берут осадок, скопившийся над зажимом.
Приоткрывая   зажим,   наливают   небольшое   количество   жидкости   на
часовое стёклышко и рассматривают под увеличением. 

6. Диагностика цестод

Самая   простая   диагностика   цестод   основана   на   прямом   обнаружении

зрелых члеников в кале. Владельцам животных рекомендуют подозрительный
объект   тотчас  же  класть в  баночку  с  водой  и принести  вместе   с калом на
исследование.   Если   членик   был   взят   с   подстилки   либо   был   прилеплен   к
шерсти   и   уже   высох,   его   как   можно   скорее   погружают   в   химический
стаканчик с водой и дают ему вновь набухнуть. Потом исследуемый объект
кладут   между   двумя   покровными   стеклами,   и   после   сжатия   стягивают
резинкой.   Если   речь   идёт   о   зрелом   членике   цестоды,   при   микроскопии
обращают   внимание   на   яйца   с   определённой   организацией   (например,
коконы). Некоторые среды (например, молочная кислота, глицерин, жидкость
Faure)   делают   изображение   членика   более   выразительным,   чем   вода   и
упрощают   определение   вида   цестоды.   При   использовании   классического
флотационного метода необходимо тщательно растереть кал в ступке, чтобы
произошло   разрушение   члеников   и   выделение   яиц.   Макроскопическая
диагностика цестод не всегда может оказаться правильной, членики цестод
могут быть перепутаны, например, с непереваренными остатками пищи (рис,
овсяные   хлопья)   или   личинками   мух.   С   точки   зрения   профилактики
необходимо   также   определить   вид   как   можно   точнее   (например,   при
обнаружении Dipylidium caninum рекомендуется вести борьбу с блохами). 

1.2.1.2. Исследование на наличие эктопаразитов

1. Исследование кожного соскоба в растительном масле или глицерине

Это исследование проводят у любого пациента с кожным заболеванием.

Эту   процедуру   обычно   проводят   следующим   образом.   На   место   кожного
поражения   наносят   несколько   капелек   растительного   масла,   а   потом
скальпелем  или хирургической  кюреткой  проводят скарификацию кожи до
первого появления капиллярной крови. Клеточный детрит под воздействием

9

растительного масла прилипает к острию скальпеля, откуда его переносят на
предметное   стекло,   накрывают   покровным   стеклом   и   микроскопируют
сначала при малом, а потом при среднем увеличении. Стараются тщательно
осмотреть   весь   препарат.   Этим   способом   можно   обычно   достоверно
определить   наличие  Demodex   canis,  Notoedres   cati,  Trombicula    autumnalis,
Dermanyssus galina  на разных стадиях развития, а в случае взятия кожного
соскоба   многократно   увеличиваются   шансы   обнаружения  Sarcoptes   canis.
Модификация этого метода – использование микробиологической петли для
взятия секрета  из  наружного слухового прохода, в котором у кошек и собак
обнаруживают Otodectes cynotis. 

2. Исследование кожного соскоба с помощью щёлочи

В   месте   перехода   поражённой   ткани   в   здоровую   проводят   соскоб   до

появления   крови.   Пробу   помещают   в   чашку   Петри   и   заливают   5   –   10%
раствором  NaOH  или  KOH.   Препаровальной   иглой   разрушают  крупные
корочки  и оставляют  на 2 – 3 часа мацерироваться. Для ускорения метода
помещают  образец   в   пробирку   для   кипячения   и   на   1/3   объёма   пробирки
заливают 5 – 10% раствором NaOH или КОН и 2 – 3 раза доводят до кипения.
Материал, мацерированный, таким образом, выливают в чашку Петри, и после
охлаждения   исследуют.   Под   воздействием   щёлочи   и   высокой   температуры
происходит   растворение   кератина   и   примесей,   причём   хитиновая   оболочка
клещей не повреждается. По этой причине этот метод исследования подходит
для   доказательства   наличия   тех   паразитов,   которых   трудно   обнаружить   в
коже,   например  Sarcoptes  canis.  Препарат   рассматривают   под   малым
увеличением.   Результат   считается   положительным   даже   при   обнаружении
единичного клеща, или его стадии развития. Эти методы можно с успехом
использовать и для диагностики других клещей, демодекоза, тромбикулёза и
т.п. 

3.  Исследование   содержимого   интактной   пустулы   или   волосяного
фолликула

Микроскопическое   исследование   первичной   флюоресценции,   которой

обладает,   например,   интактная   пустула,   в   дерматологии   мелких   животных
имеет неоценимое значение, и не только с точки зрения паразитологии. Чаще
всего   этим   методом   удаётся   обнаружить  Demodex  canis  и   других
представителей рода Demodex. 

При   подозрении   на   демодекоз   обязательно   исследуют   волосяные

фолликулы   в   местах   кожных   повреждений.   Поражённую   кожу   сжимают
большим и указательным пальцем одной руки и стараются выдавить паразита
из   волосяных   фолликулов   вместе   с   гноем,   салом   и   клеточным   детритом.
Полученный таким образом материал соскабливают скальпелем, смазанным

10