Федеральное агентство по образованию

2.1 Материал исследования

Активность ферментов определяли в сыворотке крови онкологических больных. Кровь брали в первый день после операции из локтевой вены, далее ее инкубировали 30 минут при комнатной температуре, центрифугировали 20 минут при 4000g и получали сыворотку, в которой определяли активность карбоксипептидазы N и ангиотензинпревращающего фермента.

Изучение активности ферментов было проведено у 45 мужчин в возрасте от 49 до 70 лет. Больные были оперированы по поводу опухолей легких, брюшной полости и мочеполовой системы. Они составили три экспериментальные группы. Первая группа – больные торакального отделения (18 человек); вторая – абдоминального отделения (15 мужчин); третья – урологического отделения (12 человек).

Параллельно с нашим исследованием Корниенко Е. М. проводилась работа по определению параметров гемостаза у онкологических больных данных групп, которые мы использовали в своей работе.

2.2 Методы исследования

2.2.1 Метод определения активности карбоксипептидазы N

Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [62].

Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO₄ , приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37^o C, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37^o C и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.

Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H₂ O [58].

Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.

Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.

2.2.2 Метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента

Активность АПФ определяли в сыворотке крови нингидриновым методом по образованию гли-арг из кбз-гли-гли-арг при рН 8,2 как активность, ингибируемую каптоприлом. Препарат фермента (40 мкл) смешивали с 20 мкл 35 мкМ каптоприла в 100 мМ Трис-НСl буфере, рН 8,2, или 20 мкл буфера и преинкубировали 8 мин при 37˚С. Реакцию начинали прибавлением 10 мкл раствора кбз-гли-гли-арг в вышеуказанном буфере (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Через 120 мин реакцию останавливали прибавлением 30 мкл 10% раствора трихлоруксусной кислоты [59]. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/ мин. Отбирали 50 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося гли-арг нингидриновым методом [62]. Пробы колориметрировали на КФК-2 при l=590 нм. Активность АПФ определяли как разность в оптической плотности проб не содержащих и содержащих каптоприл. Активность фермента выражали в нмоль гли-арг, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.

Концентрацию белка определяли биуретовым методом.

2.2.3 Метод определения содержания белка

Содержание общего белка определяли биуретовым методом. Принцип метода основан на том, что ионы меди в щелочной среде взаимодействуют с пептидными связями белков сыворотки крови с образованием комплекса красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации общего белка.

Опытные пробы содержали 50 мкл сыворотки крови и 2,5 мл рабочего раствора биуретового реагента (концентрат биуретового реагента развести дистиллированной водой в соотношении 1:19). Контрольные пробы содержали 50 мкл дистиллированной воды и 2,5 мл рабочего раствора биуретового реагента. В калибровочную пробу добавляли 50 мкл калибровочного раствора общего белка (раствор бычьего сывороточного альбумина с концентрацией 60 г/л с добавлением хлористого натрия 9 г/л и азида натрия 1 г/л).

Содержимое пробирок тщательно перемешивали, избегая образования пены, инкубировали при комнатной температуре (+ 18 - 25 С) в течение 30 минут, после чего измеряли величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной пробы при длине волны 540 нм.

Концентрацию общего белка рассчитывали, как отношение оптической плотности опытной пробы к оптической плотности калибровочной пробы умноженная на концентрацию общего белка в калибровочном растворе (60 г/л).

2.3 Статистическая обработка результатов исследования

Достоверность отличий между средними определяли с использованием t-критерия Стьюдента [16, 29, 40]. Корреляционный анализ проводили с помощью программы «Статистика» (версия 6.0).

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1 Исследование активности карбоксипептидазы N в сыворотке крови онкологических больных в раннем послеоперационном периоде

Результаты исследования показали увеличение активности КПN в сыворотке крови онкологических больных торакального и абдоминального отделения в ранний послеоперационный период по сравнению с пациентами урологического отделения (рис. 1).

Рис. 1. Активность КПN у онкологических больных в ранний послеоперационный период (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, M±m, n=12¸18; достоверность отличий: ** – р < 0,01, *** – р < 0,001 относительно урологической группы).

КПNлокализован в плазме крови, обнаружен в стенках кровеносных сосудов. Легкие, желудочно-кишечный тракт имеют обширную капиллярную систему, после операции происходит повреждение этой системы, и вероятно, выход фермента в кровяное русло, что в итоге приводит к увеличению его активности [60].

При проведении корреляционного анализа (табл. 3), была выявлена отрицательная взаимосвязь между активностью КПN и ХЗФ у больных абдоминального отделения. В процессе свертывания крови калликреин расщепляет высокомолекулярный кининоген до активного кинина, который повышает чувствительность фактора XI к действию фактора XIIа [48]. Известно, что КПN участвует в деградации брадикинина [74], вероятно, увеличение активности этого фермента у данной группы больных может способствовать уменьшению свертывания крови по внутреннему пути. Кроме того, фактор Хагемана может включаться в фибринолиз, снижая время лизиса фибринового сгустка.

Обнаружена положительная корреляционная взаимосвязь между активностью КПN и уровнем фибриногена у пациентов урологического отделения. Фибриноген относится к острофазным белкам, концентрация которого резко возрастает в послеоперационный период, что усиливает тромбообразование на данном этапе [8]. Этот белок определяет вязкость плазмы крови, повышает агрегацию тромбоцитов и эритроцитов. Под действием тромбина из фибриногена образуются фибрин-мономеры, из которых впоследствии образуются фибриновый сгусток. Чрезмерное увеличение фибриногена может приводить к повышенному тромбообразованию. КПN, участвуя в инактивации брадикинина, вероятно, сдерживает активацию свертывания крови по внутреннему пути, тем самым способствуя поддержанию фибриногена на нормальном уровне у данной группы больных.

Таблица 3 Корреляционные взаимосвязи параметров гемостаза и карбоксипептидазы N

Достоверность корреляционных взаимосвязей: *– р < 0,05.

Обнаружена также положительная корреляция между активностью КПNи ХЗФ у больных урологического отделения. Известно, что в почечной ткани вырабатывается большое количество активаторов плазминогена. После оперативных вмешательств, особенно по поводу удаления опухолей, в кровь выделяется большое количество компонентов фибринолиза [44]. Вероятно, в данных условиях активность КПN может быть снижена, чтобы сдерживать антикоагуляционные процессы.

3.2 Исследование активности ангиотензинпревращающего фермента в сыворотке крови онкологических больных в раннем послеоперационном периоде

Результаты исследования показали достоверное увеличение активности АПФ в сыворотке крови онкологических больных урологического отделения по сравнению с пациентами абдоминального и торакального отделения (рис.2).

Рис. 2. Активность АПФ у онкологических больных в ранний послеоперационный период (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, M±m, n=12¸18; достоверность отличий * – р < 0,05, ** – р < 0,01 относительно урологической группы).

АПФ – мембранно-связанный фермент, локализованный преимущественно в тканях почек. Этот фермент является компонентом ренин – ангиотензиновой системы [4, 48]. При повреждении почек, в том числе и хирургического вмешательства, происходит высвобождение АПФ в кровоток, что приводит к увеличению активности фермента.

При проведении корреляционного анализа (табл. 4) была обнаружена отрицательная корреляционная взаимосвязь между активностью АПФ и уровнем РФМК у пациентов абдоминального отделения. У больных, страдающих онкологическим заболеванием, антитромбогенная активность стенок сосудов в процессе роста опухоли снижается, а в раннем послеоперационном периоде обнаруживается повышенная склонность к внутрисосудистому свертыванию крови и тромбообразованию [8, 11, 19, 34, 35].Известно так же, что в эндотелии содержится большое количество активатора плазминогена. Эндотелиальная дисфункция способствует уменьшению этого процесса, что вызывает сдвиг в системе антикоагуляция-коагуляция с преобладанием последней [73]. Участие АПФ в регуляции сосудистого тонуса реализуется через синтез ангиотензина-II, оказывающего мощное вазоконстрикторное действие. Другой механизм, более сопряженный с собственно эндотелиальной дисфункцией, связан со способностью АПФ ускорять деградацию брадикинина. АнгиотензинII является вазопрессором, стимулятором образования свободных радикалов, в частности, супероксидных анионов, которые инактивируют NO, промотируют образование пероксинитрита и снижают эффективность NO-опосредуемой сосудистой дилатации. Т.о., ангиотензин II, способствует развитию эндотелиальной дисфункции, в результате чего усиливается выработка вазоконстрикторов и прокоагулянтов [48]. В результате активируется система свертывания, компонентом которой является РФМК. В то время как брадикинин стимулирует синтез NO в эндотелии, участвуя в дилатациисосудовиусиливаяскоростьместногокровотока. Вероятно,

Таблица 4 Корреляционные взаимосвязи параметров гемостаза и ангиотензинпревращающего фермента

Достоверность корреляционных взаимосвязей: *– р < 0,05, ** – р < 0,01. Снижение активности АПФ является компенсаторным механизмом в условиях имеющейся гиперкоагуляции.

Выявлена положительная корреляционная взаимосвязь между активностью АПФ и уровнем ПТИ у больных торакального отделения.

Исследования показали, что у больных злокачественными новообразования легких имеет место активация система гемостаза, осуществляемая преимущественно по внешнему механизму процесса свертывания крови, которая оценивается протромбиновым тестом [44]. Внешний путь начинается с повреждения сосудов и тканей, в результате чего в кровь высвобождается тканевый тромбопластин, которым богата легочная ткань. Этот фактор активирует фактор VII в присутствии ионов Са²⁺ . Комплекс, состоящий из фактора III, фактора VIIа, ионов Са²⁺ на поверхности тромбоцитов приводит к активации фактора Х [44]. Известно, что в кровь АПФ попадает из легких. При оперативных вмешательствах, вероятно, инкреция АПФ усиливается, что в свою очередь приводит к генерализованному образованию ангиотензина II, участвующего в агрегации тромбоцитов, на поверхности которых идет процесс внешнего пути свертывания крови. Кроме того, в результате хирургического вмешательства происходит не только высвобождение факторов свертывания крови, но и повреждение эндотелия сосудов, что в свою очередь приводит к изменению активности АПФ, так как он участвует в синтезе коллагена и может таким образом усиливать фиброз [22, 68], активируя тем самым свертывающую систему, компонентом которой является протромбин.

Выводы

1. Обнаружено увеличение активности карбоксипептидазы N у торакальной и абдоминальной групп по сравнению с урологической группой онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

2. Обнаружено увеличение активности ангиотензинпревращающего фермента у урологической группы пациентов по сравнению с абдоминальной и торакальной группами онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

3. Выявлены корреляционные взаимосвязи между активностью карбоксипептидазы N и ангиотензинпревращающего фермента и показателями гемостаза в раннем послеоперационном периоде.

4. Изучаемые ферменты принимают участие в процессах гемостаза у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде.

Список литературы

1. Азарян А.В. Пептидгидролазы нервной системы и их биологические функции // Ереван: Анастан, 1989.

2. Акоев И. Г., Биофизика познает рак. — М.: Наука, 1988. —160 с, 17 ил. — (Серия «От молекулы до организма»).

3. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж.Молекулярная биология клетки: В 3-х т. 2-е изд., перераб. и доп. Т. 3. Пер. сангл. – М.: Мир, 1994. – 504 с.

4. Альтшулер Б.Ю., Ройтман А.П., Долгов В.В. Методические аспекты определения ангиотензинпревращающего фермента // Клиническая лабораторная диагностика. – 2000.–№12. –С. 10– 14.

5. Антонова Л.В., Годенова Н.В., Земнюкова Н.А., Дудкина Н.Е. Опыт использования ортофенантролинового теста в диагностике синдрома ДВС в крови у пациенток с онкологическими заболеваниями репродуктивной сферы. // Медицина в Кузбассе. – 2004. –№11. – С. 26– 27.

6. Бакшеев Н.С., Ильяшенко Н.А.,Миляновский А.И. в кн. Злокачественные новообразования женских половых органов. – М., 1987. –С. 85– 187.

7. Баркаган З.С. Введение в клиническую гемостазиологию. – М.: Ньюдиамед, 1998. – 290 с.

8. Баркаган З. С.Патогенез и терапия нарушений гемостаза у онкологических больных // Терапевтический архив.– 1997. – №7. – С. 65– 67.

9. Баркаган З. С.Антитромботическая профилактика и терапия в онкологии. // MateriaMedica. – 1997. –№ 1 (13). – С. 5-14.

10. Баркаган З. С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза. – М.: Ньюдиамед, 2001. – 298 с.

11. Баркаган Л.З. Нарушение гемостаза у детей. – М., 1993.

12. Биохимия: Учеб. Для вузов / В.П. Комов., В.Н. Шведова. – М.: Дрофа, 2004. – 640с.

13. Веремеенко К.Н., Голобородько О.П. Претромботическое состояние. Тромбоз и его профилактика. // Вопр. мед. химии . – 1986. –№ 32. – С. 17– 25.

14. Вернигора А.Н., Генгин М.Т. Протеолитические ферменты: субклеточная локализация, свойства и участие в обмене нейропептидов // Биохимия. –1996,т.6, №5. – С. 771– 785.

15. Гешелин С.А., Вовчук С.В., Близнюк Б.Ф.Нарушения гемостаза и их профилактика в онкологии. // Вопр. Онкологии. – 1986. –№ 30. – С. 9– 18.

16. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ. – М, Практика, 1998. – 459с.

17. Городецкий В.М.Неоплазмы и свертывание крови // Гематол. и трансфузиол. – 1994. – № 3. – С.25– 28.

18. Гринштейн Дж., Виниц M., Химия аминокислот и пептидов, пер. с англ., т. 12,M., 1967. – 350 с.

19. Давыдов М. И. Активация гемокоагуляции у больных в критических состояниях // Современная онкология. – 2000. – Т. 2, № 4. – С. 54– 58.

20. Долгов В.В., Сварин П.В. Лабоараторная диагностика нарушений гемостаза. – М. Изд. Триада, 2005. – 270 с.

21. Дэвени Т., Гергей Я.Аминокислоты, пептиды и белки, пер. с англ.- M.: 1976. – 380 с.

22. Елисеева Ю.Е. Ангиотензинпревращающий фермент, его физиологическая роль. // Вопросы медицинской химии. –2001. –№ 1. – С. 53– 60.

23. Ешкайт X. Аминокислоты, пептиды, белки, пер. с нем. – M.: 1985. – 460 с.

24. Золотокрылина Е.С. // Теоретические и клиническиепроблемы современной реаниматологии: Материалы международного симпозиума, посвящ. 90-летию со дня рожд. акад. В. А.Неговского. – М., 1999. – С. 32– 33.

25. Иванов Е.П. Диагностика нарушений гемостаза. Минск, 1983. – 278 с.

26. Калишевская Т. М., Коломина С. М., Кудряшов Б.А. Свертывающая и противосвертывающая системы крови и их значение при развитии злокачественных новообразований. – М., 1992. – 315 с.

27. Киричук В.Ф., Алипов В. В.Возможности диагностики активации системы гемостаза у больных в критических состояниях по уровню фибринопептида А иD-димера. // Кремлевская медицина. Клинический вестник. – 2005. –№ 2. – С. 73– 76.

28. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. –М., 1975.

29. Лакин Г.Ф. Биометрия. – М.: Высш. шк., 1990. – 352с

30. Ленинджер А., Основы биохимии, пер. с англ., т. 1 3, M., 1985.

31. Локшина Л.А. Значение внутрисосудистого свертывания крови в формировании полиорганной недостаточности у хирургических больных в критических состояниях. // Новости анестезиологии и реаниматологии. – 2006. –№ 1. –С. 15– 21.

32. Маджуга А. В., Сомонова О.В., Елизарова А. Л., Свиридова С.П., Мазурина, О.Г., Кашия Ш.Р. Нарушения системы гемостаза у онкологических больных с массивной интраоперационной кровопотерей // Анестезиология и реаниматология. – 2001. – № 5. –С. 50– 52.

33. Макацария А. Д., Бицадзе В. О., Баймурадова С. М., Акиньшина С. М.. Тромбофилия и здоровье женщины. // Сибирский медицинский журнал. – 2006. –№5(21). – С. 6– 8.

34. Мальков О.А. Гемостатические нарушения при колоректальном раке (вопросы патогенеза, диагностики, профилактики и лечения): Автореф. дис. …. канд. мед. наук. – Омск, 2000.

35. Мальков О.А., Долгих В.Т., Лукач В.Н. Комплексная профилактика тромботических осложнений у больных колоректальным раком на этапах хирургического лечения// Анастезиология и реаниматология . – 2001. –№ 5. –С. 52 – 54.

36. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2-х томах. Т.2. Пер. с англ.: –М.: Мир, 1993. – 384с.

37. Ноздрачев Ю. И. Турбидиметрический анализ полимеризации фибрина в плазме крови. // Вестн. интенсив. тер. – 1995. –№ 1. – С. 17– 22.

38. Оболенская Н.Е. Некоторые особенности образования нейропептидов // Успехи совр. биол. – 1989. – Т. 108, № 3(5). – С. 337– 341.

39. Патологическая физиология и биохимия: Учебное пособие для вузов / - М.: Издательство «экзамен», 205. – 480с.

40. Рокитский П.Ф.Биологическая статистика. –Минск, Высшая. Школа, 1963.

41. Серебров А.И.в кн. Рак матки, Медгиз,1957. – 210– 233 с.

42. Система гемостаза [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http//www.cmd-online.ru/help/articles/detail.php?ID=111739

43. Синдром Диссименированного внутрисосудистого свертывания [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://studentport.su/referast/ptint.php.

44. Скипетров В.П. и др. коагуляционно - литическая система тканей и тромбогеморрагический синдром в хирургии. –Саранск: тип. «Крас. Окт.», 1999. – 232 с.

45. Фермилен Ж. и Ферстраге М. Гемостаз, пер. с франц., М., 1984.

46. Филлипович Ю.Б. Основы биохимии: Учеб. для хим. и биол. спец. пед. ун-тов и ин-тов. – 4-е изд., перераб. и доп. – М.: изд-во «Агар», 1999. – 512с.

47. Шиффман Ф.Д. Патофизиология крови: Пер. с англ. – М., СПб., 2000. – С. 191-253.

48. Яровая Г. А. Калликреин-кининовая система: новые факты и концепции (обзор) // Вопросы медицинской химии. – 2001, том 47. –№ 1. –с. 20-42.

49. Bokish V.A., Muller-Eberhard H.J. Anaphylotoxin inactivator in human plasma: Its isolation and characterisation as a carboxypeptidase // J. Clin. Invest. – 1970. –№49. – P. 2427– 2436.

50. Bui Т.Н., Wramsby H. Micromanipulative assisted fertilization till clinical research. Hum Reprod. –1996. – №11(5). – Р. 921– 924.

51. Chretien M., Seidah N.G. Precursor polyproteins in endocrine and neuroendocrine systems // Int. J. Peptide Protein Res. – 1984. – № 23. – P. 335– 341.

52. Ciavarella D., Reed R. L. et. al. // Br. J. Haematol. – 1987. – Vol. 67.– № 3. –Р. 365– 368.

53. Erdos E., Schulz W., Gafford J., Defendini R. Neutral metal endopeptidase in human male genital tract:comparison to angiotensin-1 converting enzyme. // Lab. Invest. – 1985. – V.52. – Р .4374– 47.

54. Erdos E.G. Handbook of Experimental Pharmacology. // Biochem. Pharmacol. – 1979. – № 25. – Р. 438-487.

55. Erdos E.G., Sloane E.M., Wohler I.M. Carboxypeptidase in blood and other fluids // Biochem. Pharmacol. –1964. –№13. – P. 893– 905.

56. Fricker L.D., Plummer T.H.Jr., Snyder S.H. Enkephalin convertase: potent, selective and irreversible inhibitors // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1983. –11, N 3. –P. 994– 1000.

57. Hendriks D., Sande M., Scharpe S. Colorimetric assay for carboxypeptidase N in serum // Clin. Chim. Acta. –1986 . –157, N 1. –P. 103– 108.

58. Hendriks D., Soons J., Scharpe S., Wevers R., van Sande M., Holmquist B. Identification of the carboxypeptidase responsible for the post-synthetic modification of creatine kinase in human serum // Clin. Chim. Acta. –1988. –172, N 2– 3. –P. 253– 260.

59. Hurst P.L., Lovell-Smith C.J. Optimized assay for serum angiotensin-converting enzyme activity // Clin. Chem.- 1981. –27. –P. 2048– 2052.

60. Ito Y., Misutani S., Kurauchi O., Kasugai M., Narita O., Tomoda Y. Purification and properties of microsomal carboxypeptidase N (kininase I) in human placenta // Enzyme. – 1989. – №42. – P. 8– 14.

61. Khanna A.S., Waisman D.M. Metabolism and intracellular processing of protein hormones // Hormon. Act. –1988. – № 1. – P. 117– 132.

62. Lee P.V., Takahashi T.N. An improved colorimetric determination of amino acid with the use of ninhydrin // Analyt. Biochem. –1966. – 14, № 1. – P. 71– 77.

63. Levin Y., Skidgel R., Erdos E. Isolation and characterization of the subunits of human plasma carboxypeptidase N (kininase I) // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1982. – 79. –P. 4618– 4622.

64. Marino P.L. Интенсивнаятерапия: Пер. сангл. – М., 1998.

65. Masuda S., Hattori A., Matsbmoto H., Miyazawa S., Natori Y., Mizutani S., Tsujimoto M. In volvemtnt of the V receptor in vasopressinstimulated translocation of placental leucine aminopeptidase /oxytocinase in renal cells // Eur J.Biochem. – 2003. – Vol. 270, № 9. – Р. 1988– 1994.

66. Plummer T.H., Ryan T.J. A potent mercapto bi-product analogue for human carboxypeptidase N // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1981. –№ 98. –P. 448– 454.

67. Ramchandran R., Kasturi S., Douglas J.G., Sen I. Am. J. Physiol. - Heart and Circulatory Physiology. – 1996. – №40. – Р.744– 751.

68. Skidgel R.A., Erdos E.G. Cellular carboxypeptidases // Immunol. Rev. – 1998. – V. 161, № 2. – P. 129-141

69. Skidgel R.A., Johnson A.R., Erdos E.G. Hydrolisys of opioid hexapeptides by carboxypeptidase N. Presence of carboxypeptidase in cell membranes // Biochem. Pharmacol. – 1984. – 33, № 21. –P. 3471– 3478.

70. Skidgel R.A., Tan F. Structural features of two kininase I-type enzymes revealed by molecular cloning // Agents Actions Suppl. –1992. –38, N 1. – P. 359-367.

71. Steiner D.F. The biosynthesis of biologically active peptides: a perspective // Peptide Biosynthesis and Processing (Fricker L.D., ed.).- CRC Press, Boca Raton, Florida, 1991. – P. 1-16.

72. Sugimura K., Tian X-L. Hoffmann S., Ganten D., Bader M. Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1998. –247. – Р.466-472.

73. The Kallikrein - Kinin System in Health and Disease. Munich: Limbach - Verlag Braunschweig. –1989. –p. 374.

74. Uehara M., Kishikawa H., Isomi S., Kisanuki K., Ohkubo Y., Miyamura N., Miyata T., Yano T. and Shiciri M.Diabetologia. – 1994. – 37. – Р. 300-307.

75. Van Sande M., Hendriks D., Soons J., Scharpe S., Wevers R., Holmquist B. Post synthetic modificati-on of CK-MM by kininase I // Adv. Exp. Med. Biol. –1989. –247A. –P. 319– 324.

76. Wevers R.A., Boegheim J.P., Hommes O.R., Van Landeghem A.A., Mul-Steinbusch M.W., Van der Stappen J.W., Soon J.B. A study on post-synthetic modification in alpha-alpha enolase brought about by a human serum prtotein // Clin. Chem. Acta. – 1984. –139. – P. 127-135.

содержание   ..  765  766  767   ..