ФГОУ ВПО «АСТРАХАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Глава 1. Галофильные микроорганизмы, их разнообразие и применение в промышленности.

Глава 2. Объекты и методы исследования.

Глава 3. Результаты исследования

Хлориды	233,97 г/л
Общая минерализация	383,652 г/л
Жесткость	2400 мгэкв/л
рН	6

№	Культуральные признаки	Число колоний	Морфологические признаки	Предположительный род
1	Колонии круглой формы, с гладкими краями, блестящей поверхностью, слизистой консистенции, светло-коричневого цвета	106	Г- длинные бесспоровые палочки, 1,0-3,0*2,0-3,0 мкм	р. Haloferax
2	Колония амебовидной формы с волнистым краем, изогнутый профиль, блестящая, тянущейся консистенции, зернистая, молочного цвета с темно-коричневыми включениями	251	Кокки, 0,8-1 мкм, виде скоплений неправельной формы.	р.Halococcus
3	Колония круглой формы с валиком по краю, края ровные, профель изогнутый, блестящая, слизистой консистенции, молочного цвета, по краю переходящего в коричневый.	128	Г+ бесспоровые палочки, 1,0-1,2*1,0-3,0 мкм.	р.Halobacterium
4	Колонии круглые, выпуклые, блестящие, слизистой консистенции, светло-серого цвета.	956	Г+ споровые палочки, 1,3-2,1*1,5-3,0 мкм	Bacillus
5	Колонии круглые, глянцевые, с не ровными краями, выпуклые, зернистые, желтого цвета	26	Г+ короткие палочки, объединенные в цепь, спорообразующие	Bacillus
6	Колонии неправильной формы, зернистые, глянцевые, желтого цвета	3	Г+ кокки, 1,2-1,6 мкм, объединенные в не длинные цепочки	Streptococcus
7	Колонии неправильной формы, плоские, кожистые, серого цвета	23	Г- необразующие палочки, 1,3-1,6*1,8-2,3 мкм	Providencia
8	Колонии темно-бурого цвета, точечные, глянцевые	15	Г- кокки, 1,3-15*1,6-1,9 мкм	Pseudomonas

№	Культуральные признаки	Число колоний	Морфологические признаки	Предположительный род
9	Точечные колонии, матовые, плоские, серого цвета.	33	Г- длинные неправильной формы бесспоровые палочки, 1,0-3,0*2,0-3,0 мкм	Pseudomonas
10	Колонии выедающие агар	Г+ бесспоровые палочки, 1,3-2,1*1,5-3,0 мкм	Halobacterium
11	Колонии точечные, глянцевые, выпуклые, оранжевого цвета	128	Г+ кокки, 0,5-2,0 мкм, образующие скопления не правильной формы	Micrococcus
12	Колонии круглые с неровными краями, плоская, жидкой консистенции, молочного цвета	21	Г+ бесспоровые палочки, слегка изогнутые	Bacillus
13	Колонии круглые с неровными краями, зернистая, темно-коричневого цвета в центре, по краю светлые	15	Г- бесспоровые палочки, изогнутые, 1,2-1,5*2,4-2,7 мкм	Pseudomonas

№	Культуральные признаки	Число колоний данного типа	Морфологические признаки	Предположительный род
14	Колонии круглой формы, с гладкими краями, блестящей поверхностью, слизистой консистенции, выпуклый профиль, серого цвета	98	Г- бесспоровые палочки, 0,5-1,3*1,0-4,2 мкм	Pseudomonas
15	Колония круглой формы, размером не более 0,5 см, края ровные, профель выпуклый, блестящая, слизистой консистенции, серого цвета,	962	Г+ кокки, 0,7-1,5 мкм, одиночные или в парах,	Providencia
16	Колонии точечные, круглые, выпуклые, блестящие, слизистой консистенции, оранжевого цвета.	956	Г+ кокки, 1,0-2,3 мкм,	Micrococcus
17	Колонии круглые, с ровными краями, плоские, глянцевые, темно-коричневого цвета	214	Г+ споровые палочки, 0,8-1,2*1,3-1,6 мкм	Bacillus

Группа микроорганизмов	Количество микроорганизмов в воде оз.Мраморное, КОЕ/мл	Количество микроорганизмов в воде микроэкосистемы оз.Мраморное, КОЕ/мл
Сапрофиты	1,9*104	9,3*104
Олиготрофы	50	1,3*102
Плесневые грибы	120	2,3*103
Дрожжи	3,3*102	­-

ПРИЛОЖЕНИЕ

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ СИСТЕМНЫ

ИНСТРУКЦИЯ

по применению пластины биохимической, дифференцирующей энтеробактерии «П Б Д Э»

ПБДЭ - система одноразового использования для дифференциации микроорганизмов семейства энтеробактерии.

ПБДЭ позволяет определить следующие биохимические свойства: утилизацию цитрата натрия, как в присутствии сахара (модификация цитратной среды Христенсена), так и без него (модификация цитратной среды Симмонса), малоната натрия, глюкозы лактозы, маннита, сахарозы, инозита, сорбита, арабинозы, мальтозы, образование индола сероводорода, ацетилметилкарбинола (реакция Фогес-Проскауэра), наличие уреазы, β-галактозидазы, декарбоксилаз орнитина и лизина, дегидролазы аргинина, дезаминазы фенилаланина.

ПБДЭ представляет собой панель с 20 конусообразными лунками, на дно которых нанесены соответствующие субстраты с индикатором, стабилизированные поливиниловым спиртом. Панель закрывается крышкой Панель и крышка изготовлены из полистирола.

Субстраты с индикаторами вносят в лунки в жидком виде, затем высушивают и стерилизуют.

Биологические свойства. Специфическое действие препарата заключается в возможности дифференцировать энтеробактерии на основе определения ферментативных систем по их действию на соответствующие субстраты.

Назначение. Пластина биохимическая -дифференцирующая, энтеробаетери предназначена, для определения ферментативной активности микроорганизмов семейства Еnterobacteriaceae, выделяемых в ходе бактериологического исследования, и идентификации представителей данного семейства до вида.

Способ применения

1. Приготовление растворов

Фосфатно-буферный раствор (ФБР) рН 6.0-6,2 - для приготовления суспензии исследуемых образцов. Содержимое флакона с сухими компонентами ФБР растворяют в 100,0 мл дистиллированной воды.

Стерилизуют автоклавированием 30 мин при 0,5 атм, концентрацию водородных ионов рН контролируют на иономере универсальном.

Хлорид железа - для выявления наличия фенилаланиндезаминазы. Содержимое флакона растворяют в 1,8 мл дистиллированной воды

Парадиметиламинобензальдегид - для обнаружения индолообразования. Для приготовления реактива Эрлиха навеску растворяют в 1,9 мл 96% этилового спирта, а затем добавляют 0,4 мл 33% соляной кислоты

α-нафтол - для обнаружения образования ацетилметилкарбинола. Содержимое флакона растворяют в 2,38 мл 96% этилового спирта. Готовят ех tеmроrе.

Калия гидроокись - для обнаружения образования ацетилметилкарбинола. Содержимое флакона растворяют в 1,2 мл дистиллированной воды.

2. Подготовка исследуемых образцов

Перед проведением исследования выделенная культура подлежит изучению на чистоту и принадлежность к семейству Еnterobacteriaceae.

Идентификацию культур, выделяемых непосредственно из нативного материала, производят со скошенного мясо-пептонного агара или со среды Олькеницкого. Используют культуры, выращенные в течение 18-24 ч при температуре 37°С, без предварительного подращивания их на мясо-пептонном бульоне.

Если выделенная культура микроорганизма находилась какое-либо время на хранении при комнатной температуре или в холодильнике, производят предварительный посев ее на мясо-пептонный бульон на 2-4 ч при. Температуре 37°С, затем осуществляют пересев культуры на скошенный мясо-пептонный агар. Посевы инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 37 °С.

Культуру с мясо-пептонного агара или среды Олькеницкого используют для приготовления суспензии в фосфатно-солевом буферном растворе рН 6,0-6,2 и доводят мутность суспензии до 10 единиц по отраслевому стандартному образцу мутности бактерийных взвесей, стеклянному.

При отсутствии отраслевого стандартного образца в 4,0 мл стерильного фосфатно-солевого буферного раствора вносят исследуемую (2-3 петли) культуру до образования видимой мутности.

Проведение исследования

1. Вскрывают упаковку.

2. Регистрируют на крышке панели номер засеваемого штамма.

3. Открывают крышку и располагают панель на столе.

4. Добавляют пипеткой по 0,15 мл микробной суспензии во все лунки панели, кроме лунки для

обнаружения сероводорода (№ 11), куда вносят только одну каплю (0,05 мл) суспензии.

5. Заливают лунку для обнаружения сероводорода (№ 11) 0,1 мл растопленного и охлажденного до температуры (38-40) °С мясо-пептонного агара, содержащего 0,6% агара микробиологического, и быстро все перемешивают концом раскапывающей пипетки.

6. Для создания анаэробных условий добавляют 1-2 капли стерильного вазелинового масла в лунки для определения лизиндекарбоксилазы (№ 4), аргининдегидролазы (№ 5), орнитиндекарбоксилазы (№ 6), уреазы (№ 10) и образования сероводорода (№ 11)

7. Закрывают крышку панели.

8. Выдерживают ПБДЭ в течение 18-24 ч при температуре 37 °С.

Учет результатов. Учет результатов производят визуально в соответствии с цветовым указателем, приложенным к ПБДЭ, через 18-24 ч инкубации при температуре 37 °С, за исключением теста на обнаружение β-галактозидазы, который проводят дважды: через 3-5 ч и через 18-24 ч, т.к. у некоторых штаммов лимонно-желтое окрашивание через 18-24 ч исчезает.

Через 18-24 ч инкубации открывают крышку панели и в лунку для выявления фенилаланиндезаминазы (№ 7) добавляют 1 каплю 10 %-го раствора хлорида железа (железо треххлористое 6-водное), в лунку для определения ацетилметилкарбинола (№ 9) 1 каплю 6%-го раствора а-нафтола и затем 1 каплю 40%-го раствора гидроокиси калия, в лунку для выявления индола (№ 8) - 1-3 капли реактива Эрлиха. Реакции учитывают немедленно, выявление ацетилметилкарбинола осуществляют через 15-20 мин после закапывания реактивов.

Идентификацию культур микроорганизмов осуществляют с использованием таблицы биохимических свойств энтеробактерий, диагностического «ключа», каталога кодов - пособия для интерпретации результатов идентификации с использованием математического метода классификации.

Цветовой указатель

Группа микроорганизмов	Рода микроорганизмов в воде оз.Мраморное	Рода микроорганизмов в воде микроэкосистемы оз.Мраморное
Сапрофиты	Pseudomonas Providencia	Pseudomonas
Олиготрофы	Halobacterium	Halobacterium
Плесневые грибы	Aspergillus	Aspergillus

Тесты	Цвет среды в растворенном виде	Положительная реакция	Отрицательная реакция
1	Утилизация цитрата натрия	желтый, светло-зеленый	темно-зеленый, синий	желтый, светло-зеленый
2	Утилизация малоната натрия	желтый	темно-зеленый, синий	желтый, светло-зеленый
3	Утилизация цитрата натрия с глюкозой	желтый коричневый	фиолетовый, бурый	желтый, коричневый
4	Наличие лизиндекарбоксилазы	желтый, светло-зеленый	темно-зеленый, синий	желтый, светло-зеленый
5	Наличие аргининдегидролазы	Желтый, светло-зеленый	темно-зеленый, синий	желтый, светло-зеленый
6	Утилизация орнитиндекарбоксилазы	Желтый, светло-зеленый	темно-зеленый, синий	желтый, светло-зеленый
7	Наличие фенилаланиндезаминазы	бесцветный	темно-зеленый	желтый
8	Образование индола	бесцветный	розовый	бесцветный
9	Образование ацетилметилкарбинола	бесцветный	розовый, малиновый	бесцветный
10	Наличие уреазы	желтый	малиновый, красный	желтый
11	Образование сероводорода	бесцветный	черный, темно-серый	желтый
12	Утилизация глюкозы	красный	желтый	красный
13	Наличие β-галактозидазы	бесцветный	лимонно-желтый	бесцветный
14	Утилизация лактозы	красный	желтый	красный
15	Утилизация маннита	красный	желтый	красный
16	Утилизация сахарозы	красный	желтый	красный
17	Утилизация инозита	красный	желтый	красный
18	Утилизация сорбита	красный	желтый	красный
19	Утилизация арабинозы	красный	желтый	красный
20	Утилизация мальтозы	красный	желтый	красный

Обезвреживание ПБДЭ Погружением (полным) на 60 мин в 3% раствор хлорамина Б или 6% раствор перекиси водорода с 0,5% СМС.

Форма выпуска. Выпускается в наборе, состоящем из 20 пластин в герметично запаянном пакете, 1 флакона с 0,95 г сухих компонентов ФБР рН 6,0-6,2, 1 флакона с 0,2 г хлорида железа (III), 1 флакона с 0,02 г парадиметиламинобензальдегида. 1 флакона с 0,8 г калия гидроокиси, 1 флакона с 6,12 г а-нафтола, 1 флакона с 8,0 г масла вазелинового, инструкции по применению, диагностического «ключа», таблицы биохимических свойств энтеробактерий и 20 штук кодовых карточек. Набор тест-системы упакован в коробку. По просьбе потребителей к набору может быть дополнительно приложен каталог кодов.

Условия хранения и транспортирования. Транспортирование и хранение препарата в защищенном от света месте при температуре от 2 до 25^○ С.

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  601  602  603   ..