Антибиотики. Методы определения чувствительности к антибиотикам - часть 4

Лекарственная устойчивость

•

Лекарственная устойчивость микроорганизмов

нередко носит индуцибельный характер, т.е.

экспрессия генов устойчивости происходит лишь

после контакта клетки с антимикробным агентом.

Примером этого являются частые случаи

образования инактивирующего фермента после

контакта культуры бактерий с бета-лактамным

антибиотиком.

Лекарственная устойчивость

Лекарственная устойчивость микроорганизмов обусловлена

следующими основными механизмами:

•

ферментативной инактивацией антимикробного агента,

•

ослаблением его проникновения внутрь клетки возбудителя,

•

изменением конформации внутриклеточной мишени для

антимикробного агента, что препятствует его взаимодействию

с мишенью,

•

образованием повышенного количества молекул мишени, на

которую действует данный антимикробный агент.

Лекарственная устойчивость

v

В качестве инактивирующих ферментов известны

представители

гидролаз

:

бета-лактамазы, катализирующие расщепление бета-лактамного

кольца у пенициллинов, цефалоспоринов и других бета-

лактамов (монобактамов, карбапенемов и т.д.),

эстеразы, воздействующие на эритромицин и некоторые другие

антибиотики близкой к нему структуры.

v

Другая группа инактивирующих ферментов —

трансферазы

.

К ним принадлежат левомицетин- (хлорамфеникол-)-

ацетилтрансферазы, аминогликозидацетил, фосфо- или

аденилилтрансферазы и фосфотрансферазы, воздействующие

на эритромицин

Определение бета-лактамазной активности

•

Среда с пенициллином и индикатором фенолрот после

инкубирования с чистой культурой бактерий. Желтый цвет –

положительный результат, красный - отрицательный

Ингибиторы бета-лактамаз

•

Ингибиторы бета-лактамаз представляют собой бета-лактамные структуры,

которые необратимо связываются с ферментами, сами при этом разрушаясь,

вследствие чего они получили название суицидных ингибиторов. В настоящее

время клиническое значение имеют три таких ингибитора: клавулановая

кислота (клавуланат) и два производных пенициллановой кислоты —

сульбактам и тазобактам.

•

Они входят в состав комбинированных препаратов, содержащих

пенициллиновый антибиотик (ампициллин, амоксициллин, пиперациллин,

тикарциллин) и один из ингибиторов β-лактамаз. Такие препараты получили

название ингибиторозащищенных пенициллинов

(АМОКСИЦИЛЛИН/КЛАВУЛАНАТ (КО-АМОКСИКЛАВ)=Аугментин, Амоксиклав;

АМПИЦИЛЛИН/СУЛЬБАКТАМ=Уназин, Сулациллин;

ТИКАРЦИЛЛИН/КЛАВУЛАНАТ=Тиментин;

ПИПЕРАЦИЛЛИН/ТАЗОБАКТАМ=Тазоцин

•

Применяется также комбинация цефалоспорина III поколения цефоперазона с

сульбактамом (сульперазон).

Примеры комбинированных препаратов

•

АМОКСИЦИЛЛИН (AMOXICILLIN); КЛАВУЛАНОВАЯ КИСЛОТА

Сультамициллин:двойной эфир 

ампициллина (полусинтетического 

пенициллина) и сульбактама 
(ингибитора бета-лактамаз). 

Действует бактерицидно. 

Принцип диско-диффузионного метода

определения чувствительности к

антибиотикам

Бактериальную культуру засевают 

газоном на питательный агар, после чего на 

его поверхность пинцетом помещают на 

равномерном расстоянии друг от друга 

бумажные диски, содержащие 

определенные дозы разных антибиотиков. 

Посевы инкубируют при 37 0 С в течение 

суток. По диаметру зон задержки роста 

культуры судят о ее чувствительности к 

соответствующим антибиотикам. При зоне 

задержки роста до 15 мм культура 

расценивается как нечувствительная или 

низко чувствительная, 15 – 24 мм – средняя 

чувствительность, 25 мм и более –

высокочувствительная.

Ход исследования:

•

Приготовить взвесь ЧК м/о

•

Сравнить с 0,5 по Мак –Фарленду (стандарт мутности взвеси бактерий)

•

Чашку со средой Мюллер- Хинтона засеять ЧК

•

Уложить диски не более 6

•

Инкубировать в термостате 18 – 24 часа

•

Прочесть и зафиксировать результат

Работа с диспенсером

n

Быстрее и удобнее использовать диспенсер 
для дисков

Работа с диспенсером

Чтение результатов

Октодиски

•

Измерение зон ингибирования антибиотиками

ProtoCOL2 Zone

Функциональные возможности:

- Определение чувствительности бактерий к

антибиотикам (измерение зон ингибиции роста

штамма вокруг диска с антибиотиком)

- Автоматический учет результатов

- Архивирование данных

- Выдача результатов на бланке

- Автоматическое определение зон ингибиции

роста тест - штамма при изучении активности

антибиотиков в сырье, фарм. препаратах, а

также биологически активных веществ на

стадии доклинических испытаний

- Автоматический анализ результатов (замер

диаметров зон преципитации) при

исследовании иммуноглобулинов методом

радиальной иммунодиффузии (по Манчини).

- Автоматический пересчет числа колоний

бактерий с учетом разведения пробы

Определение чувствительности к антибиотикам методом

серийных разведений.