Бактериологический анализ и устойчивость к антибиотикам у пациентов с подозрением на сепсис в Дакке, Бангладеш (2025)

Декларация

Настоящим заявляется, что

1. Представленная диссертация называется«Бактериологический анализ и устойчивость к антибиотикам у пациентов

с подозрением на сепсис в Дакке, Бангладеш»это наша собственная оригинальная работа, в то время как

получение степени в Университете Брач.

2. Диссертация не содержит материалов, ранее опубликованных или написанных третьим лицом, за исключением

где это надлежащим образом цитируется посредством полной и точной ссылки.

3. Диссертация не содержит материалов, которые были приняты или представлены для какой-либо другой

степень или диплом университета или другого учебного заведения.

4. Мы признали все основные источники помощи.

Полное имя и подпись студента:

Афсана Ахмед Сохана

Фахмида Ахмед

20226001

21326039

Маханаз Мама Тарин Сприха

20326015

Одобрение

Диссертация под названием«Бактериологический анализ и устойчивость к антибиотикам у пациентов с

подозрением на сепсис в Дакке, Бангладеш.представлено

1. Афсана Ахмед Сохана (20226001)

2. Фахмида Ахмед (21326039)

3. Маханаз Мум Тарин Сприха (20326015)

Весной 2025 года был признан удовлетворительным в качестве частичного выполнения требования к

степени бакалавра наук по микробиологии осенью 2024 года.

Экзаменационная комиссия:

_______________________________

Руководитель:

Фахим Кабир Монджурул Хак, доктор

(Член)

философии, доцент кафедры микробиологии

и математики и естественных наук

Университет Брача

_______________________________

Координатор программы:

Надя Султана Дин, доктор

(Член)

философии, доцент кафедры микробиологии

и математики и естественных наук

Университет Брача

Начальник отдела:

_______________________________

(Стул)

Мд. Фирозе Х. Хак, доктор философии,

доцент и заведующий кафедрой

математики и естественных наук

Университет Брача

Заявление об этике

Данное исследование проводилось в строгом соответствии с высочайшими этическими стандартами в области исследований. Кровь

Образцы были взяты у пациентов в четырех отделениях больницы Исламского банка в Дакке,

Бангладеш, с полным соблюдением установленных этических норм. Было запрошено этическое одобрение и

предоставленных наблюдательными советами всех четырех отделений больницы до начала исследования.

Эти институциональные наблюдательные советы тщательно рассмотрели и одобрили протоколы исследований

обеспечить соответствие Национальным рекомендациям по исследованиям в области здравоохранения и Международным

Руководство по этическим соображениям в исследованиях.

Кроме того, исследование прошло проверку и получило одобрение Комитета по этике и исследованиям.

Ревизионная комиссия факультета математики и естественных наук MNS в BRAC

Университет Дакки, Бангладеш. Исследование проводилось под руководством доктора Фахима.

Кабир Монджурул Хак, все аспекты исследования соответствуют изложенным этическим принципам

Университетом BRAC.

До сбора образцов у пациентов было получено информированное согласие. Пациенты были

полностью информированы о целях исследования, используемых процедурах, потенциальных рисках и

Преимущества. Конфиденциальность данных и анонимность пациентов строго соблюдались.

персональные идентификаторы удаляются в ходе анализа данных.

Эта надежная этическая структура обеспечивает целостность и достоверность исследования, гарантируя его соблюдение.

международно признанные нормы и принципы этических исследований.

Подтверждение

Мы хотели бы начать с выражения нашей глубочайшей благодарности Всевышнему Аллаху за то, что Он даровал нам

Возможность провести и завершить это исследование. Мы выражаем искреннюю благодарность нашим родителям, чьи

Неизменная поддержка была неоценима с самого начала и до завершения этого исследования.

Мы также выражаем глубокую благодарность заведующему кафедрой математики и естественных наук

Науки,Мд. Фирозе Х. Хаки всем преподавателям Университета BRAC за их

Постоянная поддержка. Особая благодарность нашему руководителю,Доктор Фахим Кабир Монджурул Хак,

Доцент кафедры микробиологии кафедры математики и естественных наук

Науки, Университет BRAC. Его экспертное руководство, конструктивные отзывы и неизменная поддержка.

имели решающее значение для успеха этого исследования. Эта работа не раскрыла бы весь свой потенциал.

без его преданного наставничества и проницательной критики.

Наконец, я хочу выразить свою искреннюю признательность моему наставнику,Фахим Фейсал Накиб, для его

Постоянное чёткое руководство и наставления. Его руководство помогло мне облегчить и направить путешествие.

одновременно просветляя и обогащая опыт.

Абстрактный

Целью нашего исследования было выделение бактерий из крови пациента с сепсисом и последующий анализ их

профиля антибиотикорезистентности. Мы собрали 80 образцов крови из четырех различных отделений больницы

Исламского банка (Мирпур, Какрайл, Мотиджхил и Наяпалтан) в Дакке, Бангладеш. Выделение одной бактериальной

колонии из чашки Петри с селективной питательной средой. Затем, основываясь на морфологии колоний, мы

отобрали бактериальные колонии и пересеяли их для предположительной идентификации. Подтверждение их

идентичности проводилось с помощью биохимических тестов (тест на каталазу, тест на оксидазу) и молекулярного

теста (полимеразная цепная реакция) с последующим гель-электрофорезом (для визуализации размера полосы

целевых микроорганизмов). Из 80 образцов 66 были положительными по посеву. Из положительных посевов 65,2%

былиСальмонелла брюшного тифа, 13,6% былиКлебсиелла пневмонии, 12,1% былиКишечная палочка, и 9,1%

былиЗолотистый стафилококк. 22% были грамположительными и 77% - грамотрицательными. Для тестов на

чувствительность к антибиотикам (AST) мы выбрали один изолят из каждого образца с положительным результатом

посева. Всего 8Кишечная палочка, 43Сальмонелла брюшного тифа, 9 Клебсиелла пневмонии, и 6Золотистый

стафилококкБыли отобраны изоляты и проведено определение чувствительности к антибиотикам (AST) с помощью

диско-диффузионного метода Кирби-Бауэра. Мы обнаружили, что от 90% до 100% Сальмонелла брюшного тифа

Изоляты 89% и 79% были устойчивы к налидиксовой кислоте и ампициллину соответственно. 68%, 79% и 39%

Клебсиелла пневмонииИзоляты были устойчивы к амоксициллину, цефиксиму и эритромицину соответственно.

69% и 80% всехКишечная палочкаИзоляты были устойчивы к амоксициллину и цефиксиму соответственно, а 28%

изолятов были устойчивы к азитромицину, ципрофлоксацину, имипенему, цефтриаксону. 49% всехЗолотистый

стафилококкИзоляты были устойчивы к цефиксиму, сульфаметоксазолу и цефтазидиму, 28% - к эритромицину и

цефтриаксону, а 19% - к имипенему и гентамицину. В данном исследовании было выявлено 18 изолятов с

множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), включая 7.Сальмонелла брюшного тифа, 6Клебсиелла

пневмонии, 2Кишечная палочка, и 3Золотистый стафилококкштаммов. Среди них 3 изолята были дополнительно

классифицированы как штаммы с широкой лекарственной устойчивостью (XDR), включая 1Сальмонелла брюшного

тифа, 1Клебсиелла пневмонии, и 1Золотистый стафилококкизолировать.

Ключевые слова:Септицемия,Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Staphylococcus aureus,

Множественная лекарственная устойчивость (МЛУ), широкая лекарственная устойчивость (ШЛУ).

Список рисунков:

Номер рисунка

Название рисунка

Номер страницы

Различные бактериальные колонии на различных селективных средах

2.4

Различные типы биохимических тестов

2(а).

Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаКлебсиелла

пневмонииизоляты

2(б).

Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаЗолотистый

стафилококкизоляты

2(с).

Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаСальмонелла брюшного тифа

изоляты

2(г).

Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаКишечная палочка

изоляты

Распространенность изолированных возбудителей у пациентов с сепсисом на основе

положительных результатов

4(а).

Профилирование чувствительности к антибиотикамСальмонелла брюшного тифа

положительные изоляты

4(б).

Профилирование чувствительности к антибиотикамКлебсиелла пневмонии

положительные изоляты

4(с).

Профилирование чувствительности к антибиотикамКишечная палочка

положительные изоляты

4(г).

Профилирование чувствительности к антибиотикам

Золотистый стафилококкположительные изоляты

ГЛАВА 1

1.1: Введение

Сепсис - это опасное нарушение функции органов, вызванное иммунным ответом на инфекцию. Поэтому он

является одной из основных причин смерти, особенно в странах с низким уровнем дохода, таких как Бангладеш. В

развивающихся странах, таких как Бангладеш, Индия или Пакистан, основными причинами инфекции являются

малярия, пневмония и диарея. Здесь сепсис доминирует из-за более высокого уровня недоедания, нехватки

сертифицированных врачей, слабой инфраструктуры здравоохранения и позднего выявления сепсиса. Без лечения

сепсис может проявляться в более тяжелых формах, таких как септический шок, полиорганная недостаточность и, в

конечном итоге, смерть. Именно поэтому важно выявлять сепсис как можно раньше. Нам также необходимо больше

информации для разработки наиболее подходящего метода лечения для каждого случая сепсиса (Garbern et al.,

2024). В настоящее время специальные колориметрические методы позволяют выявлять септицемию на ранних

стадиях, отслеживая особые биомаркеры в крови. Это очень важное открытие для медицинской науки, поскольку

жизнь пациента зависит от скорейшего начала лечения (Dashtian et al., 2024)..Это было подтверждено обзором 42

исследований, в которых приняли участие 19 000 и более пациентов. Все результаты подтверждают, что риск смерти

от септицемии снижается на 16%, если пациенты получают лечение в течение первых 3 часов после постановки

диагноза. По истечении этого времени риск смерти увеличивается на 30%. Результаты опубликованы в Европейском

журнале международной медицины (Leung et al., 2024). Однако, к сожалению, устойчивость к антибиотикам растёт

(подтверждено Всемирной организацией здравоохранения). Это серьёзное препятствие для лечения (Baral et al.,

2024). Большинство возбудителей септицемии уже устойчивы к широко используемым антибиотикам. Например,

исследование, проведённое в Турции, показало, что смерть 48% инфицированных пациентов вызвана

грамотрицательным сепсисом. Инфекции, вызванные метициллин-резистентными Золотистый стафилококк

вызывают 36% смертей. Устойчивые к карбапенемам патогены могут унести в среднем 60% жизней пациентов (Gucer

et al., 2024). Другое исследование в Эфиопии показало, что 89% нозокомиальных патогенов уже устойчивы к

нескольким препаратам (например, ампициллину или амоксициллину). Среди них 34,7% устойчивы к карбапенемам,

а 46,3% - к бета-лактамам (Tilahun et al., 2024). Эта статистика вызывает беспокойство. Поэтому эти патогены требуют

тщательного изучения. Необходимо разработать соответствующие антибиотики, которые остановят их рост, чтобы

замедлить или, по возможности, обратить вспять развитие антибиотикорезистентности (Baral et al., 2024). Даже в

Бангладеш пытаются разработать надлежащие планы лечения сепсиса. Эксперты из других стран также пытаются

найти решения в нашей стране, например, доктор Стефани Гарберн из Университета Брауна, США. Она в основном…

Она изучала детей, страдающих сепсисом, в странах с низким и средним уровнем дохода. Она даже работала с инженерами и

местными врачами над разработкой эффективного диагностического устройства. Устройство также было обучено с помощью

алгоритма машинного обучения, который может собирать данные пациента (частоту сердечных сокращений, уровень кислорода и т.

д.). После этого ИИ может обнаруживать ранние симптомы сепсиса, которые врачи могут ошибочно принять за лихорадку или

простуду. Она использовала только недорогие и доступные инструменты, чтобы доступ к ним был доступен и бедным, и среднему

классу (Garbern et al., 2024). Тем не менее, важно найти экономически эффективные способы диагностики и лечения сепсиса в стране

третьего мира, такой как Бангладеш.

Несмотря на открытие передовых методов лечения сепсиса, антибиотики являются стандартным планом лечения, поскольку

они напрямую воздействуют на патогены, которые являются основными возбудителями болезни. Именно поэтому мы

почувствовали необходимость провести это исследование - найти идеальный антибиотик для уничтожения каждого

патогена. Но антибиотики теряют свою эффективность из-за некоторых недобросовестных методов в нашей системе

здравоохранения. Использование антибиотиков в Бангладеш в значительной степени не регулируется, особенно в сельской

местности. Без диагноза фармацевты и врачи выписывают клиентам несколько антибиотиков без диагноза. Эти продавцы

антибиотиков не знают рекомендаций по применению антибиотиков. Кроме того, пациенты не принимают свои лекарства в

течение всего предписанного времени, что дает бактериям время для развития генов устойчивости к антибиотикам (Бепари

и др., 2023).Были проведены обширные исследования этой модели возникновения. В обзорной статье анализируются 46

исследований, проведенных с 2014 по 2018 год, которые показывают высокую распространенность устойчивости к

антибиотикам среди распространённых патогенов (Ahmed et al., 2019).

Учитывая растущую устойчивость к антибиотикам, крайне важно проводить регулярные исследования для

выявления бактерий, вызывающих сепсис у пациентов в Бангладеш, и оценки их антибиотикорезистентности. Это

помогает отслеживать динамику антибиотикорезистентности. Кроме того, это предоставит врачам и органам власти

информацию для разработки стратегий лечения, позволяющих назначать эффективные антибиотики пациентам с

сепсисом.

1.2: Цели

Целью данного исследования было выделение бактерий, вызывающих септицемию, у пациентов с

подозрением на септицемию в городе Дакка и анализ их профилей устойчивости к антибиотикам.

ГЛАВА 2

Материалы и методы

2.1 Дизайн исследования

Исследование проводилось среди пациентов с клиническим подозрением на сепсис, госпитализированных в

больницы Дакки, Бангладеш. Образцы крови были собраны в четырёх отделениях больниц Исламского банка:

Мирпур, Мотиджхил, Какрайл и Ная Палтан. В этих отделениях было собрано 80 образцов. Сбор образцов

крови проводился с декабря 2024 года по апрель 2025 года. Образцы крови брались у пациентов разных

возрастных групп и обоих полов, госпитализированных в различные отделения, включая отделение

интенсивной терапии (ОИТ), терапевтическое, педиатрическое и отделение неотложной помощи. Перед

сбором образцов было получено письменное согласие как от пациентов, так и от их законных

представителей.

2.2 Сбор образцов

Образцы венозной крови брались у пациентов с клинически подтверждённой септицемией при поступлении в

больницы, выбранные для исследования. Для получения образцов крови использовались стерильные одноразовые

шприцы и иглы, взятые профессиональными специалистами. Перед началом антибактериальной терапии у каждого

пациента брали около 2-3 мл крови. Кровь немедленно помещали в пробирку с гепарином и доставляли в

микробиологическую лабораторию в герметичном контейнере со льдом (4 °C). Образцы соответствующим образом

маркировали, указывая идентификационный номер пациента, дату, имя, пол и место пребывания пациента в

помещении/на улице. После сбора образцы доставляли в микробиологическую лабораторию в течение 1-2 часов

(Nursing et al., 2023).

2.3 Культивирование для выделения бактерий

По прибытии в лабораторию каждый образец крови немедленно обрабатывался для обеспечения

целостности микробного состава. 100 мкл образца крови асептически распределялись по

различным питательным средам. Это осуществлялось с помощью стерильной микропипетки и

спредера в условиях ламинарного потока для минимизации контаминации. Выбранные типы сред

включая Макконки (MAC), ксилозо-лизин-дезоксихолат (XLD), эозин-метиленовый синий (EMB), маннит-

солевой агар (MSA),HiCrome™ ИМП,Агаровая среда HiCrome™ KPCЗатем их инкубировали при 37°C и

проверяли через 5-7 дней на наличие признаков роста микроорганизмов, таких как изменение цвета среды и

колоний. После семи дней инкубации проводили посев на чашки Петри, если наблюдался какой-либо рост.

Положительные культуры, демонстрирующие признаки роста, пересевали на селективные и

дифференциальные среды, такие какСальмонелла брюшного тифанаАгаровая среда SS,XLD средний,

Кишечная палочкана агаре ЭМБ,Агар HiCrome™ UTI,клебсиелла пневмониина КПК, Золотистый стафилококкна

Маннит-солевой агар. Таким образом, ожидаемая морфология колоний этих организмов показала,Таблица 1.

В течение 18-24 часов чашки Петри инкубировали при температуре 37 °C, и наблюдали за видимыми

бактериальными колониями, что было показано вРисунок 1.

Таблица 1: Желаемая морфология колоний изолированных бактерий

Организм

Грамм

СМИ

Ожидаемая колония

Положительный/Отрицательный

Морфология

Золотистый стафилококк

грамположительные

Желто-белые колонии

Маннит-солевой агар

окруженный желтой

зоной

Клебсиелла пневмонии

Грамотрицательные

Агар HiCrome UTI

Синий, слизистый

Клебсиелла пневмонии

Грамотрицательные

Агар HiCrome KPC

Голубовато-зеленый

Кишечная палочка

Грамотрицательные

Агар HiCrome UTI

Фиолетовые колонии

Кишечная палочка

Грамотрицательные

ЭМБ-агар

Фиолетовый с черным центром и

зеленым металлическим блеском

Сальмонелла Шигелла

Сальмонелла брюшного тифа

Грамотрицательные

Агар

Бесцветный с черным центром

Ксилоза-Лизин-

Сальмонелла брюшного тифа

Грамотрицательные

Красный с черным центром

Дезоксихолатный агар

Рисунок 1:Различные бактериальные колонии на различных селективных средах. (А)Сальмонелла

брюшного тифадал черный центр наагар XLD,(Б)Кишечная палочкапоказывает зеленый металлический

блеск на агаре EMB, (С) Золотистый стафилококкдает желтые колонии на MSA, (Д)Кишечная палочкадал

фиолетовую колонию на HiCrome UTI Agar, (Э)Клебсиелла пневмониидал синюю колонию на HiCrome

KPC Agar и, наконец (Ф)Кишечная палочкас фиолетовой колонией&Клебсиелла пневмонии с синими

колониями, которые отличают их на средах МТИ.

2.4 Биохимические тесты

Для анализа метаболических и ферментативных свойств выделенных организмов были проведены биохимические

исследования. В ходе исследования были проведены тесты на каталазу и оксидазу.Staphylococcus aureus, Escherichia

coli, Salmonella typhi и Klebsiella pneumoniae.Таблица 2показаны результаты биохимического анализа выделенных

бактерий.

Метод определения каталазы:

1) Распределите бактерии по агаровой пластине и инкубируйте в течение ночи (18-24 часов) в соответствующих

условиях.

2) Используя стерильную инокуляционную петлю, выберите бактерии из одной колонии и перенесите их на предметное

стекло микроскопа.

3) После добавления к бактериям одной капли 3% H2O2 суспензия даст результат, будь он положительным

или отрицательным.

● Положительный результат теста:Газообразование (O2) в виде пузырьков показывает, что у бактерии есть

каталаза.

● Отрицательный результат теста:Нет образования газа (O2) в виде пузырьков.

Метод оксидазного теста:

1) Нанесите на лист фильтровальной бумаги две капли оксидазного реагента.

2) С помощью стерильной петли перенесите бактерии из одной колонии в зону с оксидазным реагентом. Результат можно

наблюдать через 30 секунд.

● Положительный результат теста:Изменение цвета на темно-сине-фиолетовый в течение 10-30 сек.

● Отрицательный результат теста:Нет изменения цвета или изменение цвета более чем через 30 секунд (VETBact,

нд).

2.5 Извлечение ДНК

ДНК была выделена с целью идентификации организма путем визуализации образования полос в геле-

электрофорезе с последующей ПЦР. Для выделения высококачественной бактериальной геномной ДНК была

приготовлена свежевыращенная субкультура с использованием богатой питательными веществами питательной

среды. В качестве базового раствора для лизиса клеток был приготовлен 1X буфер Трис-ЭДТА до начала процесса

выделения ДНК. Сначала пробирку Эппендорфа наполнили 400 мкл 1X буфера TE. Затем пробирку с буфером

инокулировали петлей бактериальной культуры. После этого образец тщательно перемешивали на вортексе для

тщательного смешивания буфера TE с бактериальными клетками в течение 15 секунд. Для осаждения бактериальных

клеток образец центрифугировали в течение 10 минут при 13 000 об/мин и 25 °C после начального перемешивания.

После центрифугирования надосадочную жидкость отбросили, и в пробирку Эппендорфа вместе с осадком добавили

400 мкл 1X буфера TE. Затем бактериальный осадок ресуспендировали, повторно встряхивая образец. Для

разрушения бактериальных клеток и высвобождения их геномной ДНК образцы подвергали термической обработке.

Пробирки выдерживали в течение десяти минут при температуре 100 °C в термоблоке. Клеточная стенка и мембрана

бактерий будут должным образом лизированы в результате термической обработки, высвобождая ДНК в раствор.

После термической обработки образцы оставляли остывать в течение пяти минут при комнатной температуре. Для

удаления из восстановленной ДНК остатков дебриса или биологических компонентов охлаждённые образцы

центрифугировали в течение 10 минут при 13 000 об/мин. После центрифугирования 200 мкл надосадочной

жидкости ДНК переносили в новую пробирку Эппендорфа. При этом соблюдали крайнюю осторожность, чтобы не

повредить осадок на дне пробирки во время переноса. Выделенная ДНК теперь присутствовала в надосадочной

жидкости, что делает её пригодной для дальнейшего исследования. Затем ДНК хранили при температуре -20 °C. При

использовании в ПЦР или секвенировании этот метод гарантировал эффективное извлечение высококачественной

ДНК из бактериальных клеток (Moore et al, 2005).

2.6 ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Для подтверждения идентичности бактериальных изолятов была проведена полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот молекулярный метод

использовался для выявления генетических последовательностей, специфичных для данного организма.

метод ПЦР

Цикл ПЦР проводят 25-40 раз для амплификации ДНК в зависимости от организма. Для начала процесса

ПЦР каждую реакционную смесь готовят в конечном объеме 13 мкл. Реакционная смесь включает 3 мкл

воды без нуклеаз, 1 мкл прямого праймера, 1 мкл обратного праймера, 6 мкл Emerald Amp PCR Master

Mix (Takara Bio Inc.) и 2 мкл ДНК-матрицы. Все компоненты осторожно добавляют в стерильные ПЦР-

пробирки. После приготовления пробирки аккуратно встряхивают на вортексе в течение 3-5 секунд для

тщательного смешивания реагентов. Затем смеси кратковременно центрифугируют для сбора

содержимого на дне пробирок перед загрузкой в термоциклер (Applied Biosystems 2720 Thermal Cycler).

ПЦР-амплификацию проводят в стандартизированных условиях циклирования. Обычно выполнялось

25-35 циклов амплификации, включающих денатурацию, отжиг праймеров и этапы удлинения, что

обеспечивало экспоненциальную амплификацию целевого участка ДНК. Общее время ПЦР составляло

от 1,5 до 3 часов в зависимости от протокола и длины целевого фрагмента ДНК. После завершения все

амплифицированные продукты ПЦР хранили при температуре -20°C для сохранения целостности

образцов для последующих применений, таких как гель-электрофорез или секвенирование (Lorenz,

2012).

Целевые гены и их праймеры:

Это исследование было сосредоточено на обнаружении генов, связанных с вирулентностью, специфичных дляКишечная

палочка,Клебсиелла пневмонии,Золотистый стафилококк, иСальмонелла брюшного тифаДля скрининга образцов крови на

наличие патогенных штаммов необходимо определить генетические маркеры, связанные с их патогенностью. Например,

эти четыре микроорганизма являются основными этиологическими агентами септицемии, каждый из которых обладает

своими собственными факторами вирулентности.Таблица 3Представлен список целевых генов и праймеров этих

организмов. Целью данного исследования было выявление этих бактериальных патогенов в образцах крови путём

воздействия на их специфические гены вирулентности, что способствовало бы лучшему пониманию микробных причин

септицемии.

Таблица 3: Список целевых генов и их праймеров

Имя

Праймер

Целевые гены

Последовательность праймера

Продукт

Условия ПЦР

Ссылки

бактерии

Обозначенный

(от 5′ до 3′)

uct

на

размер

Клебсиелла

КП пф-Ф

16S-23S рРНК

ATTTGAAGAGGT

130

Условия циклирования были

(Кот и др.,

пневмония

Внутренний

TGCAAACGAT

бп

следующими: 10 мин при 94 °C, затем

2023)

ае

Транскрибировано

35 циклов по 30 с при 94 °C, 20 с при

Проставка (ИТС)

57 °C и 20 с при 72 °C, затем 10 мин

окончательного удлинения при 72 °C.

КП пр1-Р

16S-23S рРНК

TTCACTCTGAAG

Внутренний

TTTTCTTGTGTTC

Транскрибировано

Проставка (ИТС)

Эшерих

ЭКО-Ф

malB(мальтоза

GACCTCGGTTTA

585

Начальная денатурация при 95°C в течение

(Линдси и др.)

кишечная палочка

оперон)

GTTCACAGA

бп

5 мин; 35 циклов денатурации при 94°C в

др., 2017)

течение 45 с, отжиг при 45°C в течение 45 с

и удлинение в течение 1 мин с

последующим конечным удлинением при

ЭКО-Р

malB(мальтоза

CACACGCTGACG

72°C в течение 5 мин.

оперон)

CTGACCA

Сальмонеллы

инвА

GTATTGTTGATT

403

Начальная денатурация при 95°C в

(Ранджбар и др.)

брюшной тиф

аФ

AATGACATCCG

бп

течение 5 мин; 35 циклов денатурации

др., 2016)

при 95°C в течение 30 с, отжиг при 60°C

в течение 30 с и удлинение в течение 1

мин при 72°C с последующим конечным

Сальмонеллы

инвА

АТАТТАКГСТАК

удлинением при 72°C в течение 10 мин.

аR

GGAAACACGTT

Стафилок

НУЦ-Ф

ядерный

GCGAT

279

4 мин при 94 °C, а затем 34 цикла

(Гогои)

эт

оккус

GATGGTGATACG

бп

по 1 мин при 94 °C для этапа

др., 2024)

золотистый стафилококк

ГТТ

денатурации и 45 с при 55 °C для

отжига и удлинения при 72 °C в

течение 45 с, затем

окончательное удлинение при

NUC-R

ядерный

AGCCAAGCCTTG

72 °C в течение 10 мин.

ACGAACTAAAGC

2.7 Электрофорез в агарозном геле

После проведения полимеразной цепной реакции полученные фрагменты ДНК анализировали методом

электрофореза в агарозном геле. Этот метод использовался для визуализации размеров фрагментов ДНК и

подтверждения наличия ДНК путем сравнения с ДНК-лэддером. Для приготовления геля порошок агарозы

(обычно 1,5-2%) смешивают с 2000 мкл 50-кратного буфера Трис-ацетат-ЭДТА (ТАЭ) и дистиллированной водой

(98%) и нагревают до полного растворения. Бромистый этидий, интеркалирующий агент, флуоресцирующий в

УФ-свете, добавляют в концентрации 4 мкл для визуализации ДНК. Продукты ПЦР аккуратно загружают в

лунки приготовленного геля с помощью стерилизованных (автоклавированных) наконечников микропипеток.

Гель разгоняют с использованием 10-кратного буфера ТАЭ в качестве рабочего буфера, что облегчает

движение ДНК к положительному полюсу. Для каждого анализа в качестве эталона используется 4 мкл ДНК-

леддера длиной 100 п.н. (Biolab), электрофорез проводится при напряжении 100 вольт и силе тока 400 ампер.

После завершения электрофореза гель исследуют в УФ-свете. Полосы ДНК становятся видимыми благодаря

связыванию флуоресцентного красителя, который испускает определённые цвета. Затем размеры полос

определяют, сравнивая их с полосами на ДНК-леддере, и результаты записывают соответствующим образом (

Addgene: Протокол - Как провести агарозный гель, nd). Ниже показаны четыре типа размеров полос.Рисунок

2(а), 2(б), 2(в) и 2(г).

Рисунок 2(а):Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаКлебсиелла пневмонииИзоляты. Здесь первая дорожка

представляет собой ДНК-лэддер длиной 100 п.н., вторая дорожка - отрицательный контроль, а лунки 3-14 -

положительные образцы длиной 130 п.н. Изображение получено с помощью камеры, агарозный гель был помещен

под УФ-трансиллюминатор. Для создания рисунка использовано полное исходное изображение.

Рисунок 2(б):Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаЗолотистый стафилококкИзоляты. Здесь первая

дорожка заполнена ДНК-лэддером длиной 100 п.н., вторая дорожка - отрицательный контроль, а дорожки 3-

11 - положительные образцы длиной 279 п.н. Изображение получено с помощью камеры, агарозный гель

был помещен под УФ-трансиллюминатор. Для создания рисунка использовано полное исходное изображение.

Рисунок 2(c):Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаСальмонелла брюшного тифаИзоляты. Здесь первая

дорожка - ДНК-лэддер длиной 100 п.н., вторая дорожка - отрицательный контроль, а дорожки № 3-10 -

положительные образцы длиной 403 п.н. Изображение получено с помощью камеры, агарозный гель был помещен

под УФ-трансиллюминатор. Для создания рисунка использовано полное исходное изображение.

Рисунок 2(г):Электрофорез в агарозном геле ПЦР-анализаКишечная палочкаИзоляты. Здесь первая дорожка

представляет собой ДНК-лэддер длиной 100 п.н., вторая дорожка - отрицательный контроль, а лунки 3-12 -

положительные образцы длиной 585 п.н. Изображение получено с помощью камеры, агарозный гель был помещен

под УФ-трансиллюминатор. Для создания рисунка использовано полное исходное изображение.

2.8 Тестирование чувствительности к антибиотикам

Тест на чувствительность к антибиотикам (AST) проводили с использованием метода диско-диффузии Кирби-Бауэра

для определения эффективности различных антибиотиков против выделенных бактерий. Каждый бактериальный

изолят из чашек с культурой пересевали на свежеприготовленный питательный агар для получения свежей и чистой

культуры перед проведением AST. Среда Мюллера-Хинтона (MHA) была свежеприготовлена для теста на

чувствительность к антибиотикам. Также готовили 0,9% раствор хлорида натрия (NaCl) путем растворения

соответствующего количества NaCl в дистиллированной воде и кратковременного нагревания. С помощью

стерильной стеклянной пипетки в каждую пробирку вносили по 5-6 мл раствора NaCl. Бактериальную суспензию

готовили путем отбора колоний из чистой культуры и доведения мутности до 0,5 по стандарту Макфарланда. Затем

суспензию равномерно распределяли по поверхности чашки с агаром Мюллера-Хинтона с помощью стерильного

ватного тампона для обеспечения равномерного роста бактерий. После того как чашки Петри подсохли в течение

нескольких минут, на поверхность агара стерильным пинцетом наносили диски с антибиотиками. Чашки

инкубировали при температуре 35-37 °C в течение 16-18 часов (Ян Худзицкий, 2009).

Зона торможения:

После 24 часов инкубации чашки Петри с агаром Мюллера-Хинтона (MHA) исследовали на наличие роста

бактерий вокруг дисков с антибиотиками. Если антибиотик эффективно подавляет рост тестируемого

микроорганизма, вокруг диска будет наблюдаться чистая область без роста бактерий, известная как зона

ингибирования. Напротив, если антибиотик менее эффективен или неэффективен, рост бактерий будет

распространяться ближе к диску, что приведет к уменьшению или отсутствию видимой зоны ингибирования.

Диаметр каждой зоны ингибирования измеряется с помощью линейки или шкалы для точной оценки степени

подавления роста бактерий. Затем эти измерения интерпретируются с использованием стандартизированных

референтных таблиц, предоставленных Oxoid Limited (Англия), которые классифицируют бактерии как

чувствительные, промежуточные или устойчивые к тестируемым антибиотикам. Этот метод интерпретации

соответствует рекомендациям Национальной системы мониторинга антимикробной резистентности и

Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI, 1997, 1999).Таблица 4: показывает концентрацию и

критерии интерпретации зон диффузии антибиотиков.

Таблица 4: Концентрации и критерии интерпретации зон диффузии антибиотиков.

Антибиотик

Группа

Эффективен против

Диск

Критерии интерпретации

код

потенция

Чувствительный

Средний

Устойчивый

(мкг)

мм или более

мм

мм или меньше

Азитромицин

Макролид

грамположительные

АЗМ

14-17

Грамотрицательные

Амикацин

Аминогликозид

грамположительные

АК

15-16

Грамотрицательные

Колистин

Полимиксин E

Грамотрицательные

КЛ

11-17

Цефепим

Цефалоспорин

грамположительные

СРМ

19-24

Грамотрицательные

Меропенем

Карбапенем

грамположительные

МЕМ

20-22

Грамотрицательные

Имипенем

Карбапенем

грамположительные

ИМИ

20-22

Грамотрицательные

Налидиксовая кислота

Хинолоны

Грамотрицательные

14-18

Стрептомицин

Аминогликозид

грамположительные

12-14

Грамотрицательные

Ампициллин

Бета-лактамаза

грамположительные

AMP

14-16

Грамотрицательные

Амоксициллин

Бета-лактам

грамположительные

ОМЛ

10 мкг

14-16

(Пенициллин)

Грамотрицательные

Ванкомицин

Гликопептид

грамположительные

ВА

15-16

Линезолид

Оксазолидиноны

грамположительные

ЛЗ

21-22

Тигециклин

Глицилциклин

грамположительные

ТГК

15-17

Грамотрицательные

Тетрациклин

Класс тетрациклинов

Широкий спектр действия (грам-

ТЕ

12-14

положительные и грам-

отрицательно)

Ципрофлоксацин

Фторхинолоны

Грам-препараты широкого спектра действия

CIP

16-20

отрицательный

Хлорамфеникол

Амфеникол

Широкий спектр действия (грам-

13-17

положительные и грам-

отрицательно)

Цефиксим

3-й

Ген

Грамотрицательные

ЦФМ

16-18

Цефалоспорин

Цефтазидим

3-й

Ген

Грамотрицательные

КАЗ

15-17

Цефалоспорин

Эритромицин

Макролид

В основном

грамположительные,

14-22

некоторый

Грамотрицательные

кокки

Гентамицин

Аминогликозид

Широкий спектр действия;

13-14

эффективен в основном против

грамотрицательных и

некоторые грамположительные

бактерии

Триметоприм-

Сульфаниламид

Широкий спектр действия;

много

SXT

11-15

Сульфаметоксазол

комбинация

грамположительные

Грамотрицательные бактерии

ГЛАВА 3

Результат

3.1Демографические характеристики пациентов

В этом исследовании приняли участие 80 человек, пациентов больницы Islami Bank в

отделениях Mirpur, Motijheel, Kakrail и Naya Paltan в Дакке. Среди этих участников 15 (18,75%)

были из отделения Islami Bank Hospital в Motijheel, в то время как 40 (50%) были из отделения

Mirpur, а остальные 15 (18,75%) и 10 (12,5%) пациентов были из отделений Naya Paltan и

Kakrail. Большинство участников исследования находились в возрасте от 40 до 80 лет. Причем

мужчины составляют большую часть в этом исследовании - 56,25%, а остальные 43,75% -

женщины. Среди пациентов большинство заразились в обществе и после этого были

госпитализированы. Краткая информация о демографических характеристиках пациентов

исследования представлена вТаблица 5. Таблица 5: Демографические характеристики

пациентов

Характеристики

Категории

Частота

Процент

Количество участников

Больница Исламского банка, Мирпур

50%

в этом исследовании

Больница Исламского банка, Мотиджхил

18,75%

Больница Исламского банка, Какраил

12,5%

Больница Исламского банка, Наяпалтан

18,75%

Пол

Мужской

56,25%

Женский

43,75%

Возраст (в годах)

0-19

12,5%

20-39

18,75%

40-59

25%

60+

43,75%

Тип пациента

Пациент

31,25%

Амбулаторное лечение

68,75%

3.2 Распространенность положительных изолятов у пациентов с сепсисом

Из 80 образцов рост бактерий наблюдался в 66. Распределение бактерий в этих образцах с положительным

результатом посева показано на рисунке.Рисунок 3Данные показывают, чтоСальмонелла брюшного тифа является

наиболее распространенным патогеном, ответственным за 65,2% положительных изолятов, при этом 43 из 80

образцов дали положительные результаты.Клебсиелла пневмонииДалее следует 9 положительных изолятов, что

составляет 13,6% от общего числа, в то время какКишечная палочкавыявлен у 8 изолятов, что составляет 12,1%.

Золотистый стафилококквстречается у 6 изолятов, что составляет 9,1% случаев.Все инфекции были вызваны одним и

тем же микроорганизмом.Эти результаты отражают распределение бактериальных патогенов в случаях септицемии

и подчеркивают доминированиеСальмонелла брюшного тифав наблюдаемой популяции пациентов.

Рисунок 3:Распространенность выделенных бактерий в 66 образцах с положительным результатом посева, взятых у

пациентов с подозрением на сепсис. Эта круговая диаграмма показывает распределение выделенных патогенов,

выявленных у пациентов с сепсисом.Сальмонелла брюшного тифа65,2% от общего числа изолятов, за которыми следуют

Клебсиелла пневмониина 13,6%,Кишечная палочкана 12,1% иЗолотистый стафилококкна уровне 9,1%.

3.3 Устойчивость к антибиотикам и профиль чувствительности положительных выделенных организмов

В данном исследовании было отобрано 80 изолятов для определения устойчивости к антибиотикам различных

микроорганизмов. Для каждого изолята был проведен диско-диффузионный тест Кирби-Бауэра. Всего было отобрано

8 изолятовКишечная палочка, 43 изолятаСальмонелла брюшного тифа, 9 изолятовКлебсиелла пневмонии, и 6

изолятовЗолотистый стафилококкбыли исследованы на чувствительность к антибиотикам. Рисунок 4(а), 4(б), 4(в),

4(г)демонстрирует все профили чувствительности к антибиотикам для конкретных бактерий. Рисунок 5Показана

множественная и широкая лекарственная устойчивость (МЛУ), а также чувствительность всех изолятов. Для

достижения наилучших результатов лечения эти данные подчеркивают важность концентрации на

высокоэффективных антибиотиках и избегания антибиотиков с высокой устойчивостью.

Анализ чувствительности к антибиотикамСальмонелла брюшного тифа:

Из всех положительныхИзоляты Salmonella typhiпоказали относительно высокую чувствительность к

антибиотикам, за исключением налидиксовой кислоты (89%) и ампициллина (79%), которые

продемонстрировали значительную резистентность. Эффективность этих 12 антибиотиков против изолятов

представлена на графике. Рисунок 4(а)Ниже. Из графика видно, что хлорамфеникол, цефтазидим,

гентамицин, цефтриаксон и меропенем показали высокую чувствительность: 90-100% штаммов оказались

чувствительными.

Рисунок 4(а):Профилирование чувствительности к антибиотикамСальмонелла брюшного тифаОбщее количество изолятов составило 43.

Анализ чувствительности к антибиотикамКлебсиелла пневмонии:

Большинство позитиваКлебсиелла пневмонииИзоляты продемонстрировали относительно высокую

чувствительность к антибиотикам, за исключением амоксициллина (68%) и цефиксима (79%), которые

продемонстрировали значительную резистентность, а также эритромицина (39%), продемонстрировавшего

сравнительно низкую резистентность. Эффективность этих 12 антибиотиков против изолятов представлена на

рисунке.4(б)Ниже. Из графика видно, что ципрофлоксацин, азитромицин, гентамицин, тетрациклин, тигециклин и

меропенем показали высокую чувствительность: от 75% до 98% штаммов оказались чувствительными.

Рисунок 4(б):Чувствительность к антибиотикамКлебсиелла пневмонии.Общее количество изолятов составило 9.

Анализ чувствительности к антибиотикамКишечная палочка:

Из всех положительныхКишечная палочкаИзоляты показали относительно высокую чувствительность к

антибиотикам, за исключением амоксициллина (80%) и ампициллина (99%), которые продемонстрировали

значительную резистентность. Устойчивость положительных изолятов к цефиксиму (58%), цефтриаксону (28%)

и тетрациклину (38%). Эффективность этих 12 антибиотиков против изолятов представлена на графике.

Рисунок 4(c)Ниже. Из графика видно, что азитромицин, хлорамфеникол, ципрофлоксацин, имипенем,

колистин, тигециклин и гентамицин показали высокую чувствительность: 100% штаммов оказались

чувствительными.

Рисунок 4(c):Профилирование чувствительности к антибиотикамКишечная палочкаОбщее количество изолятов составило

Анализ чувствительности к антибиотикамЗолотистый стафилококк:

Из всех положительныхИзоляты золотистого стафилококкадемонстрировали относительно высокую

чувствительность к антибиотикам, за исключением цефиксима, сульфаметоксазола и цефтазидима, где

резистентность составила 49%. Эритромицин и цефтриаксон продемонстрировали резистентность в 28%

случаев среди положительных изолятов. Имипенем и гентамицин продемонстрировали резистентность в

19%, что сравнительно ниже. Эффективность этих 12 антибиотиков против изолятов представлена на графике.

Рисунок 4(г)Ниже. Из графика видно, что азитромицин, ципрофлоксацин, тигециклин, ванкомицин,

тетрациклин и имипенем показали высокую чувствительность: от 85% до 100% положительных изолятов.

Рисунок 4(г):График, показывающий устойчивость и чувствительность к различным антибиотикам

Золотистый стафилококк.Общее количество изолятов составило 6.

3.4: Бактерии с множественной лекарственной устойчивостью

Среди всех положительных изолятовСальмонелла брюшного тифапоказывает 16,67% для MDR и 2,32% для XDR. MDR вклебсиелла

пневмонииИзоляты показали 66,67% с 11% XDR.Кишечная палочкаУ 25% пациентов наблюдалась множественная лекарственная

устойчивость, но не широкая лекарственная устойчивость. Наконец, грамположительные бактерииЗолотистый стафилококкМЛУ

наблюдалась у 50% и ХЛУ у 16,67% пациентов. График(Рисунок 5)показанный ниже шаблон MDR и XDR,

Организм

МДР

XDR

Сальмонелла брюшного тифа (N=43)

7 (16,67%)

1(2,32%)

Escherichia coli(N=8)

2 (25%)

Клебсиелла

6 (66,67%)

1(11%)

пневмонии (N=9)

Стафилококк

3 (50%)

1 (16,67%)

золотистый стафилококк (N=6)

Рисунок 5:Таблица, показывающая паттерны MDR и XDR

ГЛАВА 4

Обсуждение

Целью данного исследования была оценка бактериологического профиля и характера антибиотикорезистентности

возбудителей сепсиса среди пациентов с диагнозом в четырёх отделениях больницы Исламского банка в городе

Дакка, Бангладеш. Результаты исследования показали, что из 80 образцов, Сальмонелла брюшного тифабыл

наиболее распространенным патогеном, на долю которого пришлось 65,2% изолятов, за которым следовал

Клебсиелла пневмонии(13,6%),Кишечная палочка(12,1%), иЗолотистый стафилококк(9,1%). Это исследование

согласуется с международными и местными моделямиSalmonella typhi, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,и

Золотистый стафилококкявляются преобладающими возбудителями инфекций кровотока (ИК). Распространенность

Сальмонелла брюшного тифав этом исследовании (65,2%) согласуется с результатами из Катманду, Непал, где

Сальмонелла брюшного тифасоставили 71% изолятов, выделенных из крови (Симкхада, 2016). Высокая

распространенностьСальмонелла брюшного тифаВ обоих исследованиях это можно объяснить

распространённостью брюшного тифа в странах с низким уровнем санитарии и загрязнением воды. Брюшной тиф,

который до сих пор не ликвидирован, продолжает вызывать сепсис (Симкхада, 2016); поэтому неудивительно, что в

данном исследованииСальмонелла брюшного тифабыл ведущим патогеном с 65,2% изолятов. Дагнью и др. (2013)

сообщили о схожих результатах в Эфиопии и Непале, гдеСальмонелла брюшного тифадоминировал среди

возбудителей септицемии.

Распространенностьклебсиелла пневмониив нашем исследовании (13,6%) намного ниже по сравнению с данными по

странам Африки к югу от Сахары (54,4%).Escherichia Coliв вашем исследовании (12,1%) немного ниже

чем в исследовании, проведенном в странах Африки к югу от Сахары (18,4%) (Лестер и др., 2019).По нашим данным

анализ, распространенностьЗолотистый стафилококкбыл поразительно низким и составил 9,1%, в отличие от других

исследований, проведенных в Бангладеш, которые отметили более высокую распространенность, гдеЗолотистый

стафилококкЧаще ассоциировалось с септицемией. В частности, это одно из сравнений, которое можно провести

относительно использования бактериальных инфекций в текущем исследовании.Золотистый стафилококкдля предыдущих

исследований, проведенных в том же регионе. В отличие от исследований, проведенных в Мименсингхе (Бангладеш), где

сообщалось о распространенности около 20%, в текущем исследовании была выявлена более низкая распространенность -

9,1%. Это, вероятно, связано с различиями в условиях стационаров или специфическими тенденциями устойчивости к

антибиотикам, определяющими распространенность.Золотистый стафилококк

инфекций в обществе. Это объясняется различными причинами, включая различия в популяциях пациентов,

условиях оказания медицинской помощи или методологиях исследований (Khan et al., 2024).

Анализ исследования показал, что септицемия преимущественно наблюдалась у пожилых людей (60 лет и

старше), что составило 43,75% случаев, за ними следовала возрастная группа 40-59 лет с 25%. Это согласуется с

данными других международных обзоров, где указано, что пожилые люди (≥65) составляют58-65%случаев

сепсиса (Starr & Saito, 2014). Поскольку септицемия чаще встречается у пожилых людей из-за иммуностарения

(ослабления иммунной системы в результате старения), связанного с повышенной уязвимостью к инфекциям

(Opal et al., 2005), гериатрическое население продолжает подвергаться риску некоторых инфекций, особенно

вызванныхSalmonella typhi, Escherichia coli, и Клебсиелла пневмониичто может привести к потенциально

разрушительным осложнениям, если их не лечить своевременно. Что касается пола, то в этом исследовании

мужчины численно превосходили женщин, 56,25% и 43,75% соответственно. Преобладание мужчин в случаях

сепсиса постоянно сообщается во всем мире. В Ухане исследование выявило 61% мужчин и 39% женщин

среди 2111 пациентов с сепсисом (Zhao et al., 2025). Это несоответствие также согласуется с другими

исследованиями, которые демонстрируют, что мужчины подвергаются более высокому риску сепсиса из-за

различий в иммунных реакциях (Pradipta et al., 2013). Известно, что иммунный ответ женщин усиливается из-

за присутствия эстрогенов, что дает женщинам лучшую защиту от инфекций, особенно в условиях

сообщества.

Данное исследование выявляет тенденцию к росту устойчивости к противомикробным препаратам в Бангладеш. Устойчивость к

противомикробным препаратам (УПП) остаётся серьёзной проблемой глобального здравоохранения, причём в развивающихся

странах, таких как Бангладеш, этот показатель особенно высок из-за таких факторов, как неконтролируемое использование

антибиотиков и неадекватная инфраструктура здравоохранения. В данном исследованииСальмонелла брюшного тифа(65,2%),

Клебсиелла пневмонии(13,6%), иКишечная палочка(12,1%) были наиболее распространенными возбудителями у пациентов с

сепсисом, что отражает аналогичную картину, наблюдаемую в других странах. Например, в Непале Сальмонелла брюшного тифабыл

ответственен за 71% инфекций кровотока (Симкхада, 2016), тогда как в Эфиопии,Клебсиелла пневмониииКишечная палочкаОни

также были основными причинами сепсиса, с частотой резистентности к амоксициллину 68% и к цефиксиму 79% (Dagnew et al., 2013).

В наших исследованиях Сальмонелла брюшного тифапоказали устойчивость к налидиксовой кислоте (89%) и ампициллину (79%).

Устойчивость к широко используемым антибиотикам, таким как ампициллин, азитромицин и налидиксовая кислота, в данном

исследовании отражает тенденции в Индии, гдеКлебсиелла пневмониииКишечная палочкадемонстрируют схожие паттерны

резистентности к бета-лактамам и фторхинолонам (Khan et al., 2022). Однако исследование показало относительно низкий уровень

распространенностьЗолотистый стафилококк(9,1%), что контрастирует с другими исследованиями в Бангладеш и во всем мире, где

Золотистый стафилококкОбычно составляет большую часть случаев септицемии (Khan et al., 2024). Кроме того, резистентность к

колистину, выявленная в исследовании, согласуется с растущей обеспокоенностью в таких странах, как Китай и Индия, где

резистентность к колистину становится новой угрозой общественному здравоохранению, особенно при инфекциях, вызванных

множественной лекарственной устойчивостью грамотрицательных бактерий (Zhu et al., 2021). Напротив, в данном исследовании

колистин оказался более эффективным антибиотиком противSalmonella typhi, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,иЗолотистый

стафилококк.Хотя показатели резистентности в странах с высоким уровнем дохода, таких как США, сравнительно ниже, растущее

глобальное распространение патогенов с множественной и множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) подчеркивает

необходимость внедрения надежных мер инфекционного контроля, более эффективных систем эпиднадзора и эффективных

программ рационального использования антибиотиков во всем мире (Smith et al., 2023). Патогены с множественной лекарственной

устойчивостью (МЛУ) вызывают растущую глобальную озабоченность, о чем свидетельствует высокая распространенность МЛУ.

Salmonella typhi, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli,иЗолотистый стафилококк В этом исследовании. Изоляты 16,67%Сальмонелла

брюшного тифабыли идентифицированы как МЛУ, а 2,32% были классифицированы как с широкой лекарственной устойчивостью

(ШЛУ). Кроме того,Клебсиелла пневмонииИзоляты показали 66,67% MDR, 11% были XDR, в то время какКишечная палочкаизолятов

показали 25% МЛУ, иЗолотистый стафилококкУ изолятов было выявлено 50% случаев множественной лекарственной устойчивости

(МЛУ) и 16,67% случаев множественной лекарственной устойчивости (ШЛУ). Аналогичные результаты были получены и в других

странах, например, в Индии, где 50%Сальмонелла брюшного тифа изоляты были MDR (Khan et al., 2022) и Эфиопия, где 40%

Клебсиелла пневмонии Изоляты были устойчивы к нескольким препаратам (Dagnew et al., 2013). Напротив, распространённость

штаммов с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) в развитых странах, таких как США, относительно ниже: частота МЛУ

Klebsiella pneumoniae составляет около 15-20% (Smith et al., 2023). Частота МЛУ, зарегистрированная в исследовании, проведённом в

Южной Индии, составила 24,6%Кишечная палочкаИзоляты, полученные при инфекциях кровотока, продемонстрировали

множественную лекарственную устойчивость (Babu et al., 2018). Глобальный рост числа патогенов с множественной лекарственной

устойчивостью (МЛУ) и широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ) подчеркивает необходимость улучшения инфекционного

контроля, рационального использования антибиотиков и своевременной диагностики для эффективного контроля устойчивости к

противомикробным препаратам (УПП) как в странах с высоким, так и с низким уровнем дохода (Bayot & Bragg, 2024).

ГЛАВА 5

Заключение

Наши исследования показали, что большинство патогенов уже устойчивы к таким антибиотикам, как Амикацин, гентамицин,

имипенем, тигециклин, линезолид и ванкомицин.Возраст, пол и иммунитет также могут играть роль в частоте развития

сепсиса и эффективности антибиотиков. В нашем исследовании большинство пациентов с сепсисом были старше 60 лет

(43%) и мужчинами (56,25%). Толщина пептидогликанового слоя на поверхности бактерий может влиять на их патогенность.

Наше исследование показало, что 77% пациентов были инфицированы грамотрицательными бактериями, особенно

Сальмонелла брюшного тифаТем не менее, данные о чувствительности к антибиотикам не являются универсальными и

постоянными, поскольку чувствительность или резистентность к антибиотикам варьируются от штамма к штамму, и

результаты будут различаться в зависимости от местоположения или континента. Кроме того, антибиотики, которые в

настоящее время эффективны против патогена, могут не сохранять ту же эффективность через несколько лет. Некоторые из

них могут даже приобретать множественную лекарственную устойчивость. Это происходит потому, что антибиотики

оказывают селективное давление на микробы, или потому, что они вынуждены выживать, эволюционируя с новыми генами

устойчивости к антибиотикам, которые быстро распространяются в микробном царстве (путем горизонтального и

вертикального переноса генов). Тем не менее, нам необходимо продолжить тщательное лонгитюдное исследование с более

крупными размерами выборки (по возможности ежегодно), чтобы подтвердить результаты исследования и получить более

глубокое понимание.

ГЛАВА 6

Ссылки

1.Addgene: Протокол - Как провести агарозный гель. (й). https://

www.addgene.org/protocols/gel-electrophoresis/

2.Ахмед И., Рабби М.Б., Султана С. Устойчивость к антибиотикам в Бангладеш: систематический обзор. Int J

Infect Dis. 2019 Mar;80:54-61.Устойчивость к антибиотикам в Бангладеш: систематический обзор -

PubMed

3. Энн К. Смит, Марис А. Хасси (2005), Протоколы окрашивания по Граму, Американское общество

микробиологии,https://asm.org/getattachment/5c95a063-326b-4b2f-98ce-001de9a5ece3/gram-stain-

protocol-2886.pdf

4. Бабу, М., Менон, В.П., и П., У.Д. (2018). Распространенность резистентных к противомикробным

препаратам патогенов у пациентов с тяжелым сепсисом и септическим шоком.Журнал молодых

фармацевтов, 10(3), 358-361.https://doi.org/10.5530/jyp.2018.10.79

5. Барал П., Афнан Н., Захра М.А., Актер Б., Прапти С.Р., Хоссан М.М. и Хак Ф.К.

М. (2024). Бактериологический анализ и резистентность к антибиотикам у пациентов с

диабетическими язвами стопы в Дакке.ПлоСОН,19(5),e0301767.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0301767

6. Байот, М.Л., и Брэгг, Б.Н. (27 мая 2024 г.).Тестирование чувствительности к антимикробным препаратам.

StatPearls - Книжная полка NCBI.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK539714/

7. Бепари, А.К., Рабби, Г., Шаон, Х.Р., Хан, С.И., Захид, З.И., Далал, К. и Реза, Х.М. (2023a). Факторы,

способствующие развитию устойчивости к противомикробным препаратам в сельских районах

Бангладеш: поперечный анализ знаний, отношения и практики применения антибиотиков

среди неквалифицированных сельских врачей и владельцев аптек.Достижения в терапии,40(8),

3478-3494.https://doi.org/10.1007/s12325-023-02547-5

8. Лаборатории Био-Рад. (2011).Диски для определения чувствительности к антибиотикам: коды и

интерпретация

критерии.

https://commerce.bio-

rad.com/webroot/web/pdf/inserts/CDG/en/Literature/inserts/66098_01_2011_GB.pdf

9. Дагнью М., Исмау Г., Гизачев М., Гадиса А., Абебе Т., Тадессе Т., Алему А. и Матевос Б. (2013).

Бактериальный профиль и характер чувствительности к противомикробным препаратам у

Пациенты с подозрением на септицемию, посещающие университетскую больницу Гондэра на северо-западе

Эфиопии. Исследовательские заметки BMC,6(1).https://doi.org/10.1186/1756-0500-6-283

10. Даштиан, К., Гешлаги, Ф.А., Заре-Дорабей, Р. и Махдави, М. (2024). Массив нанозимов,

полученных на основе аналогов берлинской лазури с молекулярной печатью, для обнаружения

септицемии.ACS Applied BioMaterials,7(5), 3346-3357.https://doi.org/10.1021/acsabm.4c00297

11. Гарберн С.С., Мамун Г.М.С., Шайма С.Н., Хаким Н., Вегерих С., Алла С., Сармин,

М., Афрозе, Ф., Секарик, Дж., Гениска, А., Кадакия, Н., Шоу, К., Рахман, ASMMH, Гейни, М., Ахмед,

Т., Чисти, М.Дж., и Левин, А.С. (2024). Новый подход к цифровому здравоохранению для

улучшения глобальной помощи детям с сепсисом в Бангладеш с использованием носимых

устройств и машинного обучения.Цифровое здравоохранение PLOS,3(10), e0000634. https://

doi.org/10.1371/journal.pdig.0000634

12. Гогои, М., Четиа, П., Пегу, Р.К. и Рой, Дж.Д. (2024). Нацеливание на ген nuc для обнаружения

золотистого стафилококка в образцах коровьего молока из Ассама, Индия, и фенотипическая

идентификация устойчивости к антибиотикам - новое понимание.Журнал чистой и

прикладной микробиологии.https://doi.org/10.22207/jpam.18.4.52

13. Гучер Л.С., Пынарлык Ф., Фарзана Р., Атач Н., Генч З., Мадран Б., Бюльбюль И.С., Шахин,

Ф., Зенгель, Б.Е., Тиген, Э.Т., Илки, А., Сари, Н., Азап, О.К., Кан, Ф., Уолш, Т.Р. и Эргёнюль, О. (2024).

Устойчивость к противомикробным препаратам и варианты лечения инфекций кровотока:

проспективное наблюдательное исследование.Журнал глобальной устойчивости к

противомикробным препаратам, 39, 28-29.https://doi.org/10.1016/j.jgar.2024.10.088

14. Грин, М.Р., и Сэмбрук, Дж. (2012).Молекулярное клонирование: лабораторное руководство(4-е изд.).

Cold Spring Harbor Laboratory Press.

15. Халим, М.Р., и Нишат, Р.Дж. (2024). Возможности и проблемы применения

цитосорба при лечении сепсиса. Bangladesh Critical Care Journal, 12(2), 79-80.

https://doi.org/10.3329/bccj.v12i2.76439

16.Ян Худзицкий. (2009). Протокол теста на восприимчивость к диффузии на диске Кирби-

Бауэра. АМЕРИКАНСКОЕ ОБЩЕСТВО МИКРОБИОЛОГИИ. Получено 15 мая 2025 г. из

https://asm.org/getattachment/2594ce26-bd44-47f6-8287-0657aa9185ad/kirby-bauerdisk-

diffusion-susceptibility-test-protocol-pdf.pdf

17.Хан М.С., Мамун А.А., Хан М.С.И., Сати ФА, Пол СК., Насрим СА, Хак Н., Арафа П., Нила СС., Рой С., Нахар

А. Паттерны восприимчивости к антимикробным препаратам бактериальных изолятов из крови

Посев образцов у детей с подозрением на сепсис в больнице третьего уровня оказания помощи в

Мименсингхе, Бангладеш.Mymensingh Med J.2024 Янв;33(1):49-61.Паттерны чувствительности к

антимикробным препаратам бактериальных изолятов, выделенных из крови детей с подозрением на

сепсис в больнице третьего уровня медицинской помощи в Мименсингхе, Бангладеш - PubMed

18.Кингсли, О.К., Ифеани, А.О., Эдет, А.Е., и Смарт, О.К. (2013). Бактериологический профиль и

картина восприимчивости к антибиотикам у пациентов с подозрением на сепсис в Уйо,

Нигерия.Res J Med Sci,7(2), 35-39.

19.Leung, LY, Huang, H., Hung, KK, Leung, CY, Lam, CC, Lo, RS, Yeung, CY, Tsoi, PJ, Lai, M., Brabrand,

M., Walline, JH, & Graham, CA (2024). Время от момента назначения антибиотика до начала

лечения и смертность у пациентов с сепсисом: систематический обзор и метаанализ.

Европейский журнал внутренней медицины,129,

48-61.

https://doi.org/10.1016/j.ejim.2024.06.015

20. Лестер, Р., Музиха, П., Ван Гиннекен, Н., Драмовски, А., Хамер, Д. Х., Гарнер, П. и Физи, Н. А. (2019).

Распространенность и исходы инфекций кровотока, вызванных энтеробактериями третьего

поколения, устойчивыми к цефалоспоринам, в странах Африки к югу от Сахары:

систематический обзор.Журнал антимикробной химиотерапии,75(3), 492-507.

https://doi.org/10.1093/jac/dkz464

21.Линдси, Р.Л., Гарсия-Толедо, Л., Фасуло, Д., Глэдни, Л. и Строкбайн, Н. (2017).

Мультиплексная полимеразная цепная реакция для идентификации Escherichia coli,

Escherichia albertii и Escherichia fergusonii.Журнал микробиологических методов,140, 1-

4. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2017.06.005

22. Лоренц, TC (2012). Полимеразная цепная реакция: базовый протокол, а также стратегии

устранения неполадок и оптимизации.Журнал визуализированных экспериментов,63.

https://doi.org/10.3791/3998

23. Мур, Эдвард и Арншайдт, А. и Крюгер, А. и Стрёмпл, Карстен и Мау, М. (2004).

Упрощённые протоколы получения геномной ДНК из бактериальных культур.

24. Опал, С.М., Жирар, Т.Д., и Эли, Э.В. (2005). Иммунопатогенез сепсиса у пожилых

пациентов.Клинические инфекционные заболевания,41(Приложение 7), S504-S512.

https://doi.org/10.1086/432007

25. Прадипта И., Содик Д., Парвати И., Лестари К., Халима Э., Диантини А. и Абдула Р.

(2013). Устойчивость к антибиотикам у пациентов с сепсисом: оценка и рекомендации

применение антибиотиков.Североамериканский журнал медицинских наук,5(6), 344.

https://doi.org/10.4103/1947-2714.114165

26. Пракаш Симкхада и Университет Трибхуван, Непал. (2016). Бактериологический профиль и картина

восприимчивости к антибиотикам изолятов крови пациентов, посещающих больницы третичного

уровня медицинской помощи в Катманду, Непал.Глобальный журнал медицинских исследований:

Микробиология и патология,16(1).https://www.researchgate.net/profile/Upendra-Thapa-

Shrestha/publication/

305205543_Бактериологический_профиль_и_чувствительность_к_антибиотикам_паттерн_изолятов_посещения_крови_от_паци

links/57849a0a08ae37d3af6c24d9/Бактериологический-профиль-и-чувствительность-к-антибиотикам-

паттерн-изолятов-посещения-крови-от-пациентов_при_посещении-больницы_третичного_ухода-в-

Катманду-Непале.pdf

27. Ранджбар, Р., Нагони, А., Афшар, Д., Никхахи, Ф. и Мохаммади, М. (2016). Быстрый молекулярный

подход для одновременного обнаружения Salmonella spp., Shigella spp. и Vibrio cholera.

Перспективы общественного здравоохранения и исследований в Осонге,7(6), 373-377. https://

doi.org/10.1016/j.phrp.2016.10.002

28. Сайки, Р.К. и др. (1988). Ферментативная амплификация ДНК, направленная на праймер, с

использованием термостабильной ДНК-полимеразы.Наука, 239(4839), 487-491.

https://doi.org/10.1126/science.2448875

29. Takara Bio Inc. Руководство по применению основной смеси для ПЦР EmeraldAmp.

https://www.takarabio.com (для точного состава буфера и смеси)

30.VETBact. (й).https://www.vetbact.org/biochemtest/1/

31. Вашингтон JA 2nd, Ю PK, Гаван TL, Шёнкнехт FD, Торнсберри C. Интерпретация

диско-диффузионного теста на восприимчивость к амикацину: отчёт о

совместном исследовании. AntimicrobAgentsChemother.1979 Mar;15(3):400-7.

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/464567/

32. Захра М.А., Тома Т.Т., Насрин С., Зарин ЗТР, Хан ЗТСЭ и Хак Ф.К.

М. (2025). Характеристика сосуществования изолятов Escherichia coli и Klebsiella

pneumoniae, продуцирующих металло-β-лактамазы и β-лактамазы расширенного

спектра, в пробах сточных вод Дакки, Бангладеш.Журнал «Вода и здоровье».

https://doi.org/10.2166/wh.2025.286